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GE中低压层析柱柱效测定方法柱效测定是一项经常使用的操作，对于定量表征层析柱的工作状态是否良好，工艺的验证具有重要的意义。但是实际工作中很多朋友都遇到不会测柱效或者测出来注销过低的状况，不知道如何解决。所以今天我就给大家详细介绍一下柱效的正确测定方法，以及经常遇到的问题如何解决。本方法适用于所有GE公司中低压液相色谱的预装柱及自己填装的层析柱。介绍分为5个部分，测前准备、试剂选择、测柱效操作、测试结果积分、经常发生的问题。1.测前准备：⑴ÄKTA层析设备。要求设备的型号与层析柱大小匹配，从上样阀门到紫外和电导检测器之间的体积要做到最小（管路内径尽量细，管路尽量短），这对于准确测量实验室小层析柱的柱效非常重要。⑵测试平衡溶液及样品。这个部分在试剂选择中单独细说。⑶装填好的层析柱。使用平衡缓冲液在测柱效的流速下至少平衡1.5CV（柱体积），平衡方向与测柱效方向必须一致⑷样品环。容积大于1%柱体积。2.试剂选择测柱效主要有两种测试系统：1NaCl测试系统；2丙酮测试系统。只要操作正确，两个系统测出来的结果是基本一致的。但是要注意：各试剂的浓度不能随意改变，否则影响测试结果。⑴NaCl测试系统对于所有种类的柱子和填料，都可以使用氯化钠系统测柱效平衡液：0.4MNaCl水溶液样品：0.8MNaCl水溶液3.测柱效操作测柱效全程使用30cm/h线性流速。平衡层析柱至少1.5CV，将1%CV的样品（NaCl或丙酮）注射进入层析柱，使用平衡液冲洗直至电导或紫外280nm出现响应峰。4.测试结果积分以UNICORN6版本为例演示给大家看如何操作（各UNICORN版本操作基本一致）。以NaCl系统测柱效的所有操作针对电导曲线，以丙酮系统测柱效的所有操作针对UV280曲线（手头没有测柱效结果，所以随便找了一个图，里面有两个峰。大家测柱效的结果只有一个峰）1)在Evaluation窗口中打开测柱效结果文件，在Curve窗格中点击右键，选择Customize2)勾选复选框去掉不需要显示的曲线3)在工具栏中点击峰积分按钮，进行积分处理或者在Integrate下拉菜单中点击PeakIntergrate进行积分处理4)选择需要积分的曲线以及积分表存储位置，基线类型默认为Calculatebaseline5)在积分窗口中点击PeakWindow，出现以下窗口，通过拖动左右两条直线可以选择需要进行积分的范围，点击OK确认6)在积分窗口点击RejectPeaks对需要分析的色谱峰可进行高级定义，包括最小峰高、峰宽、峰面积、峰个数等，在这里最常用的是在Peakareaislessthan输入需要显示的最大峰的个数，点击OK确定7)在Columnheight(bedheight)一栏中输入柱床高度，在柱效测定中此项必须填写8)点击积分窗口中SaveandEditPeakTable按钮，可以对峰进行高级操作9)点击积分窗口中的OK，查看积分结果10)在Peakdata区域点击右键，选择Customize在Selectpeaktablecolumns对话框中找到需要显示的数据，plateheight（HETP）、Asymmetry等，点击OK执行。Peakdata区域中将会显示增选的分析结果判断层析柱柱效是否合格的标准是Platespermeter和Asymmetry。Platespermeter要求大于说明书上要求的最低限（如3000或20000），或者1000000/平均粒径/3(计算出来就是说明书上的值)。Asymmetry要求处于0.8~1.8之间。满足这两点，说明柱子装填没问题。5.经常发生的问题如果不幸你测出来的柱效不合格，请检查以下原因：影响柱效的可能原因对策柱子装填不均匀重新装柱管道中液流不稳定NaOH清洗系统；平衡柱子1.5CV以上柱子中有气泡溶液脱气；反压阀在线，冲洗足够长时间凝胶有结块现象拆掉层析柱，NaOH清洗凝胶后重新装柱；换新的凝胶柱子液流分配不好换分配器或层析柱系统死体积大换细管路；短接柱位阀样品体积太大上1%柱体积流速太快使用30cm/h线性流速