1生物显微技术(绪论)1

LOGO生物显微技术生命科学学院生物工程教研室11/10/2006Contents视觉传感与数字图像1生物光学显微镜23细胞图像分析4组织细胞图像5生物化学图像Contents厚生生物样品显微图像6生物单分子成像与光镊技术78活体成像技术参考书医学类.汤乐民、丁斐.生物科学图像处理与分析.科学出版社2004生物类.黄秀梨主编.微生物学实验指导.高等教育出版社1999梁宋平主编.生物化学与分子生物学实验教程.高等教育出版社20031视觉传感与数字图像眼：屈光系统，光阑系统，感光系统，视觉冲动传导系统和视觉中枢.信息、视觉数字图像：电荷耦合器件（charge-coupleddevice).文件格式：BMP、GIF、TIFF、TGA、JPEG.2生物光学显微镜反差增强可见光荧光同位素标记化学标记生物光学显微镜Diagram显微镜发展近场力显微镜电子显微镜荧光显微镜光学显微镜3组织细胞图像TextTextText免疫组织化学染色细胞图像•二氨基联苯胺（DAB）作底物免疫荧光CT原位分子杂交CT激光扫描共聚焦显微镜组织细胞图像细胞图像分析4细胞图像分析Concept细胞图像分析流式细胞仪(flowcytometry)分光光度技术显微荧光技术反射自显影技术5生物化学图像电泳技术GC-MSorHPLC-MSSPR生物化学图像6、7细胞图像分析厚生生物样品显微图像组织细胞图像光学或化学荧光或薄层三维结构非焦平面成像8活体成像技术活体成像技术RNAi实验酵母双杂交实验分子探针与靶分子放射性核素标记GFP基因作为报告基因LOGOLOGO产纤维素酶微生物发酵转化虎杖提高白藜芦醇收率的研究龚云杰、王卫、曾柏全、黎继烈、姚跃飞收稿日期：2010-06基金项目：中南林业科技大学大学生创新项目资助（）2菌株进行插片法显微镜观察，40倍和100倍物镜下图像如下：图12号菌显微图像Fig1.Microscopicimagesof2#fungi（图a为40倍物镜下菌丝图像；图b为100倍物镜下菌体孢子囊形态）基础知识显微镜概述：显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。1.光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成：①照明系统：包括光源和聚光器。②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台)、调节器和、物镜转换器(旋转器)等。尼康E-600显微镜2.荧光显微镜尼康E800荧光DIC显微镜荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）3.激光共聚焦扫描显微镜LCSM照片蓝色为细胞核，绿色为微管4.暗视野显微镜暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。5.相差显微镜一种介壳虫的染色体6.偏光显微镜偏光显微镜（polarizingmicroscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。7.微分干涉差显微镜DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）8.倒置显微镜显微镜的分辨率:也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。其计算公式为:D=0.61入/N·AN·A·=n·sina/2式中D为分辨率，A为光波波长，N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)10×0.255.4040×0.650.39100×1.300.11显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，公式为:M=K1xK2焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。瞳距调节1.显微镜的调节屈光度调节调节粗调松紧调节旋钮聚光镜中心调节⑤光轴中心调节螺钉③视场光栏③孔径光栏②10X物镜①标本④聚光镜升降旋钮孔径光栏调节N.A聚=(0.6-0.8)N.A物孔径光栏开度与图象100%70%30%LOGO赤霉素菌丝形态40倍放大100倍放大螺旋状孢子丝螺旋霉素菌丝100倍放大2、霉菌形态的观察分生孢子梗顶囊小梗孢子分生孢子梗初生小梗次生小梗分生孢子菌丝孢子丝黑曲霉LOGO评述与进展荧光成像在生物分析中的应用张宁陈蓁蓁唐波(山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南250014)分析化学34(7)评述与进展ChineseJournalofAnalyticalChemistry2006,34:1030～1034透射电子显微镜JEM-1011透射电子显微镜莱卡超薄切片机内质网透射电镜图（伪彩色）冰冻蚀刻电镜照片厚标本和薄标本4-5um2um基础知识扫描电子显微镜JEOL扫描电子显微镜人类血细胞SEM照片显微操作技术尼康NT-88NE显微操作/注射仪双杂交系统的原理LacZGal4激活域Gal4结合域Gal4结合域LacZLacZGal4激活域LacZGal4激活域Gal4结合域XYXY原始态X,Y两蛋白具有相互作用GST-PulldownAssay荧光显微镜