实验一、槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树（SophorajaponicaL.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。二、实验部分（一）实验目的1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。（二）实验原理1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：槐米50g(每组)。2、仪器：电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。（四）实验方法1、芦丁的提取：（碱提酸沉法）取槐米50g，加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min，随时补充失去的水分及控制PH值，四层纱布过滤，药渣再重复处理一次（不用调PH值）。合并两次滤液，用浓盐酸调PH=3，放入冰箱中析晶。2、芦丁的精制：（水重结晶法）（1）抽滤：用虹吸法先除去上清液，再进行抽滤，可更换滤纸。（2）精制：取全部芦丁粗品，加入蒸馏水800ml，煮沸至全部溶解（15min），趁热抽滤，放入冰箱析晶。3、芦丁的水解：（酸水解法）取芦丁1g，加入2%硫酸150ml，小火加热微沸30min，注意观察现象：溶液由浑浊变澄清，逐渐析出黄色结晶，抽滤，得到槲皮素粗品。剩下的芦丁要妥善保管，下次课还要带来。4、鉴别反应（1）称槲皮素重量，计算水解率。（2）薄层色谱鉴定样品：自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。（每组称取20mg）对照品：芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液。展开剂：90%乙醇溶液显色：喷三氯化铝溶液，紫外光（365nm）观察荧光。实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。（3）显色反应①Molish反应：取芸香苷及槲皮素样品分别1ml，加入3%α-萘酚溶液1滴，振摇，沿壁滴加浓硫酸1ml，观察现象。②盐酸-镁粉反应：分别取样品1ml，加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉，观察现象。③纸片反应：取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液1滴，观察现象。（同理，再用醋酸镁显色）（五）注意事项1、提取时控制小火加热，微沸即可。2、加热完成后要放冷抽滤。3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。4、用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。5、Molish反应中加入浓硫酸后不可振摇。6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好，否则荧光颜色淡或没有。（六）思考题1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响？2、加石灰乳和硼砂分别有何目的？