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E花环实验一.实验原理人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，能够与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。由于T细胞的异质性，其对SRBC的亲和力亦不同，因而T细胞可形成不同类型的E花环，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。二.实验结果（用图示法表示）三.讨论①.有的细胞能形成玫瑰花环的原因：人T细胞膜上具有CD2分子，能够与SRBC上的LFA-3结合，从而形成以人T细胞为中心，SRBC环绕四周，形状如玫瑰花环的细胞集团，即E玫瑰花环。此外，NK细胞膜上也有CD2分子，也能形成玫瑰花环，但是NK细胞的量非常少，形成玫瑰花环的数量也少。②.有的细胞不能形成玫瑰花环的原因：a.人血液中含有单核巨噬细胞，其表面没有CD2分子，不能与SRBC表面的LFA-3结合，因此不能形成玫瑰花环。b.实验中所用血液不够新鲜，也可能导致不能够形成玫瑰花环。c.时间不够长，导致T细胞表面的CD2分子不能够与SRBC上的LFA-3充分结合，因此只有一部分SRBC与人T细胞结合，其余SRBC没能够与人T细胞结合形成玫瑰花环。2.SRBC与淋巴细胞混合后离心速度不能过高，在Et花环试验中，置4℃应至少1h以上或过夜。3.绵羊红细胞以保存1周内最好，超过2周则与淋巴细胞结合力下降，超过5～6周则不能再用。实验室的绵羊红细胞保存的时间太长，导致其与淋巴细胞的结合能力下降，所以有的细胞可以形成E花环，而有的细胞不可以形成E花环。4.Et花环试验SRBC与淋巴细胞混合比例以100∶1～200∶1为宜，Ea花环试验中以10∶1～20∶1为宜；淋巴细胞离体后不能超过6h，否则会影响花环形成率。5.温度对实验结果影响较大，故实验温度条件应保持一致，从4℃取出后应立即计数。6.计数前将沉淀细胞重悬时，使细胞团块松散均匀即可，不可强力吹打，以免SRBC从淋巴细胞上脱落。