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兽用生物制品技术主讲教师：任平教授2项目六病毒性疫苗制造技术任务1病毒性组织苗的制备流程任务2病毒性禽胚培养疫苗的制备流程任务3病毒性细胞培养疫苗的制备流程3培养目标知识目标掌握病毒性组织苗、禽胚苗和细胞苗的制作工序及制作要点。能力目标能够运用此项技术完成某种病毒疫苗的制作。素质目标培养学生团队合作的精神。适应岗位的能力。4任务1病毒的组织苗制造如何完成此项任务？工序过程5各工序操作要点工序一、动物选择1．清洁级（二级）以上的等级实验动物或无规定人畜共患病原体的动物。2．易感性高。3．品种、年令和体重合乎要求。工序二、种毒与接种种毒：致死力强大的自然毒株的脏器组织毒或强毒株的增菌培养物，也可用弱毒株组织毒种。必须检查合格后使用。接种途：脑内注射、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射。6各工序操作要点工序三、观察与收获根据观察征象和检查的结果选出符合要求的发病动物按规定方式剖杀，采取收集含毒高器官组织。工序四、制苗1．组织灭活疫苗：收获的组织经无菌检验及毒价测定合格后按比例加入灭活剂制成匀浆，然后按不同病毒的灭活温度、时间进行灭活或脱毒。2．弱毒组织疫苗：无菌取组织、称重、剪碎、加保护剂，过滤、稀释，检查（检菌、毒价）、鉴定、分装、冻干。7任务2病毒性禽胚培养疫苗制造如何完成此项任务？工序过程8各工序操作要点工序一、鸡胚选择受精卵必须来自SPF鸡群，最低也应来源于未用抗生素药物的非免疫鸡。受精卵从孵育至培养全过程应保持无菌，接种日龄视病毒而定。工序二、种毒与毒种继代工序三、接毒与收获1．接毒：接毒途径和接毒量，视不同病毒不同。2．培养3、收获病毒9各工序操作要点工序四、配苗收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后配苗。湿苗：于鸡胚液中加青、链霉素（每ml500~1000u）放置0~10℃，冷处理后分装。冻干苗：按比例加入保护剂（5%蔗糖脱脂乳）、滤过、加青链霉素、分装、冻干。10任务3病毒性细胞培养疫苗制造如何完成此项任务？工序过程11各工序操作要点工序一、种毒与毒种继代制苗用种毒应经毒力、最小免疫量、安全性、无菌检验合格，多为冻干品。指定部门提供。领取的种毒应按规定在细胞继代适应后作毒种，并应按规定控制在一定代数之内。工序二、营养液配制分细胞培养用生长液（含5%~10%血清）和病毒培殖用的维持液（2%~5%血清），不同细胞所需营养液不同，但内均含多种aa、V和一些有机物、无机物，并有商品粉剂出售。只需溶解后经除菌处理即可。12各工序操作要点工序三、细胞制备（分原代细胞和继代细胞）选择依据：1.病毒的适应性高、毒价高。2.细胞来源方便，制备简备，生命力强。如猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗用犊牛睾丸原代细胞，狂犬病弱毒细胞适应疫苗，采用BHK21。制备细胞程序：原代细胞将动物器官用胰蛋白酶消化，要装培养成单层，如为冻干，可按细胞数分装，扩增培养。常用细胞培养方法为静止培养和转瓶培养。微载体培养和悬浮培养我国仍处于试验之中。用传代细胞培养应注意不要用种瘤细胞。13各工序操作要点工序四、接毒与收获病毒接种有同步和异步。培养当出现70%~85%以上细胞病娈时，即可收获。细胞毒液经无菌检验，毒价测定合格后供配苗用。工序五、配苗1．灭活疫苗：不同病毒采用不同灭活剂，有的需加佐剂，分装。2．冻干苗：加保护剂或稳定剂、混合、分装、冻干。14检验动物或鸡胚等健康动物（SPF鸡胚等）种毒毒株感染动物（或胚胎）取已感染组织含毒悬液配苗分装、冻干活疫苗配苗、乳化灭活灭活病毒液纯化病毒悬液分装灭活疫苗鉴定病毒性动物组织疫苗与禽胚培养疫苗生产工艺流程佐剂原料配制保护剂配制原料15复习思考题1．选择病毒性疫苗生产用毒种的原则是什么?2．简述灭活疫苗和活疫苗的生产工艺流程。3．简述病毒性组织苗的生产工艺流程。16