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第二章天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术提取分离纯化鉴定药效毒理研究、结构修饰、新药研发↓↓↓混合物单体→→第一节提取方法与技术提取方法与技术溶剂提取法浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法、超声提取法水蒸气蒸馏法超临界流体萃取技术溶剂提取法基本原理依据“相似相溶”原理，选择对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将有效成分从药材组织中溶解出来的方法。溶剂提取法操作关键——溶剂的选择根据欲提取成分的亲水性及亲脂性选择与之相适应的溶剂进行提取。常用溶剂？PetC6H6无水Et2OCH3ClEtOAcMe2COEtOHMeOHH2O水亲水性有机溶剂亲脂性有机溶剂溶剂提取法操作技术方法浸渍法渗漉法煎煮法回流提取法连续回流提取法超声提取法常用溶剂仪器装置操作过程适用范围优缺点溶剂提取法－－浸渍法常用溶剂：水、乙醇仪器装置：有盖的容器操作过程：将药材粗粉置容器中→加入适量的溶剂→常温或加热（40～80℃）浸泡（注：浸泡时应将容器盖严，并经常搅拌或振摇），一般浸泡3～5日或按规定时间→倾取上清夜过滤→提取液。药材可重复浸泡2～3次提取范围：适宜含淀粉、树胶等成分较多的药材以及含挥发性成分、遇热不稳定宜分解或被破坏成分的提取。提取优缺点：操作简便，但提取时间长、溶剂用量大，提取效率不高。水为溶剂易发霉、变质，必要时需加适量的防腐剂。溶剂提取法－－渗漉法常用溶剂：水、乙醇仪器装置：渗漉装置操作过程：将药材粉末装于渗漉筒内→上端不断添加新溶剂，使其渗过药粉（溶出可溶性成分）→提取液提取范围：适宜对热不稳定且易分解的成分的提取。提取优缺点：有较大的浓度差，提取效率较高。但溶剂用量大，操作较烦。溶剂提取法－－渗漉法粉碎浸润装筒排气浸渍渗漉收集渗漉液溶剂提取法－－煎煮法常用溶剂：水仪器装置：砂锅、铝锅等（勿用铁器）操作过程：将药材饮片或粗粉加适量水→直火加热煮沸1h左右→过滤→提取液提取范围：对含挥发性及遇热不稳定的成分的药材不易用本法。提取优缺点：本法简单易行，提取效率比冷浸法高。但水溶性杂质多，水煎液易发霉。溶剂提取法－－回流提取法常用溶剂：有机溶剂仪器装置：回流加热装置操作过程：将药材粗粉装于圆底烧瓶中→加入适量溶剂→水浴中加热回流提取1h→过滤（残渣重复提取两次，合并提取液）→提取液提取范围：不适用于对热不稳定及易分解的成分提取优缺点：提取效率比冷浸法高。但装置较复杂溶剂提取法－－回流提取法回流提取装置溶剂提取法－－连续回流提取法常用溶剂：有机溶剂仪器装置：连续回流提取装置（索式提取器）操作过程：将药材装于滤纸袋，放入提取器内→连接装置→水浴加热回流提取适当时间→提取液。提取范围：不适用于对热不稳定成分的提取。提取优缺点：溶剂用量少，提取效率高。但装置设备要求高。溶剂提取法－－连续回流提取法蒸气虹吸管连续回流提取装置烧瓶萃取溶剂（盛放固体）溶剂提取法－－超声提取法定义：是一种利用超声波提取有效成分的方法。基本原理：利用超声波的空化作用，破坏植物药材的细胞，使溶剂易于渗入细胞内，同时超声波的强烈振动能传递大量能给浸提的药材和溶剂，使它运动们做高速，大大提高了提取效率。特点：提取时间短、提取效率高、无需加热。适用范围：遇热不稳定成分的提取、各种溶剂的提取。水蒸气蒸馏法原理——是将水蒸气通入含有挥发性成分的药材中，使药材中挥发性成分随水蒸气蒸馏出来的提取方法。适用范围——本法适用于能随水蒸气蒸馏而不被破坏并难溶于水的成分的提取，常用于挥发油的提取，此外挥发性生物碱如麻黄碱和槟榔碱亦可用此法提取。水蒸气蒸馏法仪器装置：包括水蒸气发生器、蒸馏瓶、冷凝管、接收器等几部分。三通口（下有螺旋夹）水蒸气蒸馏法注意事项：1、发生器内的水量不得超过其容积的2/3。2、安全玻璃管应插到发生器的底部以调节内压。3、蒸馏器内药材要先加水润湿。4、通蒸气的导管应插入蒸馏器内的药材底部。5、蒸馏结束后，首先应打开水蒸气发生器与蒸馏器之间三通下口的螺旋夹，放入空气后，再停止加热。超临界流体萃取法（SFE）定义：SFE是一种利用某物质在临界区域形成的流体，对天然药物中有效成分进行萃取分离的新型技术，集提取和分离于一体。常用超临界流体：CO2、氧化亚氮、乙烷、乙烯、甲苯等。基本原理：根据超临界流体对溶质有很强的溶解能力，且在温度和压力变化时，流体和密度、粘度和扩散系数随之变化，溶质的亲和力也随之变化，从而使不同性质的溶质被分段萃取出来，达到萃取、分离的目的。超临界流体萃取法（SFE）分类（按溶剂和溶质分离方法的不同）：1、压力变化法——在一定的温度下，使超临界流体减压、膨胀，从而降低溶剂的密度，进行分离。2、温度变化法——即在恒压下提高温度或降低温度从而将超临界流体与溶质分离。至于采用升温还是降温，则要根据压力条件决定，一般多采用升温操作。3、吸附法——在分离器内装填能吸附萃取物的吸附剂。超临界流体萃取法（SFE）主要设备：萃取器、分离器CO2-SFE特点：（1）可在低温下提取（2）完全没有残留溶剂（3）提取效率高，节约能耗应用：从石油中脱沥青从咖啡豆中脱咖啡因从烟草中脱尼古丁从啤酒花中提取酒花精香精和香辛料成分的提取课堂活动用连线将各种提取方法与其特点和应用连接起来用有机溶剂自天然药物中提取脂溶性成分渗漉法煎煮法提取能随水蒸气蒸馏且不溶于水的成分提取有升华性的成分提取受热易破坏的成分最简便的方法不加热而浸出效率高有机溶剂用量少而提出效率高以水为溶剂加热提取升华法水蒸气蒸馏法连续回流提取法回流提取法浸渍法小檗碱微溶于水，能溶于热水及乙醇。其盐酸盐难溶于水，易溶于热水；而硫酸盐易溶于水。利用此性质，可选择水温浸或渗漉法提取。渗漉法操作如下：取三棵针的根粉碎后用1%硫酸浸泡渗漉，渗漉液用盐酸酸化至pH3，加食盐饱和后，小檗碱盐酸盐结晶即析出。应用实例三棵针中的小檗碱可用什么方法提取？白头翁皂苷易溶于乙醇，可用回流法提取。取白头翁粉末先用乙醚提取，除去脂溶性物质，然后再用乙醇回流，乙醇回流液浓缩至小体积，加适量丙酮，有大量白色粉末沉淀，为白头翁皂苷。应用实例白头翁中的白头翁皂苷可用什么方法提取？丹皮酚有挥发性，可用水蒸气蒸馏法提取。取徐长卿全草粉碎后，水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，乙醚萃取，回收乙醚，得粗结晶，再用乙醇重结晶即得丹皮酚。应用实例徐长卿中的丹皮酚可用什么方法提取？其他提取方法与技术微波辅助提取法定义：利用微波加热的特性对物料中目标成分选择性提取的方法。特点：快速、高效、高度选择性、对环境无危害例子：微波辅助提取鹰爪豆碱及其代谢产物可将产率由传统的52.3%提高到80.3%，且省事、省溶剂。提高拓展其他提取方法与技术旋流提取法定义：采用搅拌机搅拌，一定的搅拌速度、水提温度、提取时间的提取方法。例子：提取金盏花，对提取液中黄酮类化合物、皂甙、有机酸等进行分析测定，结构表明旋流法的提取效率高。提高拓展其他提取方法与技术半仿生提取法定义：即从生物生物学的角度，将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，模拟口服给药后经胃肠道装运的环境，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。即将药粉以一定pH的碱水提取，提取用水的最佳pH和其他工艺参数的选择，可用一种或几种有效成分结合主要药理作用指标，采用比例分割法来优选。例子：以芍药甙、甘草次酸为指标，比较芍药止痛颗粒半仿生提取法与传统水煎煮法的提取率，结构半仿生提取法优于传统水煎煮法。提高拓展其他提取方法与技术中药动态逆流提取法采用动态罐组式逆流提取工艺、单罐循环提取工艺和中药三效节能蒸发器与喷雾干燥装置，并将其组合起来，可实现从药材煎煮、浓缩、醇沉、过滤至浸膏或干粉的过程，适用于多种溶剂连续或间隙提取。提高拓展其他提取方法与技术酶解法：中药制剂中的杂质大多为淀粉、果胶、蛋白质等，可选择相应的酶予以分解出去。加压逆流提取法：是将若干提取装置串连联，溶剂与药材逆流通过，并保持一定接触时间的方法。提高拓展第二节分离精制和鉴定的方法与技术提取液的浓缩浓缩可以通过蒸发或蒸馏来完成，具体的方法有常压蒸发、减压蒸馏、薄膜蒸发、反渗透法、超滤法等。浓缩过程中应注意防止热敏性成分被破坏，尽量避免不必要的损失。旋转蒸发仪分离、精制方法与技术系统溶剂分离法两相溶剂萃取法沉淀法结晶法分馏法透析法升华法色谱法系统溶剂分离法原理：按极性由小到大的顺序选用不同极性的溶剂组成溶剂系统，一次提取分离提取液中各种不同成分，使各溶解度差异的成分得到分离。目的：确定有效部位思考题？某中药中含有脂肪油、生物碱、果胶、皂苷等成分，写出采用适当溶剂，以系统溶剂分离法使之分离的流程，并指出各种成分出现的部位。两相溶剂萃取法原理：利用混合物中各种成分在两种互不相溶的溶剂中的分配系数的差异而达到分离的目的2)分离因子（b值）与分离难易的关系K=CU/CLb=KA/KBK值与萃取次数成反比，即K值越大，萃取次数越少，反之越多b值越大，越易分离；b1时，无法分离1)分配系数（K值）与萃取次数的关系两相溶剂萃取法方法：简单萃取法逆流连续萃取法逆流分溶法液滴逆流分配法两相溶剂萃取法——简单萃取法操作方法注意事项乳化现象如何避免？如何破坏？简单萃取法避免乳化：在操作过程中，可采用旋转混合、改用氯仿-乙醚混合溶剂萃取或加大有机溶剂量等措施尽量避免乳化现象的发生。简单萃取法破坏乳化：①较长时间放置。②轻度乳化可用一金属丝在乳化层中搅动使之破坏。③将乳化层抽滤。④将乳化层加热或冷冻。⑤分出乳化层，再用新溶剂萃取。⑥若因两种溶剂能部分互溶而发生乳化，可加入少量电解质（如氯化钠），利用盐析作用加以破坏。在两相比重相差很小时，也可加入食盐增加水的比重。⑦滴加数滴醇类如戊醇改变表面张力，破坏乳状液。两相溶剂萃取法——简单萃取法pH梯度萃取法？碱性、酸性、两性成分举例：生物碱、黄酮、蒽醌提示：全书重点内容之一利用混合物中各成分的酸（或碱）性强弱不同，相应改变溶剂PH值使之相继成盐或游离，改变成分在溶剂系统中的分配系数而与其他分成分离的一种方法。两相溶剂萃取法——逆流连续萃取法利用相对密度差异两相溶剂萃取法——逆流分溶法利用分配系数不同两相溶剂萃取法——液滴逆流分配法利用分配系数不同沉淀法1、含义在天然药物的提取液中加入某些试剂，使产生沉淀或降低溶解度，从而获得有效成分或去除杂质的方法。若生成的沉淀是有效成分，要求反应必须可逆；若生成的沉淀是杂质，则为不可逆反应。2、方法酸碱沉淀法、试剂沉淀法、铅盐沉淀法沉淀法——酸碱沉淀法黄连粗粉乙醇温浸、浓缩乙醇浓缩液放置、过滤滤液加浓HCl，放置酸性母液NH4OH碱化，乙醚处理沉淀┇┇甲基黄连碱沉淀法——酸碱沉淀法1、原理利用某些成分能在酸（或碱）中溶解，继而又在碱（或酸）中生成沉淀的性质。这种反应是可逆的，可使有效成分与其他杂质分离。2、适用范围此法适用于分离提纯酸性、碱性或两性有机化合物，如黄酮、蒽醌类酸性成分、一些生物碱、蛋白质等。沉淀法——酸碱沉淀法3、应用（1）酸溶碱沉法——碱性化合物（生物碱）例1：曼陀罗叶石灰水适量，搅拌均匀，苯回流提取苯提取液0.5%H2SO4萃取酸性水液苯液NaOH碱化到pH11，苯提┇硫酸阿托品┇沉淀法——酸碱沉淀法例2：苦参粗粉MeOH室温浸渍3次，每次24hMeOH提取液回收MeOHMeOH浓缩液加水稀释，加稀HCl调pH3～4，Et2O洗涤2次药渣酸水液Et2O液稍浓缩，加NaOH调pH13左右，加入CH2Cl2提取┇总生物碱沉淀法——酸碱沉淀法3、应用（2）碱溶酸沉法——酸性化合物（具有酚羟基的黄酮，具有羧基、酚羟基的蒽醌）具有内酯环结构的化合物（香豆素）例：槐米粗粉加约6倍量已煮沸的0.4%硼砂水溶液，搅拌下加石灰乳至pH8～9，并保持该pH值下微沸20～30min，趁热抽滤同法再提2次，合并提取液提取液在60～70℃，搅拌下用浓HCl调pH3～