筒箭毒对神经—肌接头处兴奋传递的影响

1/3筒箭毒对神经—肌接头处兴奋传递的影响目的和原理当神经纤维传来的动作电位到达神经末梢时，造成接头前膜去极化和膜上电压门控钙通道的瞬间开放，钙离子流入神经末梢内，启动突触囊泡的出胞机制，将囊泡内的Ach排放到接头间隙，Ach在接头间隙内扩散至终板膜,迅速激动终板膜上Ach的N2受体，触发兴奋—收缩偶联，引起肌肉收缩。其后Ach极迅速被突触间隙的胆碱脂酶水解灭活。筒箭毒属于非去极化肌松药，与终板膜的N2受体结合，并不引起膜通透性改变，致使离子通道关闭，终板膜处于极化状态而不能去极化，无终板电位的产生以激活兴奋—收缩偶联，继而肌肉松弛。新斯的明抑制胆碱酯酶，使神经未梢释放的Ach不被破坏。Ach浓度升高而竞争性地对抗筒箭毒碱的肌松作用。本实验的目的是：通过观察神经电、肌电与肌肉收缩，了解筒箭毒碱的对于骨骼肌神经—肌肉接头处兴奋传递的影响，并分析其作用机制实验材料与试剂蛙、0.01％筒箭毒碱(任氏液配制)、0.05％新斯的明(任氏液配制)、任氏液。实验仪器与设备蛙类手术器械一套、保护刺激电极2支、开放刺激电极2支、双向电路开关、电子刺激器、隔离器、张力换能器、计算机实时记录分析系统。实验步骤和观察项目1.标本制作制作坐骨神经腓肠肌标本，将制作的标本与任氏液中浸泡5-10分钟。2.装置安放将制作的坐骨神经腓肠肌标本安装刺激电极和记录电极，并与张力换能器计算机实时记录分析系统相连。用改变双向开关的方向来控制刺激神经或肌肉。在肌前缝一条线，使之与记录系统相连，以记录肌肉的收缩。各仪器接地线。3.实验步骤：1)寻找最适刺激强度进入“刺激强度与反应的关系”实验模块，选择程控模式，设置参数为起始刺激0.02伏，每间隔1秒，刺激强度增加0.01伏。随着刺激强度增加，肌肉收缩产生的张力不断增大直至最大值，此时如果接着增加刺激强度，肌肉收缩产生的张力不会继续增大。肌肉出现最大收缩张力时所对应之最小刺激强度即为最适刺激强度。2)以最适强度剌激坐骨神经，观察并记录神经电位、肌电位及肌肉收缩情况。2/33)向坐骨神经腓肠肌持续标本滴加0.01％筒箭毒碱，当肌电消失时，注意坐骨神经电位的变化。然后改变双向开关方向，用电直接刺激肌肉，观察肌电活动与肌肉的收缩。4)停止刺激肌肉，持续刺激坐骨神经。同时缓慢滴加0.05％新斯的明0.15ml／100g，观察神经电位、肌电位和肌肉活动变化情况。技术路线制作坐骨神经腓肠肌标本连接仪器寻找最适刺激强度滴加筒箭毒碱,刺激坐骨神经并观察点刺激肌肉持续刺激坐骨神经,滴加新斯的明并观察3/3预测结果：刺激坐骨神经，神经动作电位出现，肌膜动作电位出现，肌肉收缩。当滴加筒箭毒后，刺激坐骨神经，神经动作电位正常，但不出现肌膜动作电位，肌肉不收缩。直接刺激肌肉，肌膜动作电位出现，肌肉正常收缩。当滴加新斯的明后，神经动作电位仍正常，肌膜动作电位变为正常，肌肉收缩。分析：1.出现结果，说明筒箭毒对神经—肌接头兴奋有抑制作用。直接刺激肌肉，肌膜动作电位出现，肌肉正常收缩，说明肌细胞正常，筒箭毒不是通过损伤肌细胞来抑制肌肉收缩。滴加新斯的明后，兴奋传递恢复正常，肌肉再次正常收缩，由于新斯的明可抑制胆碱酯酶，使神经未梢释放的Ach不被破坏，Ach浓度升高。Ach浓度升高后，肌肉又恢复收缩，说明可能是筒箭毒与Ach竞争性抑制，结合终板膜上N2受体或降低Ach浓度而形成的。2.制备神经肌肉标本过程中，要不断滴加任氏液，以防止标本干燥，丧失正常生理活性。3.滴加肉毒碱和新斯的明溶液过程中避免两刺激电极接触，发生短路。4.操作过程中应避免强力牵拉和手捏神经或夹伤神经肌肉。5.分离神经时注意手和金属器械不要碰到神经。6.实验过程中坐骨神经与胫前肌的位置不要改变。7.试验用筒箭毒碱和新斯的明溶液要以任氏液为溶剂。参考文献：1.人民卫生出版社，生理学（第七版），北京，2007年，35页-44页2.郑州大学生理教研室，《生理实验指导》，2010年十二月3.汪萌芽,郑健全,刘健,《氯化筒箭毒碱抑制蟾赊椎旁神经节胆碱能传递的时反应量一效关系》