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内江市第六人民医院作业指导书内江市第六人民医院检验科微微微生生生物物物室室室sssoooppp文文文件件件汇汇汇编编编（第四版）编制：郭梓审核：李泰均批准：吴燕云生效日期：二零一二年一月一日内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-1-内江市第六人民医院检验科微生物室1.细菌室人员岗位职责……………………………………………………..22.细菌室工作人员管理规定及报告时间………………………………….43.标本采集及保存要求……………………………………………………74.显微镜检查法操作规程…………………………………………………95.细菌室标本操作流程……………………………………………………116.细菌室形态检查操作规程………………………………………………137.细菌生化反应鉴定及其他实验操作规程………………………………188.细菌的接种与培养方法操作规程………………………………………239.支原体培养、鉴定、计数及药敏操作规程……………………………2510.血液感染病原体检验操作规程…………………………………………2711.中枢神经系统感染病原体检验操作规程………………………………2912.创伤和外科感染病原体检验操作规程…………………………………3113.下呼吸道感染病原体检验操作规程……………………………………3214.消化道感染病原体检验操作规程………………………………………3415.尿路感染病原体检验操作规程…………………………………………3516.脓汁及病灶分泌物细菌检验操作规程…………………………………3617.生殖系统标本的处理……………………………………………………3818.超广谱β—内酰胺酶（ESBLs）检.……………………………………4019.消毒灭菌效果监测……………………………………………………….4120.环境卫生学监测………………………………………………………….4221.采样及检查原则………………….………….…………………………..4322.各部位的消毒…………………………………………………………….48内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-2-文件编码JYK-SOP—001文件名称细菌室人员岗位职责执行时间（第四版）2012.02.01细菌室人员岗位职责1、上班后先搞好室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内，并做好记录。2、检查各种培养基及试剂的库存量，做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。3、接收样本：核对各样本号与申请单联号是否一致，如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理，如退单或重送样本等，并做好联系情况的记录。核查各送检样本是否符合要求。①痰液样本：先看外观、再直接涂片镜检，低倍镜下见白细胞25个，10上皮细胞25个／每个视野，为合格痰液。②无菌体液样本：检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。③容易干燥的样本：对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已经干燥。对不符合要求的样本必需与临床联系，以便作出相应处理，方法如联号不符的样本。做好记录。对符合的样本进行原始单的登记。4、样本编号：对符合的样本作出编号，普通细菌培养：痰液、咽拭子、血液增菌培养、尿液、胸、腹水、脑脊液、胆汁、脓液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培养。在各种培养基上及申请单上编号的同时均需明确标明接种日期。各种涂片样本编号：抗酸染色、G—双球涂片。5、样本接种：①血液、骨髓、腹水、关节液等：增菌培养瓶②痰液、咽拭子、脑脊液分别接种：血平板、巧克力平板、麦康凯平板；⑨尿液接种：血平板、巧克力平板、Mac：④各种无菌体液、脓液、泌尿生殖道分泌物接种：血平板、巧克力平板；⑤大便致病菌：接种SS平板、麦康凯平板；⑥分泌物的淋球菌培养接种：淋球菌专用平板；⑦支原体培养+药敏，按说明书接种支原体专用培养基；对以上接种样本的当前编号应记录于登记本上。此外对痰、脓液、脑脊液等在接种的同时应对其沉渣进行革兰染色，如有细菌和／或何种细菌为主立刻通知临床，并做好记录。6、涂片染色：抗酸染色严格按照操作规程，漂浮法涂片痰液样本，胸腹水、尿液、脑脊液等约10m1于试管中低速1000转／分离心2分钟后取上清于另一管中，5000转／分高速离心10分钟，取沉淀涂厚片，自然干燥后固定，按说明书染色后镜检。G—双球菌涂片，内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-3-应用滚动式涂片法从波片一端涂向另一端，反复几次，火焰固定后进行革兰染色。7、对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。申报室组长、及下午配制人员。8、对有新到岗的实习或进修人员时，应认真交代本岗位的一切事宜并且认真作好带教工作。9、上班后首先检查各种仪器工作是否正常，做好记录。10、查对昨天移种平板申请单及原始登记本，确定标本移种是否正确。观察血液增菌培养瓶，如发现有细菌生长，马上涂片革兰染色，将细菌的染色特性及形态报告给临床，并做好记录，同时进行移种。11、观察平板，挑取可疑菌落涂片革兰染色，如为革兰阳性菌或阴性杆菌，将菌落纯化于普通血平板；如为真菌，将菌落纯化于沙博罗平板；如革兰阴性双球菌，将菌落纯化于巧克力平板，并置于CO2蜡缸中：对嗜血杆菌纯化于专用巧克力平板，并置于CO2蜡缸中。12、将前一天分纯的细菌严格按照黑马系统说明书进行分析前各种鉴定试条和药敏试条的操作.。13、对一些不适合用鉴定板测药敏的细菌，改用标准的K.B法进行检测。碰到异常的耐药模式应及时上报组长，如碰到耐万古霉素的葡萄球菌、粪肠球菌，耐泰能的大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等。并加做特殊的药敏纸片，并改用纸片法加以比较。14、对一些特殊细菌，如嗜血杆菌、棒状杆菌、李斯特菌属等用相应的鉴定条进行鉴定，用相应的手工试验进行检测，操作严格参照全国临床检验操作规程第三版。15、定期做好本室所用鉴定和药敏试条的质控，做好记录。16、每天必须消毒平板、基础培养基等用于常规医院感染监测；另外根据具体情况即时准备好各种中和剂、无菌瓶等，对48小时的空气培养出报告，同时注意是否有致病菌、菌落数是否超标。17、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-4-文件编码JYK-SOP—002文件名称细菌室工作人员管理规定及报告时间执行时间（第四版）2012.01.01细菌室工作人员管理规定及报告时间一、守班人员1、上班后首先搞好接种室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内，并做好记录。2、检查各种仪器工作是否正常，并做好记录。3、查对昨天移种平板申请单及原始登记本，确定标本移种是否正确。观察血液增菌培养瓶，如发现有细菌生长，马上涂片革兰染色，将细菌的染色特性及形态报告给临床(第一级初级报告)，二级报告：报告直接抗菌药物敏感试验和细菌种属的初步鉴定结果，三级报告(最终报告)：报告细菌种属名和标准抗菌物敏感试验。阴性报告：普通血培养3天无细菌生长可报告为：“72小时培养未见细菌生长”，并做好记录，同时进行移种。阴性报告于7天后出结果。4、观察平板，挑取可疑菌落涂片革兰染色，如为革兰阳性菌或阴性杆菌，将菌落纯化于普通血平板；如为真菌，将菌落纯化于沙博罗平板；如革兰阴性双球菌，将菌落纯化于巧克力平板；对嗜血杆菌纯化于专用巧克力平板。.一般培养原则上三天内将结果发于临床。5、将前一天分纯的细菌严格按照黑马分析系统说明书上板前各种试条的使用说明配制菌悬液、滴加试剂，做好各种鉴定、药物敏感性试验。6、接收样本：核对各标本号与申请单联号是否一致，如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理，如退单或重送样本等，并做好联系情况的记录。核查各送检样本是否符合要求。①痰液样本：先看外观、再直接涂片镜检，低倍镜下见白细胞25个，上皮细胞10每个视野，为合格痰液。②无菌体液样本：检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。③容易干燥的样本：对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已经干燥。对不符合要求的样本必需与临床联系，以便作出相应处理，方法如联号不符的样本。做好记录。对符合的样本进行原始单的登记。7、样本编号：对符合的样本作出编号，普通细菌培养：痰液、咽拭子、血液增菌培养、内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-5-尿液、胸、腹水、脑脊液、胆汁、脓液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培养。在各种培养基上及申请单上编号的同时均需明确标明接种日期。样本接种：⑧血液、骨髓、腹水、关节液等：血平板、Mac⑨痰液、咽拭子、脑脊液分别接种：血平板、巧克力平板、麦康凯平板；⑩尿液接种：血平板、巧克力平板、Mac；各种无菌体液、脓液、泌尿生殖道分泌物接种：血平板；巧克力平板；大便致病菌：接种SS平板、麦康凯平板；分泌物的淋球菌培养接种：巧克力平板；支原体培养+药敏，按说明书接种支原体专用培养瓶；对以上接种样本的当前编号应记录于登记本上。此外对痰液在接种的同时应对其沉渣进行革兰染色，如有细菌和／或何种细菌为主即刻的向临床发出第一级初级报告，并做好记录。8、对一些不适合用仪器检测药敏的细菌，改用标准的K.B法进行检测。碰到异常的耐药模式应及时上报组长，如碰到耐万古霉素的葡萄球菌、粪肠球菌，耐泰能的大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等。并加做特殊的药敏纸片，并改用纸片法加以比较。9、对一些特殊细菌，如嗜血杆菌、棒状杆菌、李斯特菌属等用相应的鉴定条进行鉴定，用相应的手工实验进行耐药性检测，操作严格参照说明书。10、对所完成的各种发向临床的微生物学报告单，要认真检查，并给上行政班的人员核查，确认一切无错后，方能发出。11、做好菌种的保存，对一些难得的菌株、标准菌株等要定期移种，一般二周一次，并做好移种记录。定期做好本室所用各种鉴定药敏试条的质控，一周一次(或每个批号一次)，做好记录。12、检查本岗位各种培养基及试剂的库存量，做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。13、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。离开科室前交好班。二、行政上班人员1、上班后首先搞好室内卫生。2、将临床室的培养标本拿回。3、对有新到岗的实习或进修人员时，应认真交代本岗位的一切事宜并且认真作好带教工作。4、涂片染色：抗酸染色严格按照操作规程，漂浮法涂片痰液样本，胸腹水、尿液、脑内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-6-脊液等取沉淀涂厚片，自然干燥后固定，按说明书染色后镜检。5、临床标本细菌或门诊标本G-双球菌涂片，应用滚动式涂片法从波片一端涂向另一端，反复几次，火焰固定后进行革兰染色。6、每天必须消毒平板、基础培养基等用于常规医院感染监测或K.B药敏试验；另外根据具体情况即时准备好各种中和剂、无菌瓶等，对48小时的空气培养出报告，同时注意是否有致病菌、菌落数是否超标。7、检查本岗位各种培养基及试剂的库存量，做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。8、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。内江市第六人民医院检验科细菌室操作程序文件-7-文件编码JYK-SOP—003文件名称标本采集及保存要求执行时间（第四版）2012.01.01标本采集及保存要求1、总则：用于细菌培养的标本在收集时应注意严格无菌操作和及时送检，检测后标本应妥善保存。2、临床标本的采集2.1、下呼吸道分泌物(痰液)令患者早上起床后用清水濑口，不要刷牙，立即从下部呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌塑料痰盒中，及时送检。2.2、尿液(中段尿)护理人员协助采取中段尿约3ml入无菌塑料盒中，及时送检。2.3、粪便：取有粘液、脓血部分的粪便置无菌塑料盒中及时送检。2.4、眼、耳、鼻、喉拭子：将棉拭子沾取少许无菌生理盐水(如沾取的太多，可在无菌生理盐水瓶壁上挤去多余的水份)，然后采取可疑部位的分泌物，倒悬于无菌塑料盒中，及时送检。2.5、脓液：用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液，要尽量多取一些，然后将棉拭置于无菌塑料盒中，及时送检