DAPI染色

DAPI介绍在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在400nm左右。DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Greenfluorescentprotein,GFP)或TexasRed染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。DAPI中文名：4，6-联脒-2-苯基吲哚(?)英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H-indole-6-carboxamidine，DAPIdihydrochloride分子式：C16H15N5分子量：277.324CASnumber：28718-90-3光谱性质：与双链DNA结合时最大吸收/最大发射为358nm/461nm；与RNA结合时，最大发射移动到400nm左右。编辑本段DAPI染色原理染色原理：DAPI为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100%)，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。a、正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。b、染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。c、染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。d、细胞核破裂形成碎片，核解体。编辑本段染色步骤在细胞移植前，将DAPI以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS缓冲液漂洗至少6次以洗掉未结合的DAPI，在用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM培养基制成细胞悬液以备用。存储条件：-20℃避光保存每次使用，用量较少，可反复冻融，无需分装注意事项：1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。2、贮存液用70%酒精配制，浓度100µg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释，最终浓度100ng/ml。3、DAPI是非常优秀的DNA染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。