特种食用菌菌种生产技术

食用菌菌种制作技术《食用菌生产技术》课程组第一节菌种生产类型及生产流程第二节一级菌种制作技术第三节二、三级菌种制作技术食用菌菌种制作技术第一节菌种生产类型及生产流程一、菌种概念二、菌种生产类型三、菌种生产流程四、菌种生产场所及设备一、菌种概念广义：是指以保藏、试验、栽培和其它用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或非营养性的载体。菌种是一种重要的生物资源，椐其使用的目的不同，可以分为保藏用菌种、试验用菌种和生产用菌种。从食用菌栽培的角度而言，所谓的菌种就是指生产用菌种。狭义：是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝体的联合体。或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性状的优劣直接影响到生产的成败。制种工作的成败，既影响到菌种场的经济效益与信誉，又间接关系到菇农的利益。制作菌种并非易事，需要有丰富的技术经验及企业管理知识。二、菌种生产类型食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，在生产上通常把菌种分为一级菌种、二级菌种和三级菌种。菌种一级菌种二级菌种三级菌种从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。三者之间的关系菌种类型制种容器培养基菌株来源用途要求一级菌种（试管种、母种）试管PDA、PSA种菇（孢子或菌肉组织）扩制二级种菌种保藏纯度高，质量好，绝对无杂菌二级菌种（原种）菌种瓶固体培养基一级菌种扩制三级菌种纯度高，质量好，无杂菌三级菌种（栽培种）罐头瓶、菌种袋固体培养基二级菌种用于栽培高纯度，高质量，无杂菌菌种生产流程种菇一级菌种二级菌种三级菌种栽培菌种为何要经过三级逐步扩大培养三、菌种生产工艺流程斜面一级种培养基制备高压灭菌接种培养筛选提纯原始种中试后确定一级种保存孢子或组织分离一级种转管、扩大菌种瓶二级种培养基制备高压灭菌接种培养二级菌种罐头瓶菌种袋三级种培养基制备高压或常压灭菌接种三级菌种栽培培养菌种制作流程一级菌种（配制培养基→灭菌→接种→培养）↓二级菌种（配制培养基→灭菌→接种→培养）↓三级菌种（配制培养基→灭菌→接种→培养）↓栽培菌种制作的四个基本环节配制培养基灭菌接种培养四、菌种生产场所及设备（现场）（一）菌种场设计基本要求1、确定制种级别及规模良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工作的连续性等都有很高的要求。在菌种生产中，由于前一级菌种是后一级菌种的种源，前一级菌种出现质量问题比后一级菌种出现质量问题危害更大。因此对生产和供应较前级菌种厂家的条件和责任的要求更高。目前，我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理行政法规。今后，各菌种厂在制定规划时，应根据本身的技术力量及设备条件，确定适宜的菌种生产级别和规模。2、制种场地的选择水、电、路三通，远离禽舍、畜栏、厕所等污染源。3、菌种场设置要求菌种场应设原辅料仓库，原料处理场地，洗涤室，配料室，灭菌室，冷却室，接种室，培养室,质检室和菌种储藏室。4、菌种场的平面布局应根据微生物易于在空气中传播及其传播的特点规划厂房，布设流水线，以使制种的工艺流程既便于流水作业，节约劳力和投资，又有利于对微生物传播的控制，提高菌种生产的成品率。下面分别介绍简易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。（二）制种基本设备及常用物品配制培养基设备：切片机、粉碎机、过筛机、拌料机、装瓶或装袋机灭菌设备：高压灭菌锅（手提式、立式、卧式）、常压灭菌灶接种设备：净化工作台、接种箱、接种室培养设备：培养箱（电热恒温、恒温恒湿）、培养室、培养架、空调菌种保藏设备：电冰箱、贮藏室（二、三级菌种）1、制种设备2、基本器具玻璃器皿衡量器具基础设备3、基本药品注意事项！•配置必要的生产设备。•生产能力与生产设备配套•选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑料袋、消毒药品等低值易耗品。复习思考题1．什么叫培养基？培养基可分为哪几种类型？2．什么叫菌种？菌种可分为哪几种类型？3．菌种为什么要经过三级逐步扩大培养？4．简述菌种生产的基本过程？第二节一级菌种制作技术一、一级菌种的制作流程二、一级菌种培养基的配制三、一级菌种培养基的灭菌四、菌种分离及纯化五、出菇试验（鉴定）六、转管及培养七、菌种保藏一、一级菌种制作流程1．概念一级菌种是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体。2．用途及要求一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量，对食用菌生产产生根本的影响。3、制种过程：主要包括下列几个程序：培养基的配制培养基的灭菌菌种的分离纯化（提纯）转管扩大培养一级菌种二、一级菌种培养基的配制1、培养基的概念及分类根据食用菌对营养、水分、酸碱度的要求，人为配制成的供食用菌生长发育的基质。类型天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：？原料来源状态液体：营养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%~2%琼脂表面形状斜面培养基平板培养基概念2、一级菌种培养基常用配方PDA培养基PSA培养基马铃薯（去皮）200g马铃薯（去皮）200g葡萄糖20g蔗糖20g琼脂18～23g琼脂18～23g水1000ml水1000mlPDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。注：一级菌种培养基配方众多，可参考课本或其他书籍。粉状条状属天然植物多糖融点96℃以上凝点40℃以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用特性煮沸20min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂调节pH值勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌包扎成捆1%NaOH或HCl3.一级菌种培养基的配制过程三、一级菌种培养基的灭菌（一）灭菌与消毒的概念灭菌：是应用物理和化学方法杀灭物品表面和内部所有的微生物，是一种彻底的灭菌方法。消毒：是应用物理和化学方法使欲消毒的物品表面和孔隙内绝大部分微生物致死，是一种不彻底的灭菌方法。（二）灭菌与消毒的方法1、常用的灭菌方法火焰灭菌用于金属器具，火焰灼烧至红（在火焰2/3处烧）干燥箱灭菌用于玻璃器皿（培养皿、试管、三角瓶、吸管）等。洗净晾干包装放入干燥箱升温160～170℃，保持1～2h关闭电源，自然降温60℃以下打开干燥箱取出灭菌物品，尽快使用。干热灭菌湿热灭菌常压灭菌间歇灭菌第一次蒸，100℃保持1h28-37℃下培养24h第二次蒸，100℃，保持1h培养24h第三次蒸，100℃，保持1h。不常用的原因：灭菌一锅需要3～4天时间，且冬天需要保温。持续灭菌蒸，100℃保持12～14h（方法：攻头，控中间，保尾）。普遍采用，特别用于大规模塑料袋制种和塑料栽培筒的灭菌。注意：常压灭菌锅要设计合理，主要是灭菌彻底与否、燃料费用、周转速度、劳动强度、污染率的高低，直接影响经济效益。高压灭菌手提式高压灭菌锅：用于一级菌种培养基灭菌。卧式或立式高压灭菌锅：用于二、三级菌种培养基灭菌。2、常用的消毒方法空间消毒药液喷雾药剂薰蒸紫外线照射0.25%的新洁尔灭，5%的石碳酸，0.25%的多菌灵等。用量不小于30ml/m3；雾粒越细越好；适时更换药液（防止抗药性）。10～20ml的甲醛+5～8g的高锰酸钾/m3；气雾消毒盒，2～6g/m3；照30min后，再过30min开照明灯器具消毒药液浸泡煮沸消毒75%的酒精；药物揩擦煮沸20min以上培养料消毒熟石灰拌料；杀菌剂拌料（0.1%~0.2%的多菌灵）；巴氏消毒（发酵）分离材料消毒75%的酒精棉球擦拭；0.1%升汞浸泡0.5~1min无菌水冲洗3次无菌纸吸干（三）一级菌种培养基的灭菌1．灭菌设备手提式高压灭菌锅2．灭菌要求1.1kg/cm2，121℃保持20~30min手提式高压灭菌锅3．操作过程加水装锅盖盖加热当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气正式升压保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）停止加热自然降压至零排放余汽开盖取出灭菌物品趁热摆斜面检验灭菌效果（32℃空白培养48h）。四、菌种分离及纯化（一）菌种分离的概念菌种分离：用无菌操作的方法将所需要的食用菌从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。通过菌种分离得到的纯菌丝体即为一级菌种。（二）菌种分离的关键——无菌操作无菌操作：任何一个操作过程都要注意避免把其它任何无关的菌体带入到培养基中。注意二点：1．严格树立无菌观念；2．严格遵循无菌操作规程。无菌操作要点接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快、准、稳要点必备（三）菌种分离的设备1．接种箱：操作规程2．净化工作台：操作规程3．接种室：操作规程接种工具净化工作台（四）菌种分离的方法（常用三种）组织分离法将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法简单易行保持原菌种性状适用于大型肉质子实体重复多易退化种菇选择→种菇消毒→切取组织块→移接组织块至斜面中央→培养特点概念操作过程（以伞菌为例）孢子分离法概念特点操作过程利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌孢子的采集→孢子的分离→孢子的萌发孢子分离法多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法多孢分离单孢分离单个孢子萌发获得纯菌种的方法整菇插种法钩悬法孢子印法平板稀释法连续稀释法毛细血管法基内菌丝分离法概念特点适用范围从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法易感染杂菌子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难混合菌丝培养类型，如银耳，多采用此法操作示范选种菇外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、第1~2茬的子实体取组织块取组织块：纵剖（撕）菇体，在柄盖交界处取绿豆粒大的组织种菇消毒用75%的酒精棉球擦拭子实体接组织块培养移接至斜面中部25℃培养箱（五）菌种的纯化纯化概念措施是指对分离获得的菌种进行再提纯，成为生产所需要的菌种的方法菌丝的再提纯污染物的排除正常的菌种在固体培养基上，菌丝逐渐向四周呈辐射状生长，边缘整齐一致，菌丝浓密健壮！五、出菇试验（鉴定）是菌种投入生产前必须做的结实性鉴定试验概念进一步确定菌种，以避免菌种选育不当而造成不可估量的损失目的形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等内容六、一级菌种转管及培养转管过程取直径3-5mm的母种块移入新斜面中部转管目的扩大繁殖，增加母种数量，以满足生产需要注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多母种培养设备注意条件经常检查，及时剔除污染管控制菌龄（即将长满斜面）外观检查：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快则质量好，否则质量差电热恒温培养箱25℃左右、干净、干燥、黑暗、通风七、一级菌种的保藏（一）保藏目的及原理使菌种不死亡不生长不污染，不降低或不丧失其优良性，以尽量延长使用时间。保藏目的保藏原理创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。（二）菌种保藏方法（常用）特点简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类1.斜面低温法斜面菌种置4~6℃冰箱中（3~6个月）2.矿油保藏法3.自然基质保藏法自学！（三）菌种保藏注意事项用保种培养基及时保藏（菌丝占斜面2/3）最好换胶塞用时活化严防棉塞受潮复习思考题1．什么是一级菌种？简述一级菌种制作的工艺流程。2．一级菌种培养基常用的配方是什么？简述其制作过程3．名词解释：消毒、灭菌、提纯。4．如何对一级菌种培养基进行灭菌？如何检验其灭菌效果？5．什么是菌种分离？菌种分离有哪几种方法？6．简述组织分离法的操作过程。7．为什么要进行出菇试验？8．什么叫转管？为什么要转管？9．什么是无菌操作？怎样才能做到无菌操作？第三节二、三级菌种制作技术一.二、三级菌种培养基的配制二.二、三级菌种培养基的灭菌三.二、三级菌种的接种四.二、三级菌种的培养五.二、三级菌种的质量鉴定二、