牛双芽巴贝斯虫HSP20基因的克隆表达及其重组蛋白的免疫反应

新疆农业大学硕士学位论文牛双芽巴贝斯虫HSP20基因的克隆表达及其重组蛋白的免疫反应性研究姓名：孙其喆申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：简子健20090601牛双芽巴贝斯虫HSP20基因的克隆表达及其重组蛋白的免疫反应性研究作者：孙其喆学位授予单位：新疆农业大学相似文献(3条)1.期刊论文简子健.孙其喆.马素贞.王晓萍.JIANZi-jian.SUNQi-zhe.MASu-zhen.WANGXiao-ping牛双芽巴贝斯虫新疆株HSP20基因的克隆和真核表达质粒的构建-新疆农业科学2009,46(2)通过设计牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白HSP20基因序列的特异性引物,采用PCR方法从疑似牛焦虫病的患牛全血基因组中扩增得到699bp的HSP20基因,将其连入pMD18-T测序、鉴定,再将验证的699bp的HSP20基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核载体PCDNA3.1-HSP20.经再次测序、鉴定后,尾静脉注射小白鼠进行HSP20基因的瞬时表达,取其肝脏提取总RNA,经RT-PCR方法扩增出一条534bp的目的条带,表明真核表达质粒构建成功.2.期刊论文孙其喆.马素贞.简子健.苗中秋.王晓萍.SUNQi-zhe.MASu-zhen.JIANZi-jian.MIAOZhong-qiu.WANGXiao-ping牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白基因外显子的克隆与原核表达-新疆农业大学学报2009,32(1)从患牛焦虫病的牛全血样品中抽提总RNA,通过设计特异性引物,经RT-PCR扩增牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白20(HSP20)基因的外显子,将其插入pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体PGEX-4T-2-HSP20(exon).试验结果显示牛双芽巴贝斯虫HSP20基因外显子已被成功克隆.该基因的外显子序列与国际标准株HSP20外显子的序列存在两个碱基的突变,导致其编码的蛋白质出现了一个氨基酸的变异.测序结果还表明,克隆出的牛双芽巴贝斯虫HSP20基因外显子已正向插入原核质粒表达载体PGEX-4T-2,成功构建了PGEX-4T-2-HSP20(exon)表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中的得到表达.3.期刊论文简子健.马素贞.孙其喆.沈炯玉.苗中秋.吕伟.JIANZI-jian.MASu-zhen.SUNQi-zhe.SHENJiong-yu.MIAOZhong-qiu.L(U)Wei牛双芽巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立-新疆农业科学2010,47(4)[目的与方法]根据Genbank上登陆的双芽巴贝斯虫HSP20基因设计两对引物,SHSP-P1与SHSP-P2和SHSP-P3与SHSP-P4,以其建立牛双芽巴贝斯虫巢式PCR快速检测方法.[结果]第一次、第二次扩增的退火温度均为57℃,分别扩增出约631和409bp的条带,与预期的大小相符,而作为对照样本的牛巴贝斯虫、牛环形泰勒虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现.将感染双芽巴贝斯虫的全血基因组DNA做10倍递减稀释到106倍扩增时,巢式PCR还能见到目的条带,其灵敏度相当于4.6pg/mL全血基因组DNA.在对50份疫区牛全血DNA样本检测中,阳性检出率分别为22%(11/50).[结论]所建立的牛双芽巴贝斯虫巢式PCR方法准确、敏感、特异,可以用于牛双芽巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义.本文链接：授权使用：上海海事大学(wflshyxy)，授权号：4127c3db-4776-4d42-8bfb-9dee0014fb78下载时间：2010年9月11日