骨髓细胞形态学检验

骨髓细胞形态学检验南昌大学一附院检验科吕小林骨髓细胞学检测方法•骨髓细胞形态学检查•组织化学检查•病理学检查•细胞遗传学检查•免疫学检查•造血细胞培养骨髓细胞学检测•骨髓细胞学检测的临床应用•骨髓细胞学检测的方法和内容•血细胞发育过程中形态演变的一般规律•血细胞的正常形态学特征•血细胞的细胞化学染色•细胞免疫分型•细胞遗传性分析一骨髓细胞学检测的临床应用是诊断造血系统疾病最常用的基本方法•骨髓细胞学检测的临床应用•骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证骨髓细胞学检测的临床应用•诊断造血系统疾病AML、ALL、CML、CLL、MM、AA、Gaucherdisease等。•辅助诊断某些疾病MDS、MPD、IDA、PLT等。•提高某些疾病的诊断率mp、黑热病原虫、红斑狼疮细胞等。骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证•适应证•外周血细胞成分及形态异常•不明显原因发热、肝脾淋巴结肿大•骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸等•化疗后疗效观察•其它：微生物、寄生虫等•禁忌证•血友病、晚期妊娠等二骨髓细胞学检测的方法和内容•肉眼观察•低倍镜下检查•油镜下检查•骨髓象的分析与报告肉眼观察（检查方法）•血膜颜色•厚薄•骨髓小粒低倍镜下检查（检查方法）•评价骨髓的取材、涂片、染色是否良好•估计骨髓有核细胞增生程度•计数巨核细胞数目•特殊细胞与其它骨髓涂片骨髓有核细胞增生程度增生程度粒红比有核细胞数/HP常见病例增生极度活跃1：1100急、慢性白血病增生明显活跃1：1050-100急、慢性白血病，增生性贫血增生活跃1：2020-50正常骨髓象，增生性贫血增生减低1：505-10AA增生极度减低1：2005AA骨髓有核细胞增生程度巨核细胞计数特殊细胞与其它油镜检查•数目：200-500有核细胞•分类：各系、各阶段细胞•分析：数量、形态、增生程度等骨髓象分析与报告•描述取材、染色增生程度粒系特点红系特点淋系特点巨系特点•诊断结论三血细胞发育过程中形态演变的一般规律•细胞体积•细胞质：量、染色、颗粒•细胞核：大小、染色质、核仁、核膜•核浆比四血细胞的正常形态学特征血细胞的形态学特征（红系）•（1）原红（normoblast）：15—22um•（2）早幼红（basophilicnormoblast）：φ11-20um•（3）中幼红（polychromaticnormoblast）：φ8-18um•（4）晚幼红（ortho-chromaticnurmblast）：φ7-12um•（5）网织红（RC）：φ7.4um•（6）成熟RBC（RBC）：φ7.4um红系形态特点血细胞的形态学特征（粒系一）•（1）原粒细胞（myeloblast）：φ11-18um•（2）早幼粒（promyelocyte）：φ12-22um•（3）中幼粒（myelocyte）•①中性中幼粒（neutrophilicmyelocyte）：φ10-18um•②嗜酸性中幼粒（eosinophilicmyelocyte）：φ15-20um•③嗜硷性中幼粒（basophilicmyelocyte）：φ10-15um血细胞的形态学特征（粒系二）•4）晚幼粒细胞（metamyelocyte）：φ10-16um•①中性②嗜酸③嗜硷•（5）杆状核粒细胞（stabgranulocyte、bandgranulocyte）•①中性②嗜酸③嗜硷•（6）分叶核粒细胞（segmentedgranulocyte）•①中性②嗜酸③嗜硷粒系形态特点一粒系形态特点二粒系形态特点三血细胞的形态学特征（淋系）•（1）原淋巴细胞（Lymphoblast）：φ10-18um•（2）幼淋巴细胞（prolymphocyte）：φ10-16um•（3）淋巴细胞（lymphocyte）•①大淋巴细胞②小淋巴细胞淋系形态特点血细胞的形态学特征（浆细胞）•（1）原浆细胞（plasmablast）：φ15-20um•（2）幼浆细胞（proplasmacyte）：φ12-16um•（3）浆细胞（plasmacyte）：φ8-20um浆细胞形态特点血细胞的形态学特征（单核细胞）•（1）原单核细胞（monoblast）：φ15-25um•（2）幼单核细胞（promonocyte）：φ15-25um，核可见凹陷，切迹，扭曲或折叠•（3）单核细胞（macrophage）：φ12-20um：核呈肾形，马蹄形，笔架形及“S”形。•（4）吞噬细胞（macrophage）：单核细胞→组织细胞→巨噬细胞或吞噬细胞单核细胞形态特点血细胞的形态学特征（巨核细胞）•（1）原巨核细胞（megakaryoblast）：φ15-30um•（2）幼巨核细胞（promegakaryocyte）：φ30-50um•（3）颗粒型巨核细胞（granularmegakaryocyte）：φ50-70um•（4）产板巨（thronbocytogenousmegakaryocyte）。•（5）巨核细胞裸核（nakednucleus）巨核细胞形态特点血细胞的形态学特征（其它细胞）•（1）网状细胞（3）纤维细胞•（2）内皮细胞（4）组织嗜硷•（5）成骨细胞（6）破骨细胞骨髓中其它细胞五血细胞的细胞化学染色•POX染色•NAP染色•ACP染色•AS-DNCE染色•α-NAE染色•PAS染色•Fe染色细胞化学染色一POX•1、原理：细胞中的POX（peroxidase）→H2O2→O2→氧化联苯胺呈蓝色+亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒。•2、结果：•（1）阴性：无颗粒•（2）弱阳性：细小颗粒分散•（3）强阳性：颗粒粗大而密集•3、意义：•（1）急粒：强阳性•（2）急单；弱阳性•（3）急淋：阴性POX结果判读细胞化学染色二NAP•1、原理：NAP（neutrophilalkalinephosphatase）的显示方法有偶氮偶联法：•NAP（PH9.4-9.6）→α-磷酸茶酚钠→α-茶酚+重氮盐→形成灰黑色沉淀（定位于酶活性处）。NAP结果判读细胞化学染色二NAP•2、结果：•（1）5级分类•0级→阴性•1级→+•2级→++•3分→+++•4分→4（+）•（2）阳性率报告：计数100NC中阳性细胞分率。•（3）积分报告：100NC细胞的累积分数细胞化学染色二NAP•3、参考区间：NAP：阳性率：10-40%积分：40-80分•4、临床意义：•（1）感染性疾病的诊断：鉴别细菌或病毒感染•（2）CML和类白血病鉴别•（3）AA与PNH鉴别细胞化学染色三ACP•1、原理：ACP（acidphosphatase）：•ACP（PH5.0）——β甘油磷酸钠——磷酸钠+硝酸铅——磷酸铅沉淀+硫化铵反应——棕黑色硫化铅沉淀。•2、结果：胞质内出现棕黑色颗粒为阳性反应。细胞化学染色三ACP细胞化学染色三ACP•3、意义：•（1）多毛细胞白血病（hairycellleukemia，HCE）诊断：HCL为阳性不被L-酒酶抑制•（2）T-B淋巴细胞鉴别：T阳性，B阴性•（3）协助鉴别Gaucher病与Niemann-Pick病：Caucher阳性，Niemann-Pick阴性•（4）单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞ACP阴性。细胞化学染色四CE•1、原理：•AS-D（SE）——氯化醋酸AS-D萘酚——AS-D+重氮盐GBC偶联——红色沉淀定位于胞浆中•2、结果：粒系——阳性或强阳性反应•单核——阴性或弱阴性反应•淋巴、嗜酸细胞、浆细胞——阴性反应•3、意义：•（1）急粒——阳性或强阳性•（2）急单、急淋——阴性反应细胞化学染色四CE细胞化学染色五NAE•1、原理：α-NAE——α-醋酸萘酚——α-萘酚+重氮盐染料偶联——黑色沉淀定位于胞浆中。•2、结果：•1、单核细胞——阳性（灰黑色沉淀）•2、粒细胞——弱阳性•3、淋巴细胞——阴性•3、意义：•1、急单——强阳性反应•2、急粒——弱阳性反应细胞化学染色五NAE细胞化学染色六PAS•1、原理：过典酸（糖原）——醛基+无色品红——紫红色化合物•2、结果：•（1）阳性：颗粒状、小块状或弥漫均匀（红色强阳性、弱阳性和阴性）•（2）原粒阴性，早幼粒以下阶段阳性反应程度渐增强•（3）单核弱阳性，淋巴细胞阴性•（4）红系：阴性•（5）巨核：阳性细胞化学染色六PAS•3、意义：•1、红血病与巨幼贫鉴别：前者幼红细胞阳性，后者幼红细胞阴性•2、白血病：急粒：阴性或弱阳性•急淋：原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状•急单：呈弥漫均匀或细颗粒状•3、其它：•Gaucher细胞——阴性•Niemann--Pick——阴性细胞化学染色六PAS细胞化学染色七Fe•1、原理：Fe3++亚铁氰化钾——铁氰化铁沉淀（普鲁土蓝）•2、结果：•（1）细胞外铁：1+—4+•（2）细胞内铁：•①含有铁颗粒的幼红细胞——铁粒幼红细胞•②油镜下计数100个幼红细胞计算其阳性率•③I、II、Ⅲ、Ⅳ和环状铁粒幼细胞细胞化学染色七Fe•3、参考值：•（1）细胞外铁：1+—2+，大多为2+•（2）细胞内铁：20—90%•4、意义：•（1）缺铁性贫血诊断•（2）非缺铁性贫血：如AA、铁粒幼细胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加•（3）MDS-RARS：环状铁粒幼细胞＞15%细胞化学染色七Fe细胞化学染色七Fe六细胞免疫分型•免疫荧光法•免疫酶染色法细胞免疫分型•1、免疫荧光法（immmeofluoresencetechnique）•（1）原理：•①荧光标记的单抗+细胞表面分化抗原结合——产生荧光•②用荧光显微镜和流式细胞仪检测•③直接荧光法、间接荧光法•（2）参考值：有荧光——阳性细胞•无荧光——阴性细胞细胞免疫分型•2、免疫酶染色法：•（1）APAAP法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）：•一抗+CD抗原+AKP标记二抗——底物显色•（2）PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶法）•一抗+CD抗原+POX标记抗体——底物显色•（3）ABC法（亲和素—生物素—酶复合物）法：•一抗+CD抗原+生物素标记二抗——HRP标记亲和素+底物细胞免疫分型细胞免疫分型临床应用•1、有助于识别不同系列的细胞：•2、识别不同的淋巴细胞：•3、用于T淋巴细胞亚群检测：•4、用于识别不同分化阶段的细胞：•5、有助于识别不同功能状态的细胞：•6、用于不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离：•7、白血病的免疫分型：•8、可用于白血病微小残留病检测：急性白血病细胞免疫表型特点细胞免疫分型临床应用细胞免疫分型临床应用七细胞遗传性分析•1、染色体检查方法•2、染色体分析•（1）染色体命名：①46条，22对常染色体，1对性染色体•②男46XY，女：46XX•③A-G7组七细胞遗传性分析•2）核型分析及其书写：•（1）书写顺序：染色体数目、性染色体、染色体异常•（2）染色体变异以小写表示：•t—易位iso或i——等臂染色inv—倒位ins——插入•del—缺失r—环状染色•“—”-----丢失“+”----增加七细胞遗传性分析•（3）第一括号内表示染色体数目，第二括号内表示染色体区带•（4）P表示短臂，q表示长臂•3、染色体畸变•（1）二倍体（2n）•（2）数目畸变：整倍体和非整倍体•（3）亚二倍体：比2n少•（4）超二倍体：比2n多七细胞遗传性分析七细胞遗传性分析