HUVEC分离方法

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资源描述

HUVEC细胞分离方法1、清洁脐静脉:取20cm左右脐带,输液针(带套管)插入脐静脉,用血管钳连同脐带输液针套管一起夹住,注射器取20mlHank’s液由输液针注入脐静脉,将脐静脉内血块冲洗干净,并尝试夹闭脐静脉另一端,检查脐静脉密闭性,最后注入空气,将Hank’s液全部排出。2、酶解HUVEC细胞:取0.1%(1mg/ml)I型collagenaseHank’s液20ml,由输液针注入脐静脉,开始可将脐带另一端提起,排出气泡,当酶液溢出时用血管钳夹紧脐带,封闭脐静脉,然后将酶液全部注入,可见脐静脉膨胀,再次检查密闭性后,将整跟脐带放入无菌的37℃PBS中孵育15-20分钟(一定不能超过25分钟),取出脐带,用手沿静脉方向按摩,帮助细胞下来。在脐带末端血管钳内侧剪断,收集酶液至50ml离心管中,再用25mlHank’s冲洗脐静脉,将酶解下来的HUVEC全部冲出,一并收集至离心管中。3、收集、培养HUVEC细胞:将收集到的HUVEC混悬液至离心机中离心(1500rpm5min),倒去上清,注意勿将下层絮状物倒出,加内皮细胞生长培养基8ml至离心管中,重悬HUVEC,分于两个大皿培养。24小时后换液。

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