质粒小提OMEGA-EZNA-plasmid-mini

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资源描述

OMEGAEZNAplasmidminikitI试剂盒使用前准备:1、将RnaseA全部加入到SolutionI中;2、D6943-02的DNAWashBuffer中加入120ml的100%无水酒精;3、D6943-02的HBCbuffer中加入32ml的异丙醇;实验步骤:1、将带有质粒的E.coli接种于5ml的LB/抗生素培养液中,37℃220r12-16h;2、每次取1.0-5.0ml的菌液于EP管中,10,000g1min,弃上清;3、加入250ul的SolutionI/RNase混合液,涡旋振荡使细胞完全悬浮,混匀很重要,一定要混匀(SolutionI/RNase混合液储存于4℃冰箱);4、加入250ul的SolutionⅡ,轻轻上下颠倒4-6次,避免剧烈震荡,出现澄清液体,总时间不能超过5min;5、加入350ulSolutionⅢ,立即上下颠倒6-8次,出现白色沉淀(为蛋白质),注意一定要立即;6、室温下,≥10,000g离心10min(此时可以开始配胶,准备制备管);7、转移上清液至套有2ml收集管的HiBind®DNAMiniColumn中,10,000xg,离心1min(吸上清于制备管中,千万不要吸到沉淀);8、把柱子重新放回至收集管,加入500µLHBBuffer,10,000xg,离心1min,弃滤液;9、把柱子重新放回至收集管,加入700µLDNAWashBuffer10,000xg(加酒精),离心1min,弃滤液;10、重复步骤9一次,弃滤液;11、把柱子重新放回至收集管,13,000xg,空离2min(去残留酒精);12、转移柱子至新的1.5ml的离心管,加入30-50μLElutionBuffer或者无菌水,静置1-2min,10,000xg,离心1min,洗脱出DNA;13、质粒储存于-20℃。

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