影响荧光强度的因素

影响荧光强度的因素1.荧光的减退荧光物质经紫外线长时间照射及空气的氧化作用，会使荧光逐渐减退。2.荧光强度与溶液浓度的关系在稀溶液中：F＝KcF为荧光强度K—检测效率（由仪器决定）c为液体的浓度高浓度时，荧光物质发生熄灭和自吸收现象，使F与c不呈线性关系3.温度的影响温度对荧光强度的影响较敏感。溶液温度下降时，介质的粘度增大，荧光物质与分子的碰撞也随之减少，去活化过程也减少，则荧光强度增加。相反，随着温度上升，荧光物质与分子的碰撞频率增加，使去活化几率增加，则荧光强度下降。4.pH的影响带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光一般都与溶液PH值有关，例如：在pH=7~12的溶液中苯胺以分子形式存在，会发出蓝色荧光；而在pH2或pH13的溶液中苯胺以离子形式存在，都不会发出荧光。同时所用酸的种类也影响荧光的强度，例如：奎宁在硫酸溶液中的荧光比在盐酸中的要强。5.溶剂许多有机物及金属的有机络合物，在乙醇溶液中的荧光比在水溶液中强。乙醇、甘油、丙酮、氯仿及苯都是常用的有机溶剂，其中大多有荧光，应设法避免；一般避免的办法是稀释，或加入一部分水。6.荧光强度达到最高点所需要的时间不同，有的反应加入试剂后荧光强度立即达到最高峰。有的反应需要经过15~30分钟才能达到最高峰。7.有机溶剂中常有产生荧光的杂质，可用蒸馏法提纯。橡皮塞、软木塞及滤纸中也常有能溶于溶剂的一些带荧光的物质。注意事项①在实验中，拿比色杯要拿4个棱角，切勿拿光滑的透光面，以免影响检测效果②比色杯用后，应用醇或其它有机溶剂浸泡。③氙灯长时间使用（1000h以上）后可能会发生爆炸，所以保证期（500h）以后，应及时更换。④在安装或更换氙灯时，应确认电源开关为OFF，并切断电源。核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。核黄素在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测核黄素时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。