RT-PCR技术原理

RT-PCR技术原理简介张晓涛RT-PCR简介RT-PCR（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）即逆转录PCRRT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。RT-PCR原理掌握PCR技术。学会操作RT-PCR简介PCR仪。熟悉琼脂糖凝胶电泳技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR两种方法RT-PCR反应体系RT引物的选择RT逆转录酶的选择RT-PCR操作流程1.从细胞或特定组织中提取总RNA；2.逆转录实验；3.扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。实验流程（两步法）实验流程（一步法）RT实验要素—决定特异性和灵敏度问题（一）RT-PCR没有产物原因对策问题（二）非特异性扩增原因对策