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Agilent1260Infinity操作培训2020年3月29日典型LC1260的堆积方式2脱气机溶剂柜泵自动进样器柱温箱检测器优化流路减小死体积和延迟体积流路自上而下3仪器背面连线每个模块有独立的电源LC1260各模块均由CAN线连接(外置脱气机除外)检测器与化学工作站之间用网线(LAN线)连接外置脱气机与泵之间用遥控线连接(错误信号输出)外设板用于外围设备(例如：样品瓶条形码读取器等）网卡CAN线遥控线外设板指示灯状态4通过LED显示仪器六种状态：灯熄灭灯熄灭黄灯绿灯红灯黄灯闪烁红灯闪烁关机（未通电）就绪（已开机）未就绪正在运行出现故障固件升级固件升级（集成网卡）仪器LED状态显示电源开关管线接头AgilentLC系统的连接口与Swagelok兼容例外：手动进样阀的连接口G1328A/B/C(Rheodyne型号7725i)与Rheodyne兼容如果接头过长，则可能漏液不能完全密合混合腔如果接头过短，则有死体积存在，相当于一个混合腔，导致色谱峰形变差0.170in.0.090in.0.130in.0.090in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090in.0.080in.2.3mm4.3mm56AgilentLC毛细管的颜色第二章Agilent1260Infinity在线脱气机Agilent1260在线脱气机标准真空脱气机：G1322A高性能真空脱气机：G4225A四元泵内嵌式真空脱气机7Agilent1260真空脱气机—G1322A/G4225A8建议：低压混合进行梯度洗脱，提高泵的可靠性能。提高泵在低流速下的操作性能用于需要脱氧的检测器性能/用途：与He脱气相比，更方便，更节省费用。高性能脱气，避免了烦琐的操作，提高仪器稳定性。内部延迟体积小，便于快速进行溶剂切换。四通路系统，操作灵活。与LC1260其它组件堆积在一起，用遥控线连接，用于传输错误信号Agilent1260真空脱气机(G1322A/G4225A)ABCD自溶剂瓶至泵头9Agilent1260真空脱气机构造(G1322A)10脱气机单元前视图真空腔每个真空腔中管路的体积为1.5mlLC1260四元泵内嵌式真空脱气机真空泵压力传感器11不进行溶剂脱气处理使用氦气进行溶剂脱气使用安捷伦真空脱气机吸光值123456789时间(分钟)溶剂:甲醇;紫外检测波长:210nm使用真空脱气机可以降低噪音1213第三章Agilent1260Infinity的泵Agilent1260泵单元泵：G1310B四元泵：G1311B四元泵VL：G1311C二元泵：G1312B二元泵VL型：G1312C14溶剂传输系统工作原理入口出口密封金垫蓝宝石插件红宝石球弹簧内插件往复式活塞泵自溶剂瓶至液相系统传统的溶剂传输系统—并联柱塞泵15可以消除相位干扰通常也需要阻尼器增加了单向阀的使用数量单向阀单向阀Agilent溶剂传输系统—串连柱塞泵16减少了单向阀的使用数量同样需要阻尼器可以使用压缩因子补偿17特征/用途流量范围宽：0.5~10ml/min最高耐压：600bar双柱塞，可变冲程，阻尼器可以减小流量脉冲。改进的阀系统可以延长使用寿命，降低维修成本。容易维护和维修。直接与溶剂瓶、清洗阀和管路连接，便于快速启动。可以升级至四元泵。建议...常规质量控制分析简单混合物的分析用于体积排阻色谱半制备工作Agilent1260单元泵—G1310B加真空脱气机流速范围可扩展至0.2~10ml/min18Agilent1260单元泵前视图阻尼器出口单向阀冲洗阀入口单向阀泵头19单元泵工作原理入口单向阀泵头结构图1.宝石活塞杆2.活塞外框架(包括弹簧)3.支持环4.泵头密封垫5.泵腔6.入口单向阀7.出口单向阀8.塑料锁定螺栓9.冲洗阀10.泵头固定螺丝20Agilent1260单元泵和四元泵的阀21PTFE过滤芯阀体密封金垫出口单向阀入口单向阀冲洗阀密封金垫密封金垫入口单向阀(可选部件)入口阀过滤芯22Agilent1260泵头密封垫冲洗装置SealWash(可选部件)清洗溶液清洗溶液当流动相中盐浓度0.1mol/L时，使用泵头密封垫清洗装置可以减小密封垫的磨损对于Agilent1260系列泵为可选件用10%异丙醇水溶液冲洗蠕动泵垫圈清洗密封圈组件密封垫密封压片23带有泵头密封垫清洗装置(SealWash)的泵头结构图3.SealWash支撑环4.WashSeal密封垫5.SealWash垫圈6.SealWash密封压片7.泵头密封垫14.SealWash蠕动泵24建议...使用2～8mm内径的柱子应用于研究和常规分析特征/优点四通路/低压混合能灵活地进行等度或梯度洗脱。流量范围从0.2~10ml/min最高耐压：600bar无需消耗昂贵的He而能进行高性能真空脱气。自动冲程调节，混合非常均匀，降低基线噪音。对于高盐流动相，可选择泵头密封垫清洗装置清洗密封垫。Agilent1260四元泵—G1311B25Agilent1260四元泵前视图溶剂瓶组件脱气机入口溶剂管路脱气机出口到自动进样器的管路四元比例阀废液管冲洗阀26四元泵工作原理示意图入口单向阀出口单向阀阻尼器真空室冲洗阀来自溶剂瓶至进样口至废液四元比例阀27Agilent1260二元泵—G1312B优点/特征对于有强紫外吸收的流动相，使用静态混合器可以降低基线噪音最高耐压：600bar可以选择溶剂选择阀自动进行溶剂切换对于高盐流动相，可选择泵头密封垫清洗装置流量范围：0.05*~5ml/min可以对溶剂的压缩因子进行校正Agilent1260二元泵G1312C流路结构图阻尼器冲洗阀混和器AB入口单向阀出口单向阀废液口入口单向阀出口单向阀预混和器28系统耐压高达600bar使用不锈钢加固的主动阀、单向阀及冲洗阀压力传感器与阻尼器独立设计标准配置延迟体积为600~800mLAgilent1260二元泵G1312B—标准流路配置压力传感器400μL混合器600bar阻尼器缓冲毛细管29A泵B泵溶剂选择阀A1A2B1B2如果配置了溶剂选择阀，两个泵头则可以分别控制两种溶剂，但不同于四元比例阀，只能同时混合两种溶剂，不可实现四种溶剂的同时使用。建议有机相放在A2/B2通道。Agilent1260二元泵—溶剂选择阀(可选部件)30第四章Agilent1260Infinity手动、自动进样器31Agilent1260进样器•标准自动进样器型:G1329B•高性能自动进样器:G1367E•双通道自动进样器PS:G2258A•微量多孔板自动进样器:G1377A•制备型自动进样器:G2260A•手动进样器:G1328C32充样位置(Load)进样位置(Inject)进样器基本原理—六通阀至废液定量环(固定体积)来自泵至色谱柱进样针至色谱柱来自泵至废液33手动进样器的实际流路连接图1.样品环6.废液5.放空管4.样品环3.色谱柱2.接泵出口废液管(孔5和6)废液管末端与进样口水平柱子针孔柱子充样位置进样位置(Load)(Inject)样品环泵样品环泵针孔性能/优点进样体积重复性高(5-100µlRSD0.25%；1-5µlRSD1.0%)进样动态范围宽连续冲洗流路并有洗针功能，降低样品残留(一般小于0.05%)所有驱动均采用电子驱动可以容纳不同规格的样品瓶灵活的进样程序编制可以进行样品前处理(例如柱前衍生)使用旁路可以降低延迟体积Agilent1260标准自动进样器—G1329B推荐…进样体积从0.1µl到100µl,经过扩展，进样量可扩展至1800µl最多可容纳100个样品瓶自动样品前处理3435标准自动进样器前视图样品环六通阀计量泵机械臂样品盘进样针标准自动进样器进样过程361.六通阀切换到旁路位置2.计量泵活塞杆移动至起始位置3.抬起进样针4.将样品抓至针座上5.针扎入样品瓶6.计量泵抽取样品7.针从样品瓶中拔出8.将样品瓶抓离针座9.针扎入针座毛细管10.六通阀切换到主路位置11.将样品瓶放回样品盘来自泵系统去往色谱柱六通阀(主路位置)Mainpass计量泵六通阀(旁路位置)Bypass定量环来自泵系统至废液口针座毛细管去往色谱柱计量泵活塞杆回归起始位置去往色谱柱来自泵系统计量泵抽取样品六通阀(旁路位置)Bypass37min05101520253035mAU020406080100#1#10#5#810µl样品，每次进样1µl，进样十次Agilent1260标准自动进样器进样测试洗针功能把样品残留降低到最小限度多次吸液用于进样量大于100µl的情况程序进样可以非常灵活地执行进样程序要求Agilent1260标准自动进样器特殊功能3839洗针对样品残留的影响(清洗瓶盖带瓶垫/不带瓶垫)进样体积(µl)0.10.51500.050.10.150.20.30.350.25不洗针洗针(不带瓶垫)洗针(带瓶垫)样品残留(%)00.050.10.150.20.250.30.35样品残留(%)0.10.515普里米酮进样体积(µl)非那西汀40进样量:0.1-900µl使用多次吸样装置可以扩展进样量至1800µl带有多次吸样装置的标准自动进样器900µl计量装置至废液来自泵至色谱柱1500ml针座毛细管900µl针900µl定量环41用于样品衍生或样品前处理标准自动进样器的程序进样功能计量装置至废液来自泵至色谱柱样品试剂性能/优点：定量环前置(易于拆卸更换)进样体积0.1～100µl(可扩展至1800µl)惰性PEKK针座通过进样针外部清洗，最大限度地减少了交叉污染设置进样后自动进样器切换旁路，减小延迟体积，适合快速梯度和快速平衡有不同类型的样品容器，如多孔板和样品瓶，使样品处理更灵活、更方便。用384孔板可以在无人值守的情况下分析768个样品。Agilent1260高性能自动进样器—G1367EPEKK:聚醚酮酮42高性能自动进样器进样过程43进样前阀处于主路位置吸样过程中阀处于旁路位置进样及运行中阀处于主路位置Agilent1260自动进样器控温模块—G1330B性能/优点半导体控制，可以非常方便、准确的升温和降温控温范围:4～40℃(室温为25℃)可容纳100个样品瓶可更换样品盘推荐...对于热依赖性的样品使用生化、制药行业临床实验室利用帕尔贴(Peltier)效应控温4445Agilent1260柱温箱标准柱温箱：G1316A柱温箱SL+：G1316C第五章Agilent1260Infinity柱温箱利用帕尔贴(Peltier)效应控温推荐...温度控制范围：低于室温10℃~80℃保留时间的再现性需要稳定的温度如果需要在高于或低于室温进行分离操作时，需要使用柱温箱特征/优点大空间，可以容纳三根长色谱柱温度稳定性±0.15℃降温非常方便配置柱识别卡套，可自动记录进样次数使用切换阀可以进行柱切换(可选)两个单独的控温区可以分别控制温度可以进行程序升温内部死体积小(左侧3µl，右侧6µl)Agilent1260柱温箱—G1316A4670.4070.5070.6070.7070.8070.9071.0071.1071.2071.3012345678910Hoursretentiontime白天夜晚传统普通柱温箱Agilent1260柱温箱使用Peltier半导体冷热控温模块白天Agilent1260柱温箱与普通柱温箱对比图色谱柱:250x1mmVydacTP218;流动相:Water/Acetonitrile+TFA4748min510152025mAU0102030213546978101112141315161718℃25℃30℃柱温Peak#Compound1Naphthalene2Anthrachinone3Acenaphthene4Fluorene5Phenanthrene6Anth