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药学院BSL-2生物安全实验室管理规范调整方案-试行一、实验室管理1、实验室使用：实验室实行预约使用制度：把三个独立操作间划分为三个预约单元，网上开放预约，每个使用者通过预约使用。2、实验室进出：实行安装门禁系统管理，凭校园卡刷卡登记出入3、实验事项：按BSL-2实验室管理规程二、实验室准入：1、实验室准入：进入实验室前，需报备实验方案，并进行生物实验室安全操作培训，经考核及格，允许进入。2、实验室培训：参考BSL-2实验室管理规程、BSL-2实验室工作规定、BSL-2实验室意外事故的处理规定、BSL-2核心区管理规章制度三、实验室收费1、实行三个预约单元单独收费。收费标准参考其它学院的标准并结合本实验室年均维护成本，每年二次合并大型仪器使用收费。收费标准：服务项目校内价校外价1BSL-2操作室短期使用(1-2人/课题组，每室限2个相同内容课题组同时实验）60元/天120元/天2占用实验室（因一个实验周期内病原体不能交叉，如无人进入但需进行培养操作等即为占用）60元/天120元/天3长期使用1000元/月2000元/月4消毒剂和其它消毒用基本消耗品、培养瓶（板）、实验试剂、细胞株、实验动物等、个人一次性防护装备（一次性乳胶手套、鞋套等）按要求自备附件1：药学院BSL-2生物安全实验室申请书申请书编号:申请日期：年月日申请人信息申请人姓名申请人单位联系人姓名联系人电话及邮箱课题信息课题名称课题负责人及邮箱项目编号（经费来源）需有明确的经费支持参与实验人员姓名来源培训时间联系电话及邮箱病原体信息病原体名称病原体类别病原体来源是否为人畜共患病病原病原是否具有高致病性计划开始日期年月日计划结束日期年月日病原获得方法与感染效力，传染等级（是否符合Ⅱ级生物安全要求）、易感动物及其可能的传播途径论述一旦发生该病原污染，计划以何种方式快速处理减少扩散，及安全保护措施保证：本人在BSL-2实验室内开展的一切实验活动将与本申请书内容一致，并且，由于本人原因而发生病原危害及传染病扩散责任将由本人（本实验室）承担。保证人：年月日中心实验室意见：签章年月日附件2：BSL-2生物安全实验室操作规程1.目的加强BSL-2实验室生物安全管理，规范实验人员仪器设备、实验操作行为，确保BSL-2实验室工作安全运行。2．适用范围适用于BSL-2实验室的管理与操作。3．职责3．1实验人员：严格执行BSL-2实验室相关管理规定，规范操作行为。3．2实验室负责人：监督执行BSL-2实验室相关管理规定，及时纠正违规操作行为，发现不安全隐患及时上报。3．3科室负责人：监督并定期抽查BSL-2实验室管理规定执行情况，及时发现并解决BSL-2实验室运行中出现的问题。4．准入要求4．1只有经过授权的人员才允许进入BSL-2实验室工作区。4．216岁以下儿童禁止进入BSL-2实验室工作区。4．3实验人员要接受相应预防性生物制品的免疫接种。4．4禁止将无关动物带入实验区。4．5外单位人员来访、参观、进修，必须经中心主管部门批准，未经批准不得进入BSL-2实验室工作区。4．6外来人员进入BSL-2实验室，须由本室人员陪同，在严格遵守有关规定的条件下方可进入，同时填写《外来人员进出实验室特殊区域登记表》。4．7限制免疫耐受者进入实验室。4．8限制正在接受免疫抑制剂者进入实验室。4．9严禁在实验室内吸烟、饮食、化妆等。5．进入程序5．1进入BSL-2实验室，伸手打开缓冲间内空调和生物安全柜按钮，使实验室和生物安全柜净化10分钟以上。方可进入实验室进行实验。。5．2将实验所需材料和物品放入生物安全柜中。5．3进入BSL-2实验室缓冲区，关闭外门，在工作服外加穿BSL-2实验室专用罩衣（紧口，后系带），戴一次性口罩、帽子和戴两层手套,换穿BSL-2实验室专用鞋。需要时打开照明按钮。5．4进入实验室工作区，首先打开照明按钮，打开前玻璃门，调节到要求的高度。将实验所需物品一次性放入实验台内，摆放要有秩序且要相对区分清洁物与污染物，净化生物生物安全柜10分钟左右。5．5观察实验区负压表指示数值是否在工作要求范围内，如不能满足要求则进行负压调节。观察温湿度计，填写温湿度计使用记录。5．6实验人员手臂放进生物安全柜内大约1分钟后，即可按无菌要求进行实验操作。5．7完成整个实验操作后，将使用过的物品进行分类处理。消毒整个工作台面，再让排风至少运行10分钟。5．8放下前玻璃门，打开生物生物安全柜紫外线灯进行毒。5．9离开实验操作区前脱去第二层手套放到指定容器内消毒处理。5．10填写仪器使用记录。6．实验后物品、污染物处理6．1对不可回收的污染物品小心包扎后，在高压灭菌器内按规定要求进行高压灭菌处理。然后按医用垃圾交中心统一处理。6．2对可回收的污染物品小心包扎后，在高压灭菌器内按规定要求进行高压灭菌处理。之后转入洗刷间进行洗刷。6．3对一次性实验用品放入容器内高压灭菌，然后按医用垃圾交中心统一处理。6．4对不可高压灭菌处理的物品，应选择适当的消毒剂进行浸泡消毒。可回收的物品，送洗刷室；不可回收的物品，按中心“三废”处理的有关规定执行。7．出实验室程序7．1打开实验室内门，出来后随手关闭。将实验室专用罩衣脱下，挂在缓冲区，待稍后进行紫外线消毒。脱掉一次性帽子、口罩和手套，放入待消毒的垃圾筒内，按门锁按钮，打开外门，更换拖鞋，打开紫外线按钮，同时关闭排风按钮，然后关闭外门。注：若进入时打开照明，则此时应关闭。7．2如实验过程中在传递窗传递过污染性物品，在实验后应进行紫外线消毒。7．3待消毒完毕后（至少30分钟），关闭生物安全柜和紫外线按钮。8．注意事项8.1应保持实验室环境清洁。8.2工作台内部空间需用消毒剂擦洗，如消毒剂具有腐蚀性，要用自来水清洗台面，以避免腐蚀。8.3操作台内的实验器具应避免阻挡前后的穿孔网格，并且避免把东西卷入其中。所有的操作应该在距离前面的格栅约10厘米以内的工作面上进行。8.4操作时应动作缓慢，减少不必要的手和手臂伸进和伸出空气屏障，以免影响气流。8.5工作台在操作时，应尽量减少实验室内开门、关门，人员走动等情况，以免影响室内气流。8.6通常情况下，在生物安全柜里面不要使用酒精灯或类似的明火，因为他们会破坏气流模式、损坏HEPA过滤器，并且有火灾的危险（除非有特殊的要求）。8.7警报灯或警铃响时切勿继续操作。8.8一旦工作台在操作时出现意外事故，须在这些东西搬出之前，连同工作台在内进行全面消毒，如果溢出的污水或液体集中在排液槽中，必须采取紧急措施将污水排出。同时填写《实验室潜在危险材料溢出或浅出记录》。8．9试验结束后将试验物品移出生物安全柜，不得将生物安全柜当成储物箱。9．维护保养9.1当生物安全柜移动后或实验室布局改动时，应该由有经验的工作人员对生物安全柜的屏障作用重新进行测试。9.2半年一次生物安全柜内沉降菌检测：生物安全柜消毒清洁后，紫外线照射30分钟，开前门通风十分钟后，于工作台面中部均匀放置两块已制好、经检验无菌的普通营养琼脂培养皿，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后倒置，取出放36℃培养箱培养24小时以上，用肉眼直接进行菌落计数，以≤1为合格。9.3检查前玻璃驱动装置的松紧度。9.4每年请厂商对生物安全柜进行风速、洁净度检测一次。9.5根据需要更换紫外灯管和照明灯管。杀菌灯工作超过一定时间后会失去效果，当工作台灯照强度低于每平方厘米40微瓦时，就应更换新的杀菌灯。（可用紫外线灯表来测定工作台表面的灯照强度）9.6应根据需要更换高效过滤器（HEPA），由专业人员进行操作。（高效空气过滤器的寿命取决于如何使用它。在实验室的正常条件下，可以预测本过滤器至少可以使用五年。）9.7在开始工作之前要让生物安全柜的风机至少运行3-5分钟使生物安全柜内的空气进行净化。9.8定期对生物安全柜的工作台面、内壁（不包括送风滤器扩散板）和观察窗的内表面用消毒剂（75%酒精或1g/L有效氯）擦拭。再用无菌蒸馏水进行擦拭以清除残余的消毒剂。9.9注意避免物品或液体进入格栅下面。经常用柔性的清洁剂或玻璃专用清洁剂清洗箱体外表面和玻璃。9.10每月消毒一次工作台下面的托盘。编写：审核：批准：批准日期：年月日BSL-2生物安全实验室工作规定生物安全实验室的分级标准：一级对人体、动物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动物和环境不会造成严重危害。有有效的预防和治疗措施。三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人传染上严重的甚至是致命疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，或未知的、危险的致病因子。没有预防治疗措施。一、实验人员须知1、进行BSL-2实验，应事先与实验室联系，填写《BSL-2实验申请表》，经批准后方可进行。2、开始实验，请提前20分钟运行空调机组和紫外灯杀菌，开空调机组顺序是：开排风机→开空调循环风机→开空调冷热源机组。3、实验中所需的器械、物品均需严格消毒后方可带入实验室。4、实验人员进入实验室，需按照实验室规定的程序进入。（1）、人员进入前必须穿好防护服。（2）、操作时，手不可直接接触动物和消毒灭菌过的物品。操作前必须戴上灭菌过的、完好的乳胶手套或消毒过的浸塑手套。操作中手套不能接触安物安全柜内未经消毒的物品。（3）、操作时，人员尽量不要停留在回风口的位置，。（4）、操作时，使用生物安全柜要严格按照其操作说明书操作，遇生物安全柜报警等情况，应立即停止实验并迅速撤离实验室，由专业人员排除故障后，方能进入实验室开始实验。5、开实验室时，立即关闭空调机组，关机顺序是：关空调冷热源机组→关空调循环风机→关排风机。最后将紫外灯打开杀菌消毒。6、BSL-2实验管理者原则上应每天观察空调设备的，如发现有异常情况应及时通知专业公司处理，严禁空调设备存在故障时进行实验，严禁非专业人员擅自对空调机组的工作状况进行随意调整。7、非实验人员不得擅自进入BSL-2实验室。8、实验后，不必要的仪器、物品、样本或死亡的动物，经过专用消毒器灭菌后方可带出实验室。9、实验者不得擅自搬动动物实验室的设备，如有损坏者，按价赔偿。10、实验全部结束，实验者应立即通知实验室管理人员，以便及时清理、消毒并做好迎接新课题的一切准备工作。二、实验室的例行清洁卫生和例行消毒规定1、实验室内环境符合BSL-2实验室级别的要求，外环境整洁。2、实验结束后对相应的实验设施作一次清洁消毒，再次实验前作一次加强消毒。3、常用消毒剂应每周更换，以保证其消毒性能。4、消毒前后物品应严格分开保存。5、每隔一定时间更换消毒剂品种，以防抗药性。BSL-2实验室意外事故的处理规定意外事故应对方案:1、防备自然灾害，如火灾、洪水、地震和爆炸2、生物危害的危险度评估3、意外暴露的处理和清除污染4、人员和动物从现场的紧急撤离5、人员暴露和受伤的紧急医疗处理6、暴露人员的医疗监护7、暴露人员的临床处理8、流行病学调查9、事故后的继续操作。在制定意外事故应对方案时应考虑以下几方面问题：1、高危险度等级微生物的鉴定2、高危险区域的地点，如实验室、储藏室和动物房3、明确处于危险的个体和人群4、明确责任人员及其责任，如生物安全官员、安全人员、地方卫生部门、临床医生、微生物学家、兽医学家、流行病学家以及消防和警务部门5、列出能接受暴露或感染人员进行治疗和隔离的单位6、暴露或感染人员的转移7、列出免疫血清、疫苗、药品、特殊仪器和物资的来源)8、应急装备供应，如防护服、消毒剂、化学和生物学的溢出处理盒、清除污染的器材物品。微生物实验室应急程序刺伤、切割伤或擦伤-----受伤人员应当脱下防护服，清洗双手和受伤部位，使用适当的皮肤消毒剂，必要时进行医学处理。要记录受伤原因和相关的微生物，并应保留完整适当的医疗记录。潜在感染性物质的食入----应脱下受害人的防护服并进行医学处理。要报告食入材料的鉴定和事故发生的细节，并保留完整适当的医疗记录