搜索
DNA连接酶•1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3’羟基和5’磷酸基团发生缩合反应，形成磷酸二酯键。•DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD+依赖型。•常用的DNA连接酶：T4DNA连接酶E.coliDNA连接酶TscDNA连接酶E.coli、T4和TscDNA连接酶催化连接底物反应需辅因子用途连接温度连接时间E.ColiDNA连接酶DNANAD黏性末端的连接4~15过夜T4DNA连接酶DNA、RNAATP黏性末端平末端的连接及切口的连接4~15过夜TSCDNA连接酶DNANAD黏性末端平末端的连接及切口的连接45~65较短二、DNA片段的连接方法•由于待连接的DNA片段具不同形式的末端，因此须采用不同的连接方法。•（一）具互补黏性末端片段之间的连接•（二）具平末端DNA片段之间的连接•（三）DNA片段末端修饰后进行连接•（一）具互补黏性末端片段之间的连接（二）具平末端DNA片段之间的连接（三）DNA片段末端修饰后进行连接1、DNA片段末端同聚物加尾后进行连接2、黏性末端修饰成平末端后进行连接3、DNA片段5’端脱磷酸化作用后连接4、DNA片段加连杆或衔接头后连接DNA片段末端同聚物加尾后进行连接特点：给平末端DNA片段3’-OH加上同聚物。黏性末端修饰成平末端后进行连接特点：先修饰成平末端，后连接。DNA片段5’端脱磷酸化作用后连接特点：先使一种DNA片段的5’端由磷酸基（-P）转变为（-OH）DNA片段加连杆或衔接头后连接