一次性使用卫生用品微生物限度检查

一次性使用卫生用品的细菌、真菌总数检查（2人一组）实验实训中心实验实训中心朱庆玲（2人一组）2016-9-211一次性使用卫生用品微生物学检查的意义确定该物品是否污染或其污染程度，控制其质量；保证使用的有效性和安全性；保证使用的有效性和安全性；可作为衡量一次性使用卫生用品生产全过程卫生水平的根据之一。2016-9-212一次性使用卫生用品微生物学检查内容内容无菌检查微生物总数检查微生物限度检查微生物总数检查致病菌检查2016-9-213一、基础知识微生物一①若细菌总数达到标准规定，判供试品细菌真菌总数符合规定。②若细菌总数超过标准规定，需重新取留存样品，同法独立复检2次。将留存的复检样品依前法复测2次，2微生物限度检查结果判断将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到本标准的规定，则判定被检样品合格。其中有任何1次结果平均值超过本标准规定，则判定被检样品不合格。真菌总数结果计算及结果判断方法与细菌总数检查相同。2016-9-214一、基础知识环境要求:无菌室内进行。背景洁净度10,000级下的局部100级。微生物二部100级。操作人员：卫生、着装符合要求。操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。微生物限度检查环境和人员要求2016-9-215一、基础知识细菌三1.检查数量及检验量细菌真菌总数检查2016-9-216一、基础知识细菌三2.培养条件细菌真菌总数检查2016-9-217一、基础知识细菌真菌三3.方法：常规平板法混合平板的制备细菌、真菌的培养供试液的制备真菌总数检查数据处理的制备菌的培养检查结果观察与计数与计数的制备书写检验记录单2016-9-218一、基础知识细菌㈤4.方法：薄膜过滤法，适用于有抑菌活性或含菌量较少的供试品10g或10ml供试品取相当于1g供试液用滤膜过滤、冲洗，滤膜孔径小于0.45um细菌真菌总数检查供试品10－1供试液膜孔径小于0.45um取下滤膜，菌面朝上放培养基上培养结果观察与计数数据处理书写检验记录单2016-9-219二、实训操作－常规平板法（一）实训目的掌握一次性使用卫生用品中细菌、真菌总数检查的程序和方法；熟悉细菌、真菌总数检查原理；了解细菌、真菌总数检测的实际意义；能够规范书写检验报告书。2016-9-2110二、实训操作－常规平板法（二）实训原理将供试品按倍比稀释，取1ml的某一稀释级供将供试品按倍比稀释，取1ml的某一稀释级供试液放置于无菌培养皿中，加入琼脂培养基，混匀,凝固后倒置于恒温培养箱中培养，一定时间后，一个菌长成一个菌落，清点平板中的菌落数，按公式计算即可得每克供试品中所含的活菌数。2016-9-2111二、实训操作－常规平板法（三）实训材料1恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、2营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼3湿纸巾恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、冰箱、烧杯、锥形瓶、量筒、试管、天平、培养皿、吸量管、玻璃棒、棉塞、电热套、精密pH试纸、记号笔、牛皮纸、棉绳、酒精灯、火柴等营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、蒸馏水、氯化钠、1.0mol/L氢氧化钠、1.0mol/L盐酸。湿纸巾2016-9-2112二、实训操作－常规平板法（四）实训过程1实训用液、培养基的配制和仪器的包扎配制生理盐水（稀释液）配制生理盐水（稀释液）配制营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基包扎培养皿12套、1ml吸量管2-3支贴标签灭菌2016-9-21131.生理盐水（210ml/组）氯化钠1.9g蒸馏水210ml溶解分1瓶，每瓶200ml，同时每瓶加10粒玻璃珠分1支，每支10ml2.营养琼脂培养基（100ml/组）营养琼脂培养基3.3g蒸馏水100ml煮沸溶解补水调PH值7.6分1瓶，每瓶加塞包扎做记号加塞包扎做记号蒸馏水100ml值7.6每瓶100ml4.仪器包扎（每组用量）培养皿12套、1ml吸量管3支包扎做记号3.玫瑰红钠琼脂培养基（100ml/组）玫瑰红钠琼脂培养基3.2g蒸馏水100ml煮沸溶解补水分1瓶，每瓶100ml加塞包扎做记号做记号2016-9-2114二、实训操作－常规平板法（四）实训过程2细菌、真菌总数检查流程每皿1.0ml生理盐水1:20取3包湿纸巾打开包装，用剪刀剪碎，然后再称取10g湿纸巾各平皿先加1ml对应的溶液，然后每个平皿再加入约15ml倒置培养48h营养琼脂玫瑰红钠琼脂倒置培养7天五个平行五个平行35℃±2℃25℃±2℃入约15ml的对应琼脂培养基2016-9-2115二、实训操作－常规平板法（四）实训过程3细菌、真菌总数培养和计数将凝固后的混合平板倒置于恒温培养箱，细菌35℃±2℃培养2d，真菌25℃±2℃培养7天。取出点计平皿中的菌落数。结果计算：结果计算：X1---供试品的细菌总数cfu/g或cfu/ml，注：cfu为菌落形成单位；A---5个含供试液混合平板中的细菌菌落总数；K---稀释度X1=K×5A2016-9-2116二、实训操作－常规平板法4细菌、真菌总数结果判断2016-9-21174细菌、真菌总数结果判断（四）实训过程真菌总数检查操作方法与细菌的相同，但培养条件有差异。真菌总数检查采用沙氏琼脂培养基（玫瑰红钠琼脂培养基），置于琼脂培养基（玫瑰红钠琼脂培养基），置于25℃±2℃培养7d。分别于第3、5、7天观察，计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。结果计算及结果判断方法与细菌总数检查相同。2016-9-2118二、实训操作－常规平板法（五）实训过程的注意事项实训过程要严格无菌操作。供试液稀释及注入培养皿时应摇匀再取，供试液供试液稀释及注入培养皿时应摇匀再取，供试液从制备至加入培养基不得超过一小时。掌握好培养基的倒入温度，不宜太高或太低。混合平板要倒置培养，掌握培养温度与培养时间。2016-9-2119二、实训操作－常规平板法（五）实训过程的注意事项结果菌落呈片状生长的平板不宜采用。当菌落总数在100以内，按实有数报告；若大于100，采用两位有效数字报告。100，采用两位有效数字报告。2016-9-2120二、实训操作－常规平板法（六）思考在含样品稀释液的培养皿中加培养基时，培养基的温度为什么须控制在45℃左右？为什么要检定一次性卫生用品中的细菌和真菌总数？细菌总数检查与真菌总数检查有哪些相同和不同点？2016-9-2121部分医疗、卫生用品的微生物限度标准2016-9-2122检验标准《一次性使用医疗用品卫生标准》GB15980-2009，行业标准。《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002，2002年9月1日起实施的行业标准。准。《中国药典》2015年版，二部附录ⅪJ微生物限度检查。2016-9-2123ThanksYou！ThanksYou！2016-9-2124