生化干扰试验-课件

实验十VC对酶法测定（CHOD-PAP法）胆固醇的干扰临床生化教研室：雷燕邹家琼干扰试验是测定实验方法特异性误差和干扰引起的误差首先确定被试物质是否引起误差，再探讨误差的来源是方法特异性差还是干扰是衡量方法准确度的方法学评价试验之一，在加入一定浓度干扰物的条件下,形成恒定误差,干扰物浓度不同,误差大小不同.目的要求掌握：干扰试验的原理和用途熟悉：1.干扰试验的设计与具体操作2.干扰值和干扰率的计算了解：注意事项和消除干扰的常用方法检测原理干扰试验对干扰物不作分析，只测定它对方法的干扰作用，以评价分析方法的准确性。干扰物产生的误差属恒定系统误差，它的大小随干扰物的浓度而异。常见干扰物有：血红蛋白、甘油三酯、胆红素、肌酐、防腐剂、抗凝剂、药物如VC等。本实验选用VC做酶法测定（CHOD-PAP法）的干扰试验，因VC可与CHOD催化生成的H2O2发生反应，使第二步POD的偶联反应显色强度减弱，产生负的测定误差。检测原理胆固醇酯+H2OCEH胆固醇+脂肪酸胆固醇+O2COD△4胆甾烯酮+H2O22H2O2+4-AAP+酚POD醌亚胺+4H2O特异性胆红素、维生素C、尿酸、Hb负干扰实验准备标本：肝素抗凝血浆校准品：胆固醇标准液5.17mmol/L干扰物：VC溶液1.浓度50.0mg/dl2.浓度100.0mg/dl3.浓度200.0mg/dl仪器：半自动生化分析仪(型号)【器材】半自动生化分析仪、试管、吸管、加样器【试剂】1.试剂组成R1：酚12mmol／L胆酸钠1.20mmol／L抗坏血酸氧化酶≥1.0KU／LPOD≥12.0KU／LR2：CEH≥1.0KU／LCOD≥0.5KU／L4-AAP1.20mmol／L样品制备基础样品：血浆450ul+H2O50ul干扰样品1：血浆450ul+浓度1VC50ul干扰样品2：血浆450ul+浓度2VC50ul干扰样品3：血浆450ul+浓度3VC50ul实验操作取6支试管分别标明空白管、标准管、基础样品、干扰样品1、干扰样品2、干扰样品3分别吸取相应的样本各10ul向各管加工作液1.0ml，混匀置37℃恒温10min505nm波长测定各管的吸光度计算干扰率（％）＝(干扰值÷基础值)×100％干扰值＝干扰管测定值干扰物加后浓度＝V干V总×干扰物加前浓度基础管测定值样品胆固醇值（mmol/L)加后维C值（mg/dl）干扰值（mmol/L）干扰率（％）基础样品干扰样品1干扰样品2干扰样品3干扰试验的数据处理结果判断当干扰物引起的偏差＜1/4总允许误差（TEA）时，则不会影响测定结果的临床应用价值，可近似地认为当干扰物浓度低于该浓度时不影响测定结果。注明:TC的TEA：10％（参照美国CLI88标准）注意事项★加入量要准确。★加入物体积应只占很小的比例（小于1/10）。★可疑干扰物浓度，加入的干扰物的浓度明显干扰常见浓度上限，尤其是达到病理标本最高值。★分析物溶液可使用标准液，最好采用病人标本。★增加测定次数，减少随机误差。消除干扰的常用方法设立试剂空白和标本空白用物理或化学方法，除去干扰物双波长或多波长检测排除干扰误差较大又无法消除，则需对方法进行改进或更换思考题1.什么是干扰试验？怎样理解干扰试验是测定恒定系统误差？2.为什么不能计算不同浓度下的平均干扰率？