搜索
2011-01,V2/5Elecsysandcobaseanalyzers1羅氏免疫分析B型肝炎表面抗原定量檢驗試劑ElecsysHBsAgIIquantREF05957435190100次測試●顯示那些試劑組可在那些分析儀上使用限由醫師或醫檢師使用效能針對已確認為B型肝炎表面抗原(HBsAg)陽性的人類血清及血漿進行HBsAg體外定量檢測之免疫分析法,搭配使用Elecsys2010,MODULARANALYTICSE170,cobase411,cobase601及cobase602分析儀。Electro-chemiluminescenceimmunoassay“ECLIA”是預定使用於Elecsys和cobase免疫分析儀上。概述B型肝炎表面抗原(HBsAg)–一個沒有固定大小的多肽–是B型肝炎病毒顆粒(HBV)外套膜的一個組成物。1在感染了HBV的個體之血液中除了有完整的、具感染性的病毒顆粒之外,也含有大量非感染性顆粒,而這些非感染性顆粒只由一層內含HBsAg的外套膜所組成。2發生感染之後,HBsAg是第一個可以在血清中偵測到的免疫標記物,在臨床症狀出現及其他生化標記物被偵測到之前HBsAg通常會存在數週至數個月。在急性HBV感染的康復期中,自HBsAg出現後最晚6個月便不會於血清中再偵測到它的存在。3,4如果急性肝炎發生後的6個月以上仍然偵測到HBsAg的持續存在,則必需懷疑患有慢性B型肝炎(CHB)。如果一個慢性B型肝炎的病患有升高的轉氨基酶水平、高的HBVDNA病毒量、及組織學異常,則將會考慮對其進行治療。5可以使用兩種不同的治療策略:1.使用長效型α干擾素(聚乙烯二醇化α干擾素)進行有限時間的治療;2.使用核苷/核苷酸類似物(NUCs)進行長期的治療。HBVDNA定量是目前監測這些治療方案的標準。治療的結果必需使HBVDNA下降至一個儘可能低的水平,理想的情形是要低於即時聚合酶連鎖反應(real-timePCR)分析法的最低偵測極限(10-15IU/mL),藉以確保病毒的複製被抑制至一個程度-即是,這樣低的病毒量其後將可以產生生化學上的緩解(biochemicalremission)、組織學上的改善、及防止併發症的發生。然而,理想的治療終點是HBsAg的持續消失(不論是否出現血清抗HBs抗體陽轉)。這是與以下三者有關:病毒被免疫系統完全控制、慢性B型肝炎炎症活動度的緩解、及較佳的長期預後結果。因此,最近有幾個研究提出:除了HBVDNA定量之外,HBsAg定量也被用於監測聚乙烯二醇化α干擾素的治療反應。6,7,8,9,10,11此外,HBsAg定量可能具有預測持續的病毒學反應與HBsAg消失之潛力。而進一步的研究是需要的,藉此確認這些結果、判定HBsAg定量對慢性B型肝炎病患的NUC治療反應監測之重要性12、以及判定同時使用HBsAg定量和HBVDNA定量對沒有接受治療的慢性B型肝炎病患進行監測以確認非活動性帶原者之重要性。試驗原理三明治原理。總分析時間:18分鐘•第一次孵育(1stincubation):50µL檢體、兩個生物素化(biotinylated)的抗HBsAg單株抗體、及一個以釕化物a標記的抗HBsAg多株抗體和抗HBsAg單株抗體之混合物彼此反應而形成一個三明治複合物。•第二次孵育(2ndincubation):加入以streptavidin包覆的微粒子後,所形成的複合物會藉著生物素和streptavidin的互相作用而結合在固態物質上。•反應混合物被吸取至測量室中,微粒子會被磁力吸引到電極表面,沒有被吸引的物質隨後會經由ProCell移除。然後利用電極的電壓引發化學光(chemiluminescent),以photomultiplier進行偵測。•經由二點校正而儀器專一地所產生的校正曲線以及由試劑條碼所提供的master曲線去得到測定的結果。a)Tris(2,2’-bipyridyl)ruthenium(II)-complex(Ru(bpy)32+)試劑-反應溶液M表面包覆streptavidin的微粒子(透明蓋),1瓶,6.5mL:表面包覆streptavidin的微粒子0.72mg/mL;保存劑。R1抗HBsAg抗體~生物素(灰蓋),1瓶,8mL:兩個生物素化的抗HBsAg單株抗體(老鼠)0.5mg/L;磷酸鹽緩衝液100mmol/L,pH7.5;保存劑。R2抗HBsAg抗體~Ru(bpy)32+(黑蓋),1瓶,7mL:以釕化物標記的抗HBsAg單株抗體(老鼠)和抗HBsAg多株抗體(羊)1.5mg/L;磷酸鹽緩衝液100mmol/L,pH8.0;保存劑。Cal1陰性校正液1(白蓋),兩瓶,每瓶1.3mL:人類血清;保存劑。Cal2陽性校正液2(黑蓋),兩瓶,每瓶1.3mL:在人類血清中含有接近0.5IU/mL的HBsAg;保存劑。B型肝炎稀釋液兩瓶,每瓶36mL(白蓋):(DilHepB)HBsAg和抗HBs抗體陰性的人類血清,緩衝的,pH6.5;保存劑。預防注意事項體外診斷使用。遵行處理所有實驗室試劑所須的一般預防措施。所有廢棄物的丟棄應該要符合當地的法規。如專業使用者有需要,可提供安全性資料表(safetydatasheet)。必需考慮所有人類材料都有潛在的感染性。校正液和DilHepB是完全從已個別地測試過的捐血者去製備,而且已證實這些產品不含HBsAg(只有Cal1和DilHepB)、HCV和HIV抗體。所應用的測試方法都是經過美國食品暨藥物管理局(FDA)認可或符合歐盟指令98/79/EC附錄II列表A之要求。已使用β-丙內酯和UV照射,將含有HBsAg的血清(Cal2)去活性化。但是,由於沒有去活性化方法或測試方法能絕對肯定地排除感染的潛在風險,因此必需小心地處理這些材料(就如處理病人檢體一樣小心)。如發生暴露事件,必需按照負責的衛生部門之指示去做。16,17試劑在標示的保存期限之後便不可再使用。對於所有試劑和所有種類的樣本(檢體、校正液和品管液),都要避免形成泡沫。必需根據測試流程進行檢體的預稀釋(請看“稀釋”的部份)。試劑處理2011-01,V2/5Elecsysandcobaseanalyzers2試劑組中的試藥可以直接上機,並且被提供在與系統相容的瓶子裏。Elecsys2010和cobase411分析儀:只有在20-25°C下進行校正時,才需要將校正液Cal1和Cal2放在分析儀上。使用後儘快關上瓶蓋並存放於2-8°C。確保不要有校正液留在打開的蓋子上。因為可能會有蒸發的現象,所以每個校正液瓶組不可進行超過5次的校正過程。MODULARANALYTICSE170、cobase601和cobase602分析儀:除非在分析儀上校正時是需要用到所有的體積,否則需要將可以直接上機的校正液等份分裝到空的、按下便可開蓋(snap-cap)的瓶子裏(CalSetVials)。將已提供的標籤貼在這些額外的瓶子上。把分裝好的校正液存放於2-8°C,以供日後使用。每一瓶分裝好的校正液只可進行1次的校正過程。所有正確操作所須的資訊都可經由各個試劑上的條碼而被判讀。保存及穩定性請保存在2–8°C。在使用之前儀器自動混合期間,為了確保微粒子完整的效用請將ElecsysHBsAgII定量試劑組(M,R1,R2)直立存放。穩定性:未開封存於2–8°C直至所標示的有效日期試劑M,R1,R2,DilHepB在開封後存於2–8°C8週存於MODULARANALYTICSE170、cobase601和cobase602上8週存於Elecsys2010和cobase411上8週已開封的校正液Cal1,Cal2存於2–8°C8週在20–25°C存於Elecsys2010和cobase411上直至5小時存於MODULARANALYTICSE170、cobase601和cobase602上只可使用一次將校正液直立存放!確保不要有校正液留在打開的蓋子上。檢體收集及準備只有下列檢體是有足夠的數目被測定過,而且其結果是可以接受的。使用標準採血管或含分離膠生化管所收集的血清。肝素鋰、肝素鈉、EDTA、及檸檬酸化血漿。標準:斜率1.00±0.1+截距±0.5IU/mL+相關係數≥0.95。在2-8°C穩定性可以維持7天,-20°C則可維持3個月。檢體可冰凍5次。所列出的檢體種類只是用選擇過的採檢管去測試(這些採檢管是在測試時可購買得到的),即是,並不是全部製造商的所有可提供的採檢管都被測試過。來自不同製造商的採檢系統可能含有不同的物質,而這些物質在某些情形下能影響測試結果。以原始採血管(採檢系統)處理檢體時,請遵照採血管製造商的指示。含有沉澱物的檢體在分析之前一定要經過離心。不要使用以熱去活性的檢體,不要使用以azide做為穩定劑的檢體和品管液。在進行測定之前,確保病人檢體、校正液以及品管液已回溫至室溫20–25°C。因為可能會有蒸發的現象,所以在分析儀中的檢體和校正液應該在2小時內完成測量。提供之試劑有關提供之試劑,請看“試劑-反應溶液”的部份。•2x6個瓶子標籤所須材料(並未提供)•REF04687876190,PreciControlHBsAgII,PreciControlHBsAgII1和2各有8x1.3mL•REF11776576322,CalSetVials,2x56個空的、按下便可開蓋的瓶子•一般實驗室設備•Elecsys2010、MODULARANALYTICSE170或cobase分析儀Elecsys2010和cobase411分析儀所須附件:•REF11662988122,ProCell,6x380mL系統緩衝液•REF11662970122,CleanCell,6x380mL測量室清潔液•REF11930346122,ElecsysSysWash,1x500mL沖洗液添加物•REF11933159001,SysClean的接合器•REF11706802001,Elecsys2010分析杯,60x60反應皿•REF11706799001,Elecsys2010分析尖頭滴管,30x120尖頭吸量滴管MODULARANALYTICSE170、cobase601和cobase602分析儀所須附件:•REF04880340190,ProCellM,2x2L系統緩衝液•REF04880293190,CleanCellM,2x2L測量室清潔液•REF03023141001,PC/CC-杯,在使用之前用來回溫ProCellM以及CleanCellM的12個小杯•REF03005712190,ProbeWashM,12x70mL儀器運轉結束以及試劑轉換之間用來沖洗的清潔液•REF12102137001,AssayTip/AssayCupCombimagazineM,48片x84個反應皿或尖頭吸量滴管、廢物袋•REF03023150001,WasteLiner,廢物袋•REF03027651001,SysCleanAdapterM所有分析儀所須附件:•REF11298500316,ElecsysSysClean,5x100mL系統清潔液分析為了最佳的分析狀態,請遵照這份文件中關於分析儀的說明。必需根據測試流程進行檢體的預稀釋(請看“稀釋”的部份)。請參考分析儀專用分析指令的操作手冊。使用之前儀器會自動將微粒子溶液重新混合,使之均勻懸浮。經試劑條碼讀出具測試專一性參數。若發生條碼不能判讀的例外情形,請依序輸入15位數字。將冷卻的反應試劑回溫至20°C左右,放置在分析儀的試劑盤(20°C)上,避免產生泡沫。系統會自動調節試劑的溫度以及開/關瓶蓋。將校正液Cal1和Cal2放在分析儀的檢體區,只有在校正時才需打開瓶蓋。有關校正所需的全部資訊,被編譯於有條碼的瓶子標籤上,並且會被自動地讀進分析儀裏。校正完成後,將Cal1和Cal2存放於2-8°C或丟棄(MODULARANALYTICSE170、cobase601和cobase602分析儀)。校正可追溯性:此方法已對照NIBSC標準品(代碼:00/588;HBs