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UPLC/UPLC/UPLC/UPLC/XEVOTQXEVOTQXEVOTQXEVOTQMSMSMSMS安装安装安装安装现场培训手册现场培训手册现场培训手册现场培训手册Waters客服电话客服电话客服电话客服电话座机座机座机座机：：：：8008202676手机手机手机手机：：：：4008202676一一一一．．．．仪器的原理仪器的原理仪器的原理仪器的原理UPLC二元泵二元泵二元泵二元泵示意图示意图示意图示意图UPLC二元泵UPLC自动进样器示意图UPLC自动进样器XEVOTQMS示意图二二二二．．．．打开打开打开打开Masslynx软件软件软件软件，，，，建立项目建立项目建立项目建立项目（（（（project））））1.在桌面上双击Masslynx图标2.单击FileProjectWizard3.出现对话框“Whenchangingtoanewproject,someservicesareautomaticallycloseddown,Continue?”,单击Yes4.出现如下对话框输入项目名称（projectname）,对项目的描述（description）,路径（Location），在路径中建议在C盘下新建一个文件夹，并命名为MSDATA，所有新建项目都放在这个文件夹中，单击Next5.选择createusingexistingprojectastemplate,并以C:\Masslynx\Default.pro为模板单击Finish三三三三．．．．准备液相准备液相准备液相准备液相准备液相的一般流程：准备流动相准备样品灌注二元泵灌注自动进样器建立液相方法平衡系统准备流动相准备流动相准备流动相准备流动相—用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要大于10mM。—有机相要使用原装进口的色谱纯,例如Fisher,Merk等品牌准备样品准备样品准备样品准备样品—所有样品都要用0.22um的膜过滤。1.灌注流动相在Masslynx主界面，单击MSConsole,进入UPLC交互显示界面点击左栏BinarySolventManagerControlPrimeA/Bsolvent选择A1，B1，时间设为3分钟，点击start开始灌注2.灌注灌注灌注灌注sealwash单击ControlPrimesealwash单击Yes，开始灌注sealwash的灌注不能设时间，需手动停止：ControlPrimesealwash3.灌注自动进样器灌注自动进样器灌注自动进样器灌注自动进样器在UPLC交互界面中，选择左栏SampleManager单击ControlPrimesyringes选择Samplesyringeandwashsyringes.循环次数选5，单击OK开始灌注.4.设定流速设定流速设定流速设定流速，，，，平衡系平衡系平衡系平衡系统统统统在Masslynx主界面，单击InletMethod图标，打开液相方法编辑窗口单击status单击ACQUITYAdditionalStatus，进入液相控制台单击A1或B1或流速的位置，出现流速、比例设定对话框设定液相流速与比例，单击对勾，如果后面要做调谐，可设定流速0.2ml/min,有机相与水相的比例为50:50四四四四．．．．准备质谱准备质谱准备质谱准备质谱1.计算化合物单同位素质量数计算化合物单同位素质量数计算化合物单同位素质量数计算化合物单同位素质量数Masslynx主界面单击ToolsMolecularWeightCalculator输入化合物的分子式（大写-注意Cl、Br等正确的输入方法）注意选单同位素MonoisoIonMode:离子化模式，+ve正离子，-ve负离子单击Calculate2.用用用用Intellistart开始调谐开始调谐开始调谐开始调谐a.在Masslynx主界面单击MSTune图标，打开调谐窗口b.单击APIGas图标打开氮气，c.IonModeES+或ES-c.单击打开高压d.设定液相流速0.2ml/min,水：乙腈的比例为50:50e.d.选择MSMode图标f.把调谐液放入A（或B或C）号位(注:浓度在200ppb左右)g.单击Purge图标，purgeA瓶中的调谐液Purge结束，FlowState改为Combine模式h.点击进样，开始进样设定Function为MS1scan，Mass为计算出的质量数，span为5，，直到离子的响应比较稳定i.保存调谐文件：FileSaveAsj.在Masslynx主界面，选择MsConsoleXevoTQMSDetectork.选择IntelliStartl.选择SampleTuneandDevelopMethod，ES+或ES-m.单击Start图标，出现Intellistart自动调谐编辑窗口，选择SwitchtoAdvancedMode单击Start，开始自动调谐输入化合物名称输入化合物的分子量或分子式电离方式调用保存的调谐文件输入MRM方法的文件名自动调谐报告的文件名锥孔电压范围碰撞能量范围用combine模式蠕动泵流速瓶位置调谐成功，会有绿勾出现查看intellistart报告3.查看intellistart中自动生成的质谱方法：从MassLynx主窗口，单击MSMethod，出现MSMethod编辑对话框选择Fileopen选择Intellistart中保存的质谱方法的文件，双击方法选择AutoDwell,单击OK，FileSaveAs,保存质谱方法文件优化毛细管电压保存调谐文件5.建立液相方法建立液相方法建立液相方法建立液相方法在液相方法编辑窗口，单击Inlet单击Autosampler图标打开自动进样器编辑窗口单击OK,选择FileSaveAs保存方法单击LoadMethod，系统平衡五五五五．．．．建立样品列表建立样品列表建立样品列表建立样品列表1.在Masslynx主窗口，选择FileNew建立一个空白的样品表Samplelist2.输入文件名FileName3.样品信息FileText4双击MSFile，选择质谱方法5.双击InletFile,选择液相方法6.在Bottle中输入样品瓶的位置7.在InjectVolume中输入进样体积8.可右键Add,增加样品表的行数9.保存样品表：FileSaveAs六六六六．．．．数据数据数据数据采集和处理采集和处理采集和处理采集和处理1.选中要采集的样品，单击RunStart,选择AcquireSampleDataonly,2.单击OK开始进样并采集3.在采集过程中，可查看色谱图，点击Chromatogram窗口，点击Real-timeUpdateicon.如果不能见整个TIC图，单击DefaultRange图标如果方法中包括多个通道，可通过DisplayMass查看如果方法中包括多个检测器或多个Function,可通过DisplayTIC查看处理多个Function的数据如果质谱方法中有多个Function，如下图，有三个Function如想看第二个Function，MSScan的数据1.在色谱图窗口，点击DisplayTIC，选中MSScan3.选择Addtrace，单击OK.如想查第二个Function,DaughterScan质谱图在色谱图中，选择DisplayTIC,选择ScanWaveDS选择Addtrace，单击OK.4.选择ProcessCombinespectra.5.分别用右键输入信号和本底噪音.6.单击OK.得到DaughterScan的质谱图单击ProcessSmooth…，单击OK.七七七七．．．．Targetlynxstepbystep－－－－外标法外标法外标法外标法（（（（AfterSCN714））））在Masslynx主页面单击Targetlynx/Editmethod，出现定量方法编辑对话框单击新建方法图标，新建一个定量方法单击Addnewcompound(添加新的化合物)图标，添加一个新的化合物单击菜单栏update,选中QuantitationIon和CompoundName（前面打勾）在Masslynx主页面，打开中等偏下低浓度标准品的色谱图，Display/Mass,选出要定量的化合物的离子对，一般强度高的化合物用来做为定量离子，例在此图中，我们选182105作为定量离子，另一个离子对则作为确证离子，用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下，则compoundname,AcquisitionFunctionNumber,QuantificationTrace,PredictedRetentionTime和RetentionTimewindow将自动输入到定量方法中。注意：在色谱图上拉的时候，要遵循两个原则，拉的位置要以色谱峰的峰尖左右对称，拉的宽度要超过峰的起点和终点，如下图所示单击工作曲线列表，离子强度到工作曲线设置页面，填入ConcentrationUnits:浓度单位，例如ng/ml,ug/kg，ppb,ppm等ConcentrationofStandard:Level–选择Conc.APolynomialType–选择Linear.（可根据自己行业的规定）CalibrationOrigin_选择exclude(排除原点)，include(包含原点)，force(强制过原点)WeithtingFunction(权重)_1/x（根据自己行业规定）PropagateCalibrationParameters_如果所有的化合物均用相同的工作曲线的参数，选Yes打开积分参数列表，选中ApexTrackEnabled（打勾，YES），IntegrationWindowExtent输入2，选中PropagateIntegrationParameters(打勾)，如果色谱峰并不是很对称的色谱图，可先在色谱图上先设定参数，积分，好积分参数满意之后，process/integrate,/copy,在Targetlynx方法中Edit/Past就可将其粘贴到Targetlynx方法中建议用ApexTrack积分方法，Smooth方法建议用smoothiteration1,smoothwidth2输入确证离子信息，在Targetlynx编辑窗口，下拉菜单Update/FirstTargetion选中重新打开色谱图，用相同的方法将定性离子拉入到方法中，TargetIonRationMethod:如果是食品安全，与欧盟或国标等标准比较，应选Target/QuanCalculateIonRatioToleranceAs:Ratio选中TheUpdateIonRatiosUsingMultipleSamplesTargetionRatio和TargetIonRationTolerance可先不填，软件会自动计算用同样的方法输入第二个化合物的信息：Samplelist重复上面的过程，把其他几个化合物的信息全部加入保存方法：File/SaveAs,保存到当前项目的MethDB文件夹中正确的samplelist表格模板，除了前面进样时的选项之外，还要有sampletype,ConA,QuanReference等项，在QuanReference中，在标准品的项填入X,软件将会把这些标准品的离子比计算出来并加以平均之后，填入方法的离子比栏中。选中要处理的行，单击ProcessSamples，出现下图的对话框，确保选中UpdateIonration,IntegratesamplecalibrateStandardQuantifySample,选择刚才编辑的Targetlynx方法，单击OK出现定量结果对话框可根据自己的需要，用鼠标右键，ChangColumnOrder来增加或减少Summary中的选项。附件附件附件附件：建立高级质谱方法建立高级质谱方法建立高级质谱方法建立高级质谱方法在质谱