2014-衣原体解析

第二十章衣原体Chlamydiae衣原体科衣原体属(3个种)沙眼衣原体鼠衣原体猪衣原体嗜衣原体属(6个种)肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体兽类嗜衣原体流产嗜衣原体猫嗜性衣原体豚鼠嗜性衣原体分类：四种衣原体的性状比较性状沙眼衣原体肺炎嗜衣原体鹦鹉热嗜衣原体兽类嗜衣原体自然宿主人、小鼠人鸟类、低等哺乳动物牛、羊原体形态圆形、椭圆形梨形圆形、椭圆形圆形基因组(bp)1,044,4591,230,2301,169,3741,106,197G+C(%)41～44.24041.339.3DNA同源性（同种不同菌株间）＞90%＞90%14%～95%88%～100%血清型19183质粒+－（N16株除外）++噬菌体－+++Pmp基因92110？注：Pmp：Polymorphicmembraneproteins（多形态膜蛋白）第一节概述衣原体（chlamydiae）：严格寄生于真核细胞内生长繁殖有独特的发育周期原核细胞型微生物能通过滤菌器生物学性状结构类似革兰氏阴性菌具有细胞壁具有DNA和RNA具有核糖体不能合成ATP细胞内寄生形态染色原体（elementarybody，EB）：小而致密的颗粒结构，直径0.2-0.4mm有细胞壁、类核，是发育成熟的衣原体具有强感染性，在宿主细胞外较为稳定，无繁殖能力。Giemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色。形态染色网状体（reticulatebody，RB）：又称始体（initialbody），结构大而疏松，直径0.5-1.0mm以二分裂繁殖，是衣原体的繁殖型无细胞壁，代谢活跃，不具有感染性Giemsa和Macchiavello染色呈蓝色发育周期1.原体的吸附与摄入2.形成吞噬体3.原体转化为始体4.始体二分裂繁殖成子代原体5.包涵体（inclusionbody）形成6.子代原体释放衣原体的发育周期原体吸附于细胞，8小时后发育成始体并增殖；30小时后始体开始分化为原体，并在细胞形成包涵体；48小时后细胞破裂，释放的原体继续感染邻近细胞包涵体衣原体在宿主细胞内增殖形成的网状体和子代原体的空泡。形态、位置、染色性有助于鉴定衣原体。原体和始体的比较原体（EB）始体（RB）小而致密大而疏松感染型，有高度感染性无感染性无繁殖能力繁殖型，以二分裂繁殖代谢活动少代谢活跃有细胞壁、类核，发育成熟无细胞壁胞外稳定胞外不稳定Giemsa染色呈紫色，Macchiavello红色Giemsa和Macchiavello染色均为蓝色鸡胚接种：6～8日龄鸡胚卵黄囊中繁殖，感染后3～6天致鸡胚死亡，并可在卵黄囊膜中找到包涵体、原体和始体颗粒。组织细胞培养：可在HeLa、McCoy或HL等细胞中生长良好，可将接种有标本的细胞离心以促使衣原体穿入细胞。培养特性属特异性抗原：位于细胞壁的共同抗原，为脂多糖，类似于G-菌的脂蛋白-脂多糖复合物，可用补体结合试验检测。抗原结构•种特异性抗原：大多数衣原体种特异性抗原位于主要外膜蛋白（majoroutermembraneprotein,MOMP）上，可用补体结合试验和中和试验鉴别不同种衣原体。•型特异性抗原：根据MOMP可变区氨基酸序列的不同，可将每种衣原体分为不同的血清型或生物型（biovar）。抵抗力耐冷不耐热对常用消毒剂敏感对四环素、氯霉素、红霉素等敏感致病性MOMP能阻止吞噬体与溶酶体融合，表位易变异，在体内可逃避特异性抗体的中和作用而继续感染细胞。具有类似革兰氏阴性菌的内毒素，抑制宿主细胞代谢，破坏宿主细胞。内毒素能刺激机体，引起免疫病理损伤，造成感染部位瘢痕和肉芽肿。热休克蛋白（HSP）能刺激机体巨噬细胞产生TNF-α、IL-1、IL-6等炎症性细胞因子。免疫性产生特异性细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主。通常免疫力不强，且为时短暂，常造成反复感染、持续性感染和隐性感染。微生物学检查PCR鸡胚或细胞接种分离培养鉴定标本DNA测序血清学检查特异、敏感涂片镜检敏感性差第二节主要病原性衣原体•沙眼衣原体Chlamydiatrachomatis•肺炎衣原体Chlamydiapneumonia•鹦鹉热衣原体Chlamydiapsittaci1956年，汤飞凡等首次分离培养出沙眼衣原体，结束了半个多世纪关于沙眼病原的争论。他是世界上发现重要病原体的第一个中国人。沙眼衣原体原体为圆形或椭圆形，直径约0.3mm，Giemsa染色为紫色。原体能合成糖原，可被碘液染成棕褐色。始体直径0.5-1.0mm，Giemsa染色为蓝色。沙眼衣原体根据侵袭力和引起人类疾病的部位：沙眼生物型：4个血清型（A、B、Ba和C）生殖生物型：11个血清型（D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、Ja和K）LGV生物型：4个血清型（L1、L2、L2a和L3）。生物分型主要寄生于人类，无动物储存宿主。沙眼由沙眼生物型A、B、Ba、C血清型引起。经直接或间接接触传播。感染眼结膜上皮细胞形成包涵体局部炎症、结膜充血及滤泡增生结膜瘢痕、眼睑内翻倒睫及角膜血管翳角膜损害，影响视力或致盲包涵体结膜炎由沙眼生物型D-K血清型引起。婴儿经产道感染，引起急性化脓性结膜炎。成人因性接触、经手至眼或污染的游泳池水感染，引起滤泡性结膜炎。病变类似沙眼，但不出现角膜血管翳，也没有结膜瘢痕。婴幼儿肺炎由沙眼生物型D-K血清型引起。性病淋巴肉芽肿由LGV生物型引起。通过性接触传播。侵犯男性腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿，侵犯女性会阴、肛门、直肠，引起会阴-肛门-直肠组织狭窄。泌尿生殖道感染由沙眼生物型D-K血清型引起。经性接触传染。男性多表现为非淋菌性尿道炎（NGU），并可合并附睾炎、前列腺炎、直肠炎等。女性表现为尿道炎、宫颈炎、输卵管炎与盆腔炎等。非淋菌性尿道炎NGUnon-gonococcalurethritis•非淋菌性尿道炎是一种多病因的综合征，30%～50%的非淋菌性尿道炎与沙眼衣原体有关，20%～30%为解脲支原体感染，10%由阴道毛滴虫、白色念珠菌、单纯疱疹病毒、生殖支原体、腺病毒和杆菌等微生物引起。•典型表现有尿道刺痒，伴有尿急、尿痛及排尿困难，但症状较淋菌性尿道炎轻。清晨首次排尿前，屎道口可出少量黏液性分泌物。男性患者可发生附睾炎。女性患者不如男性典型，可发生黏液脓性宫颈炎、急性盆腔炎症性疾病及不育症等。常见性传播疾病的病原体病名病原体淋病淋球菌尖锐湿疣人类乳头瘤病毒非淋菌性尿道炎沙眼衣原体解尿支原体梅毒梅毒螺旋体生殖器疱疹单纯疱疹病毒艾滋病免疫缺陷病毒软下疳杜克雷嗜血杆菌性病性淋巴肉芽肿沙眼衣原体阴虱病阴虱疥疮疥螨传染性软疣痘病毒中国法定性病我国卫生部根据我国国情，于1991年颁发了《性病防治管理办法》，规定了必须报告的8种性病，即：1、淋病、2、非淋病性尿道炎、3、梅毒、4、尖锐湿疣、5、生殖器疱诊、6、软下疳、7、性病性淋巴肉芽肿、8、艾滋病。这8种性病，习惯上称为“中国法定性病”，其中前五种为临床常见性病。1975年世界卫生组织（WHO）正式将性病命名为性传播疾病后，把非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣。生殖器疱疹、艾滋病、生殖器念珠菌病、阴道毛滴虫病、细菌性阴道炎、性病性盆腔炎、阴虱、疥疮、传染性软疣、乙型肝炎、阿米巴病、股癣等20多种疾病也列入性病范畴，总称为新一代的性传播疾病。1.直接涂片镜检取结膜或宫颈刮片，Giemsa或碘液及荧光抗体染色镜检，观察上皮细胞浆内有无包涵体。沙眼衣原体感染宫颈刮片图片（荧光染色）沙眼衣原体包涵体的镜下形态（碘染色）(三)微生物学检查法2.分离培养取感染组织的渗出液或刮取物，接种于鸡胚卵黄囊或传代细胞，再用IFA或ELISA检测培养物中的沙眼衣原体。3.衣原体抗原与核酸组分检测ELISA：检测沙眼衣原体LPS和MOMPPCR和LCR（链接酶链反应）等扩增技术检测沙眼衣原体DNA医学微生物学预防重点是注意个人卫生，避免直接或间接的接触传染。治疗药物选用强力霉素、罗红霉素、阿奇霉素、加替沙星等。目前尚无有效的沙眼衣原体疫苗，MOMP是其主要候选抗原。由于MOMP的多型性，其疫苗不易对所有型别沙眼衣原体都产生保护性，故增加了MOMP作为疫苗的难度。防治原则防治原则预防重点是注意个人卫生，避免直接或间接的接触传染。治疗药物选用多西环素、罗红霉素、阿奇霉素、加替沙星等。目前尚无有效的沙眼衣原体疫苗。肺炎嗜衣原体是衣原体属的一个新种。命名：最初分离的两株病原体1965年自一名台湾小学生眼结膜中分离得到的一株TW-183（Taiwan-183）。1983年自美国西雅图一位急性呼吸道感染病人的咽部分离出另一株AR-39（acuterespiratory-39)，后发现这两株衣原体为同一菌株，乃命名为TWAR。肺炎衣原体肺炎衣原体原体直径为0.38µm，电镜下呈典型的梨形，并有清晰的周浆间隙，Giemsa染色呈紫红色，该方法对细胞内包涵体的定位比碘染法敏感。不含糖原，碘染色阴性。细胞培养McCoy和HeLa细胞，但都很难用于连续传代。目前常用HEp-2和HL细胞系，其在培养肺炎嗜衣原体的敏感性方面要高于前两者。致病性人类是唯一储存宿主经飞沫或呼吸道分泌物传播，引起急性呼吸道感染。症状主要为发热、咽痛、咳嗽等。为非典型性肺炎的主要病原体之一，与军团菌和支原体引起的肺炎在临床上很难鉴别。肺炎嗜衣原体与冠心病、动脉粥样硬化等慢性病的发生密切相关，但其具体机制尚待深入研究。2.免疫性机体感染肺炎嗜衣原体后以细胞免疫为主，体液免疫为辅，但免疫力不持久，可重复感染。病原学检查先直接涂片，观察包涵体；以荧光或酶标记的种特异性单克隆抗体检测标本中肺炎嗜衣原体抗原。微生物学检查法2.血清学方法微量免疫荧光试验（microimmuno-fluorescencetest,MIF）是目前检测肺炎嗜衣原体感染最常用且较敏感的血清学方法，被称为“金标准”。凡双份血清抗体滴度增高4倍或以上，或单份血清IgM抗体滴度≥1:16，或IgG抗体滴度≥1:512，可确定为急性感染，IgG≥1:16表示为既往感染。3.PCR检测特异性核酸根据肺炎嗜衣原体的16SrRNA基因或MOMP基因保守序列计特异性引物，采用PCR技术检测特异性核酸片段，可用于临床标本的快速诊断。生物学性状–原体呈球形或卵圆形。网状体呈球形或不规则形态。–原体在细胞空泡中增殖，形成结构疏松、不含糖原、碘染色呈阴性的包涵体。–至少可以分为6个血清型致病性–经呼吸道、破损皮肤、粘膜或结膜感染–临床表现多为非典型性肺炎鹦鹉热嗜衣原体微生物检查–取患者血、痰标本或咽拭子直接涂片染色观察包涵体。–IFA或ELISA检测特异IgM抗体作为早期、特异诊断。–PCR：可根据16SrRNA或MOMP基因设计特异引物，进行快速诊断。防治原则–严格控制传染源，对饲养的鸟类与禽类加强管理，避免鹦鹉热嗜衣原体的传播和流行。–从事禽类加工和运输的人员应注意加强防护，对进口的鸟类和禽类应加强检疫。–鹦鹉热确诊后，宜及早使用四环素类、大环内脂类或喹诺酮类抗生素彻底治疗。思考题•何为衣原体？衣原体的发育周期是什么？•病原性衣原体有哪些？各引起何种疾病？自主学习1淋菌性尿道炎和非淋菌性尿道炎的区别？