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临床免疫学检查上海交通大学医学院季育华教授范畴(category)：1、感染性疾病(infectiondisease)2、自身免疫性疾病(autoimmune～)3、超敏反应性疾病(hypersensitivity～)4、免疫缺陷/增殖性疾病(immunoabnormal～deficiency/proliferation)5、肿瘤(tumour)6、移植(transplantation)手段(measure)与目的(objective)：应用免疫学的理论(theory)与技术(technique)，研究疾病的病因(致病)(pathogenesis)、发生(occur)、发展(develop)和转归(turn)，并对疾病进行诊断(diagnosis)、疗效监测(curativeeffectmonitor)和预防(prevent)。内容(content)：1、体液免疫检测(humoral～)2、细胞免疫检测(cellular～)3、相关临床疾病的免疫检测感染性疾病自身免疫性疾病超敏反应性疾病免疫缺陷/增殖、肿瘤与移植一、体液免疫检测(～test)（一）血清免疫球蛋白检测(humanserumimmunoglobulin～)（二）血清补体检测(humanserumcomplement～)（三）体液免疫相关其他检测(others～)（一）血清免疫球蛋白检测免疫球蛋白（Immunoglobulins,Ig）是具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。可分为分泌型和膜型两种，前者主要存在于血清等体液中，如Ab；后者称膜型免疫球蛋白（membraneIg，mIg），是B细胞膜上的抗原受体(receptor)。抗体（antibodies,Ab）是B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的，能与相应抗原特异性(specific)结合(recognizeantigenandbinding)并发挥免疫功能(antigenandantibodyreaction)的球蛋白。所有抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不都是抗体。临床检测的血清免疫球蛋白IgG1IgG2IgG3IgG4IgMIgA1IgA2IgDIgE重链123412主要存在形式单体单体单体单体五聚体单体、双体单体单体经典途径活化补体+++++++++穿过胎盘++++++结合吞噬细胞+++++++++结合肥大细胞和嗜碱粒细胞+++与SPA结合+++NK细胞介导的ADCC++++免疫作用抗感染、自身抗体早期防御作用粘膜局部免疫B细胞成熟标志I型超敏反应健康人血清主要Ig含量(content)（g/L）年龄IgGIgMIgA新生儿6.6～17.50.01～0.060.06～0.216个月2.6～6.90.08～0.570.26～1.001岁3.0～9.50.14～0.910.37～1.502岁4.7～12.30.21～1.450.41～1.758岁6.3～15.00.46～2.510.47～2.2012岁7.0～15.50.58～2.910.49～2.4018岁7.3～15.50.70～3.210.51～2.61成人7.0～16.00.70～3.000.40～2.80检测手段(method)：(PrecipitationReaction)(Influidphase)(Inagar)（ring、immune-turbidity、etal）（diffusion）（electrophoresis）(Influidphase)絮状沉淀试验：AgAb环状沉淀试验透射免疫比浊：（turbidimetry）在直射角度上测定光的透射强度，以吸收光单位（A）表示，A值与复合物量呈正比。散射免疫比浊（终点散射/速率散射）：（nephelometry）在光路的5°-95°角的方向上测量散射光强度和被测溶液中微粒浓度关系的一种方法。散射光：一定波长的光线沿水平轴通过复合物的混合液时导致光散射，散射光的强度与复合物量呈正比。测定抗原抗体反应达平衡时～，终点（end）测定单位时间内抗原抗体形成最大量时～，速率（rate）临床意义（significance）：1.血清多克隆Ig水平增高患者血清中各型Ig均升高，常见于各种感染特别是慢性(chronic)细菌感染，如肺结核、慢性支气管炎、慢性肝病自身免疫性(autoimmune)疾病。SLE患者以IgG、IgA升高较多见，类风湿性关节炎——IgM增高为主。多克隆抗体(polyclonalantibody):由不同的B细胞克隆产生的抗体.单克隆抗体(monoclonalantibody):由一个细胞克隆所产生的只识别单一抗原决定簇的纯的抗体.2.血清单克隆Ig水平增高患者血清中出现异常增多的单克隆蛋白（monoclonalprotein，MP（即M蛋白））达30g/L以上，而正常Ig包括与MP同类Ig的含量则显著降低。此类异常增多Ig多无免疫活性,主要见于免疫增殖性(immunoproliferative)疾病，如多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM),原发性巨球蛋白血症(primarymacro-globulinemia)、重链(heavychain)病、轻链(lightchain)病等。新生儿、婴幼儿由于体液免疫功能尚不成熟，免疫球蛋白的含量较成人低，需按年龄组进行分析与判断。关于血清IgE和IgD的测定：血清总IgE为0.13～0.92mg/L;血清总IgD为0.6～2.0mg/L;IgE值升高多见于超敏反应性疾病,骨髓瘤IgD值升高多见于骨髓瘤等。异常免疫球蛋白检测：M蛋白/（Monoclonalimmunoglobulins）由一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的具有相同结构和电场移动率的Ig分子或分子片段，一般不具有抗体活性,又称副蛋白（paraprotein）。冷球蛋白（cryoglobulin）指血清中一种蛋白，4℃不溶解，30℃易于凝聚，37℃便溶解。存在于多种疾病，参与炎症或免疫复合物引起的疾病。M蛋白的检测（免疫固定电泳）(immunofixationlectrophoresis)操作：待检血清+抗血清IgGIgAIgMΚ链λ链I抗原抗体对应沉淀并被固定，染色等结果(result)：与M蛋白检测相关(related)疾病：1、多发性骨髓瘤（multiplemyeloma）2、巨球蛋白血症（macroglobulinemia）3、重链病（heavychaindisease）4、轻链病（lightchaindisease）5、半分子病（half-moleculeimmunoglobulindisease）6、恶性淋巴瘤(malignant～)7、良性M蛋白血症(benign～)例:多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）是浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（plasmocytoma）。是IPD中最常见的一种类型。1873年由Butzky首先并命名。MM的主要临床特征：①进行性的骨质破坏，如骨质疏松和溶骨性病变，常有骨痛、易骨折，为MM最典型特征；②大量的M蛋白导致血液粘度增高,呈高粘血症或沉积于肾小管中，肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病综合征。损害中枢神经系统，可出现神经功能障碍；③骨髓损伤可引起贫血、粒细胞和血小板减少；④浆细胞浸润其他组织，如脊髓和神经根受压时引起运动功能障碍等；⑤男性多发，平均发病年龄46岁左右；⑥恶性程度高，预后不良；⑦易感染。MM的主要免疫学特征：①血清中出现大量的M蛋白：IgG＞35g/L,IgA＞20g/L,IgM＞15g/L,IgD＞2.0g/L，IgE＞2.0g/L；或尿中有本周蛋白（＞1.0g/24h尿）；②血清中正常Ig水平明显降低；③骨髓中有无限扩增的异常浆细胞（≥15%）为主要病理特征，组织证实有浆细胞瘤；④有溶骨性损害。不同类型的多发性骨髓瘤:类型发生率（%）本周蛋白尿阳性（%）临床特点IgG50～6050～70典型症状IgA20～2550～70高粘综合征较多见IgD1～290骨髓外病变、溶骨病变多见，44%淀粉样变IgE0.01少见IgM＜190高粘综合征最常见非分泌型1～5无溶骨病变较少，神经系统损害较多见MM的发病机制发病机制不明，与下列因素有关。（1）是遗传与环境因素综合作用的结果。主要发生在1号、11号、14号染色体，使浆细胞可发生永生化（2）造血干细胞的异常。形成浆细胞瘤。（3）细胞因子的异常。MM患者可有IL-6异常增高，体外内实验证明IL-6可促使MM细胞增殖、生长和存活，使MM细胞增多。IL-6增高直接效应是抑制IL-4的产生，从而抑制了正常的体液免疫功能。（4）与粘附分子、IL-6等信号传递受体和B细胞1～2等抑制凋亡的受体高表达有关。本周蛋白（bence-jonesprotein）:1847年由Bence-Jones在病人的尿液中检出而命名。已知M蛋白不具有免疫活性，无正常免疫球蛋白的功能，其轻链分子小可通过肾小球滤过从尿排除。（本周蛋白是从尿中检出的M蛋白轻链）冷球蛋白的检测(定性)：冷球蛋白的定量分析鉴定沉淀中蛋白质类型，可将沉淀用冷缓冲液洗涤后，再溶于巴比妥缓冲液中，固定电泳或免疫电泳鉴定。冷球蛋白检测的注意事项采血过程要保温，用品用预温，4℃下放置时间要一周，正常人血清也可含有冷球蛋白，多数在80μg/L以下。（二）血清补体检测补体（complement）是指血清中具有酶活性的一组不耐热球蛋白。A.C1～C9(C1q、r、s)；B.B因子、D因子、P因子、H因子；C.C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。溶血程度与补体含量的关系:补体相关的实验室检测：1、总补体溶血活性测定（CH50）反映主要补体C1～C9成分的综合水平。试管法：正常参考值范围50～100U/ml脂质体免疫法：其范围23～46U/ml测得值高：急性炎症、损伤、恶性肿瘤测得值低：补体消耗相关疾病补体合成降低（肝病）先天性缺陷2、补体单个成分检测（C3、C4、C1q）方法:免疫比浊法、单向免疫扩散法补体单个成分检测的意义:若血清C3含量增高，由于C3是急性时相反应蛋白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶性肿瘤、移植物排斥反应时增高。但是补体含量增高的临床意义不大。若血清C3含量降低，见于合成能力低下，如慢性肝病；合成原料不足，如营养不良；补体消耗或丢失增多，如系统性红斑狼疮活动期、白血病化疗后、大量失血、大面积烧伤。血清C4含量降低，见于多发性骨髓瘤、遗传性血管性水肿、遗传性C4缺乏症等。二、细胞免疫(cellular～)检测参与机体细胞免疫反应的细胞T淋巴细胞B淋巴细胞NK细胞（自然杀伤）中性粒细胞针对细胞的数量(amount)、活性（功能function）、表面标志物(membranemolecules)表达(express)程度～。T细胞表面标志物(主要):1、羊RBC受体(E花环)2、T细胞抗原受体（Tcellreceptor,TCR)3、CD3,CD4/CD8；CD28,152,154和CD2等（Clusterofdifferentiation；CD）4、丝裂原受体（PHA/ConA～）5、MHC分子（MHV-Ⅰ类分子）6、细胞因子受体～临床常见的细胞免疫检测项目T细胞表面标志物检测(membranemoleculesofTlymphocytes～)通过检测T淋巴细胞表面特有的标志物识别，计数细胞总数；分析细胞亚群。方法：E玫瑰花环形成试验(Erythrocyterosetteformingcelltest)T细胞分化抗原（CD）测定(ClusterDifferentiationofTcells～)E玫瑰花环形成试验:T细胞表面有特异性绵羊红细胞(SRBC)受体，即E受体。将T细胞与SRBC按一定比例混匀，置4℃至少2h或过夜，T细胞表面的E受体能与SRBC结合形成以T细胞为中心，四周环