公告(2016年第8号)-维生素K2检测方法

附件3L-苏糖酸镁等3种食品营养强化剂新品种维生素K2（发酵法）英文名称：VitaminK2（Fermentation）功能分类：食品营养强化剂（一）用量及使用范围食品分类号食品类别（名称）使用量01.03.02调制乳粉（仅限儿童用乳粉）420μg/kg~750μg/kg调制乳粉（仅限孕产妇用乳粉）340μg/kg~680μg/kg（二）质量规格要求1范围本质量规格要求适用于以大豆粉、白砂糖、葡萄糖经纳豆枯草芽孢杆菌发酵的发酵物，经提取精制而成的食品营养强化剂维生素K2（发酵法）。商品化的维生素K2（发酵法）包括：以食用油为辅料的维生素K2（发酵法）油剂和以变性淀粉或糊精、乳化剂、抗氧化剂等为辅料的维生素K2（发酵法）粉剂。2分类2.1维生素K2（发酵法）油剂维生素K2（发酵法）油剂产品其主要成分为维生素K2族的七烯甲萘醌，辅料包括大豆油。2.2维生素K2（发酵法）粉剂维生素K2（发酵法）粉剂产品其主要成分为维生素K2族的七烯甲萘醌，辅料含变性淀粉、淀粉、糊精、微晶纤维素、乳化剂、抗氧化剂等。3分子式、结构式和相对分子质量3.1分子式C46H64O23.2结构式3.3相对分子质量649.00（按2007年国际相对原子质量）4技术要求4.1感官要求：应符合表1的规定。表1感官要求4.2理化指标：应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法维生素K2（发酵法）油剂维生素K2（发酵法）粉剂维生素K2的含量a/（µg/g）≥15001000附录A中A.4酸价/（mgKOH/g）≤1.0-GB/T5009.37过氧化值/（meq/kg）≤5.0-GB/T5009.37水分，w/%≤-5.0GB5009.3灰分，w/%≤-3.0GB5009.4总砷（以As计）/(mg/kg)≤0.1GB5009.11铅（Pb)/(mg/kg)≤0.1GB5009.12汞（Hg）/(mg/kg)≤0.05GB5009.17镉（Cd）/(mg/kg)≤0.1GB5009.15六六六/(mg/kg)≤0.05GB/T5009.19滴滴涕/(mg/kg)≤0.05黄曲霉毒素（B1+B2+G1+G2）/（µg/kg）≤5.0GB/T5009.23a维生素K2的含量以七烯甲萘醌含量标示，七烯甲萘醌实际含量为标示量的95%~110%。4.3微生物指标：应符合表3的规定。表3微生物指标项目指标（若非指定，均以/25g表示）检验方法维生素K2（发酵法）油剂维生素K2（发酵法）粉剂菌落总数/(CFU/g)≤3001000GB4789.2霉菌和酵母/(CFU/g)≤25100GB4789.15大肠菌群/(MPN/g)＜3.0GB4789.3大肠埃希氏菌/(MPN/g)＜3.0GB4789.38致病菌（沙门氏菌、金黄色葡萄球菌）不得检出GB4789.4、GB4789.105其他要求项目要求检验方法维生素K2（发酵法）油剂维生素K2（发酵法）粉剂取样品适量置于50mL烧杯中，于自然光下，用肉眼观察其色泽、形态、组织、杂质，嗅其气味。色泽浅黄色白色至浅黄色滋味、气味本品特有的气味、滋味，无异味性状澄清或微混浊油状粉末状杂质无正常视力可见的杂质产品应装于适宜的避光容器中充氮或真空保存，产品的最佳保存温度为20℃以下。附录A检验方法A.1安全提示本质量规格要求试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用易燃品时，严禁使用明火加热。A.2一般规定本质量规格要求所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.3鉴别试验A.3.1方法提要试样用正己烷提取，按含量测定项下色谱条件进行高效液相色谱分析，与七烯甲萘醌标准品保留时间进行对照。试样色谱图的主峰应与标准品主峰保留时间一致。A.3.2试剂和材料A.3.2.1维生素K2标准品（七烯甲萘醌，MK-7）。A.3.2.2正己烷：分析纯。A.3.3分析步骤A.3.3.1试样溶液处理精密称取试样适量（精确至0.001g）于10mL容量瓶中，加入正己烷超声提取30min，定容至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，得上样试样。A.3.3.2试样检测按照含量测定项下方法，配制标准溶液。按照含量测定色谱条件将标准溶液和样品溶液10µL注入高效液相色谱仪中测定，以保留时间定性鉴别。A.4维生素K2含量的测定A.4.1试剂和材料A.4.1.1维生素K2标准品（七烯甲萘醌，MK-7）。A.4.1.2异丙醇：分析纯。A.4.1.3甲醇：色谱纯。A.4.2仪器和设备A.4.2.1高效液相色谱仪。A.4.2.2紫外光检测器：可变波长。A.4.2.3数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.4.3参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件如下表A.1，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。A.1色谱柱和色谱操作条件色谱柱C18ODS柱，柱长150mm，内径4.6mm，内装C18填充物，粒径5μm或是相当者柱温/℃50流动相甲醇流速/mL/min1.0检测波长/nm254进样量/μL10A.4.4分析步骤A.4.4.1试样溶液处理精密称取试样适量（精确至0.001g）于10mL容量瓶中，加入异丙醇超声30min，用异丙醇定容至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，得上样试样。A.4.4.2标准品溶液配制精密称取七烯甲萘醌标准品适量，用异丙醇溶解并定容，配制成浓度为20μg/mL的标准品溶液。A.4.4.3试样测定用标准品和试样溶液10µL注入高效液相色谱仪中测定，以保留时间定性，峰面积外标法定量。A.4.5结果计算维生素K2的含量w，单位为微克每克(μg/g)，按式（A.1）计算：12111mAVcAw…………………………………………………（A.1）式中：A1——试样中维生素K2（七烯甲萘醌）对应峰面积；A2——标准品中维生素K2（七烯甲萘醌）对应峰面积；c1——进样标准品中维生素K2（七烯甲萘醌）的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；V1——供试试样定容体积，单位为毫升（mL）；m1——试样的质量，单位为克（g）。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。__________________________