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动物细胞工程传代培养①先用_________等处理贴满瓶壁的细胞，再分瓶继续培养②_______代左右时，细胞增殖缓慢，甚至停止③部分细胞______发生改变，获得不死性，能无限增殖核型10～50胰蛋白酶一、过程考点一.动物细胞培养单个细胞细胞悬液原代培养传代培养一轮材料P238-23950代后细胞癌变2次胰蛋白酶①动物细胞培养原理：____________。其过程所用培养基一般是_____培养基。②动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养，因为_________________________.③动物细胞培养过程中两次用到____________，第一次的作用是___________________；第二次是_________________，目的是避免动物细胞的接触抑制。④将动物细胞分散成单个细胞培养的原因：保证细胞所需要的营养供应。保证细胞内有害代谢产物的及时排出。细胞增殖液体分化程度低，增殖能力强，更易于培养。胰蛋白酶将剪碎的组织分散成单个细胞将贴壁细胞从瓶壁上分离下来特别提醒（3）．培养条件(1)无菌、无毒的环境：①对_______和所有__________进行无菌处理。②加入抗生素。③定期更换培养液。(2)营养无机物：无机盐、_________等有机物：糖、氨基酸、促生长因子_______________：补充培养液中没有完全搞清楚的成分(3)温度和pH温度：__________pH：________(4)气体环境O2：__________所必需的CO2：维持______________培养液培养用具动物血清、血浆36.5±0.5℃7.2～7.4细胞代谢培养液的pH微量元素1.分析命题热图，明确答题要点如图，为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析：(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？(3)E点后细胞大多数具有异倍体核型，这样的细胞有什么特点？E点后的细胞属于细胞系，能无限增殖。(2)AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么？B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。发生了接触抑制。癌细胞阅读题目圈出关键词分析考点[例1]实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如下图所示。下列叙述错误的是()实验小鼠――→甲皮肤组织――→乙皮肤细胞――→丙培养细胞1――→丁培养细胞2A．甲过程需要对实验小鼠进行消毒B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型D．丁过程得到的细胞具有异质性C条件培养过程过程中细胞变化阅读题目圈出关键词分析考点考点二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1．动物核移植概念(1)供体：动物一个细胞的_______。(2)受体：去掉细胞核的__________。(3)结果：形成重组胚胎，发育成________。2．类型胚胎细胞核移植______________细胞核卵母细胞动物个体体细胞核移植难易结果3．体细胞核移植的过程选取10代以内的细胞，因为：___________________________。一般能保持正常的二倍体核型重组细胞重组胚胎1.(2016·全国课标卷Ⅱ，40)下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程。回答下列问题：(1)图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为________。过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用______________的方法。XX或XY显微操作去核法(2)经过多次传代后，供体细胞中________________的稳定性会降低。因此，选材时必须关注传代次数。(3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是________________________________________________。(4)与克隆羊“多莉(利)”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了__________________________________________________遗传物质（核型）卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响已经分化的动物体细胞核具有全能性供体性别选修三P49来源供体核卵母核移植技术阅读题目圈出关键词分析考点1.动物细胞融合(1)原理：__。(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、___、电激等。(3)意义：突破了的局限，使成为可能，也为制造__________开辟了新途径。细胞膜的流动性灭活的病毒有性杂交方法远缘杂交单克隆抗体考点三、动物细胞融合与单克隆抗体的制备抗体(1)优点：特异性强、，可大量制备。2.单克隆抗体(1)制备过程杂交瘤细胞能产生特异性抗体灵敏度高妙学妙记1、制备过程的“122”一融合，二筛选，二培养2、单克隆抗体的优点可、特、灵3）、两次筛选目的是什么？第1次-----杂交瘤细胞（多种）。第2次-----能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。问题强化：1）、本过程利用了哪些原理？免疫原理，动物细胞融合和动物细胞培养原理2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？继承了双亲细胞的遗传物质，能无限增殖又能分泌特异性抗体。4）、为什么细胞融合过程中使用病毒需要灭活？不灭活行吗？灭活的病毒能使细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。1.(2014·课标卷Ⅰ，40)研究者用抗原(A)分别免疫3只小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。制备杂交瘤细胞，取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)与体外培养的骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入PEG诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过______次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是________小鼠，理由是______________________________________________________。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有___________________________________________________，体系中出现多种类型细胞的原因是_____________________________________________。(3)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_____________________。4YY小鼠的抗体效价最高B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%正常细胞不能无限增殖融合2.（海南高考）单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSVⅠ的单克隆抗体可快速检测HSVⅠ。回答下列问题：(1)在制备抗HSVⅠ的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSVⅠ蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗___________的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了_______反应，再从小鼠的_______中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的________细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是_____________________。(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的________中使其增殖，再从_____中提取、纯化获得。(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSVⅠ蛋白，其原因是该抗体具有________和________等特性。HSVⅠ蛋白体液免疫脾脏骨髓瘤无限增殖且产生特异性抗体腹腔腹水灵敏度高特异性强单克隆抗体易错·清零易错点1动物细胞培养时，可使用胰蛋白酶或胃蛋白酶。胃蛋白酶适宜pH约为1.8。胰蛋白酶为7.2～7.8，而动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。易错点2动物细胞培养液中加入5%CO2的目的是维持气体平衡或用于呼吸。目的是“维持培养液的pH”。易错点3选择MⅡ末期的卵母细胞作核移植的受体细胞。MⅡ中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎。易错点4混淆原代培养与传代培养(1)原代培养：细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶前的细胞培养。(2)传代培养：原代培养的细胞由于空间不足或细胞密度过大导致接触抑制，需重新用胰蛋白酶处理，进行分瓶扩大培养，即传代培养。动物细胞融合单克隆抗体的制备动物细胞培养动物体细胞核移植技术胚胎工程动物细胞工程小结谢谢大家