药物分析课件第11章A-抗生素类药物的分析

第十一章抗生素类药物的分析进入返回主目录思考与练习第一节概述第二节β–内酰胺类抗生素第三节氨基糖苷类抗生素第四节四环素类抗生素第五节抗生素类药物中高分子杂质的检查基本要求基本要求一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理、测定方法与计算。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。返回第一节概述1.抗生素药物的特点化学纯度较低活性组分易发生变异稳定性差2.微生物学法与理化法的比较微生物检定法理化法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标衡量抗生素的生物效价根据抗生素结构特点，利用其特有的理化性质测定其含量已知或新发现的抗生素、精致品或粗制品均能测定测定化学结构已知、已提纯的抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的医疗价值，但操作步骤多、费时、误差大迅速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时3.抗生素的活性以效价单位来表示：每ml或每mg中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（u）或µg表示。1mg青霉素G钠盐定为1667单位1mg青霉素G钾盐的单位（u）=1667×356.4/372.5=1595u/mg分类（按结构与性质）：β–内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类林可霉素类、其他抗生素类返回第二节β–内酰胺类抗生素青霉素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）AB头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）?RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素（青霉素钾、钠）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林（氨苄青霉素）阿莫西林（羟氨苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性结构特点与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐（一）羧基易溶于水与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）手性C87654321NOS头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6旋光性﹡﹡﹡﹡﹡（三）共轭体系NSO头孢菌素类母核有共轭体系青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基NOSUV（四）β–内酰胺环水溶液不稳定干燥纯净稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解青霉素类某些氧化剂酸、碱、青霉素酶（某些金属离子）（温度）降解失效例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2头孢菌素类酸、碱、胺类-内酰胺酶降解失效（一）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类呈色羟肟酸衍生物Fe3+/3H+鉴别试验二、NaOH•2HClNOHH-内酰胺类NSONSCOHNHOHH2NOHHClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3（红、棕、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22.茚三酮反应α-氨基-氨基茚三酮蓝紫色3.双缩脲反应--CONH似肽键（开环分解）-内酰胺类碱性酒石酸铜紫4.与重氮苯磺酸反应橙黄色重氮苯磺酸--56OHHC（偶合）酚羟基头孢哌酮5.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素阿莫西林氨苄西林HCHOCHSOH--22”羰基侧链含“△（分解）变色酸显色1.K+、Na+的火焰反应（二）各种盐的反应焰色→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓黄Na+焰色→紫色+0.1%四苯硼钠+Ac→↓白K+2.沉淀反应（青霉素盐）遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂中溶解白青霉素青霉素钠青霉素钾緘+H3.重氮化-偶合反应青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素++H重氮化-偶合反应红芳伯氨基4.与三硝基苯酚反应三硝基苯酚二苄基乙二胺苄星青霉素NaOH△二苄基乙二胺mp三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光谱法（三）1、UV法样品、分解产物nm339HA+苯唑青霉烯酸苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,,%1cm1光谱图头孢氨苄λmax=262nm青霉素V钠A280nm/A264nm=1.30～1.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排2、IR法3180cm-1N-Hβ–内酰胺C=O1780cm-13470cm-1O-H1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1C-O以阿莫西林为例色谱法（四）1、TLC法对照品对照法和斑点颜色比较供试品对照品相同条件fR2、HPLC法Rt比较供试品对照品相同条件三、杂质检查药物检查项目检查方法头孢他啶聚合物HPLC法头孢曲松钠头孢哌酮钠头孢噻肟钠头孢呋辛酯有关物质和异构体HPLC法头孢氨苄有关物质反相TLC法青霉素钾（钠）吸收度紫外分光光度法1.头孢他啶聚合物的测定固定相：葡聚糖凝胶G-10（40~120µm）流动相A：3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸盐缓冲液流动相B：0.01%十二烷基硫酸钠对照品溶液：头孢他啶对照品100µg/ml1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用1mg/ml蓝色葡聚糖2000、流动相A测定；重复性用对照品溶液、流动相B测定。N不低于900，拖尾因子0.75~1.5，峰面积的RSD应小于5.0%。2）测定方法进样供试液，用流动相A；进样对照液，用流动相B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%。2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查固定相：ODS流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇（62:38）1）头孢呋辛酯Δ2-异构体的制备：头孢呋辛酯对照品+流动相头孢呋辛酯Δ2-异构体。2）系统适用性试验：各异构体之间的R1.5，以头孢呋辛酯A异构体计算n1500。3）异构体：t‘R1相对保留时间r12=-----1----被测物t’R22----标准物异构体相对保留时间判断B异构体0.85供试液谱图中A异构体的峰面积A异构体1.0与A、B异构体峰面积和之比应为0.48~0.55。3.头孢氨苄中有关物质的检查---反相TLC法固定相：活化后的硅胶G板置5%（V/V）正十四烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干展开剂：0.1mol/L枸橼酸-0.2mol/L磷酸氢二钠-丙酮（120：80：3）供试液：本品50mg/ml对照液（1）：本品0.5mg/ml对照液（2）：α-苯甘氨酸0.5mg/ml对照液（3）：7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸0.5mg/ml结果判断：供试液如显杂质斑点，与对照液（2）（3）位置相同上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑点，与对照液（1）所显的主斑点比较，其颜色不得更深。