医学检验生毕业论文

重庆医科大学本科生毕业论文论文题目重庆市5695例成年女性HPV检测结果分析作者姓名刘丙南论文答辩年月2015年6月2015年6月指导教师姓名（职称、单位名称）涂干卿主任检验师重庆金域医学检验所有限公司1目录中文摘要……………………………………………………………………………2英文摘要……………………………………………………………………………3重庆市5695例成年女性HPV检测结果分析…………………………………4前言…………………………………………………………………………41资料与方法………………………………………………………………………41.1标本来源……………………………………………………………………41.2仪器与试剂…………………………………………………………………41.3实验方法……………………………………………………………………51.3.1标本采集…………………………………………………………………51.3.2检测方法…………………………………………………………………51.3.3HPV检测………………………………………………………………51.4统计与分析…………………………………………………………………62结果………………………………………………………………………………62.1重庆市成年女性HPV感染率及HPV基因亚型分布…………………62.2多亚型分布………………………………………………………………62.3重庆市不同地区检测结果比较……………………………………………72.4年龄分布……………………………………………………………………73结论………………………………………………………………………………8参考文献……………………………………………………………………………10致谢…………………………………………………………………………………122重庆市5695例成年女性HPV检测结果分析摘要目的:了解重庆地区成年女性人乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)的感染率、亚型分布、地区分布及年龄分布情况，为HPV感染的筛查和防治提供理论依据。方法:采用反向点杂交的技术对重庆地区2014年1月一2014年6月来某院就诊5695例成年女性的HPV感染情况进行定性检测并加以分析。结果:5695例女性中共检22种HPV基因型，阳性者1665例，感染率29.24%。其中渝西地区感染率29.26%，渝东北地区感染率30.60%，渝东南地区感染率22.79%。青年感染率29.86%，中年感染率21.83%，老年感染率40.22%。1665例HPV感染者，单一HPV感染者1057例(63.48%)，二重及以上HPV感染者608例(36.51%)。结论:检出的HPV感染主要为单一基因型和单纯高危基因型。高危型HPV52、16、58以及低危型HPV43、6是重庆地区女性HPV感染的主要型别。关键词：重庆地区人乳头瘤病毒分析感染率3ANALYSISofHPVDETECTIONof5695ADULTFEMALESinChongqingABSTRACTObjectiveToUnderstandtheHPVinfectionrate、thesubtypedistribution、theendemicdistributionandtheagedistributiontoprovidetheoreticalbasisforscreeningandpreventionofadultfemaleHPVinfectioninChongqing.MethodsToQualitativedeterminateandanalyzeabout5695adultfemale,whovisitduringJanuarytoJunein2014byPCR-Reversedotblot.ResultsOf5695women，1665wereHPV-positive(29.24％),there29.26%inWesternofChongqing、30.60%inNortheastofChongqing、22.79%inSoutheastofChongqing.Thereare29.86%inyoungagegroup,21.83%inmiddleagegroup,40.22%inoldagegroup.Inallinfectedpeople,thereare1057singleinfectionand608multipleinfectedpersons.ConclusionThesingleinfectionandthesimplehigh-riskgenotypeinfectionareprimaryinfectiontype.HR-HPV52，HR-HPV16andHR-HPV58andLR-HPV43,LR-HPV6areprimarysubtypesoffemale’sHPVinfectioninChongqing.Keywords:ChongQingHumanpapillomavirusanalysesinfectionrate4重庆市5695例成年女性HPV检测结果分析前言宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，其发病率位居第二，仅次于乳腺癌。我国更是宫颈癌的高发国家。近年来，我国宫颈癌患病率以每年2%~3%的速度增长[1]占世界新发病例的28．8％，发病人群趋于年轻化。人乳头瘤病毒(humanpapillomavims，HPV)可以导致宫颈癌是目前人类所有癌症病变中最明确的致病因子，宫颈癌也因此成为人类历史上少数几个找到明确病因的肿瘤之一。[2]大量分子和流行病学研究已充分肯定HPV在肛门、生殖器癌中的致癌作用。宫颈部位的感染中，HPV类型与致癌性有关。目前已知，HPV6、11、42、43、44与性传播疣或尖锐湿疣有关，属低危型，一般不诱发癌变；而HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58属高危型，可诱发癌变。高危型是导致宫颈癌发生的主要原因,这一观点已通过基础研究和流行病研究得到充分证实。[3-4]分子生物学研究结果也显示，90％以上宫颈癌伴有HPV感染，主要为16、18亚型。人乳头瘤病毒HPV是国内外公认导致宫颈癌及癌前病变的主要因素，在不同地区，HPV感染率及亚型、年龄分布存在差异。为了解重庆地区成年女性HPV感染亚型，年龄及地域分布，为HPV感染的筛查和防止提供理论依据，本文对5695例成年女性检查结果进行分析，结果报告如下。1资料与方法1.1标本来源2014年1月—6月，重庆金域检验收到的重庆地区成年女性送检标本。对所研究标本以年龄段分组，18岁—44岁为青年组，45岁—59岁为中年组，60岁以上为老年组。所有检测人员均为初次检测HPV，剔除复查数据。1.2仪器与试剂基因扩增仪：Hema9600（珠海黑马医学仪器有限公司），分子杂交仪：恒温杂交仪（YN-H160）。HPV基因分型检测试剂盒由亚能生物技术(深圳)有限公5司提供，能同时检测18种高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83；5种低危型：HPV6、11、42、43、81。1.3实验方法1.3.1标本采集以专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。医护人员先以窥阴器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去。去除宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4—5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放在提取缓冲液中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧管盖，做好样本标示，并保持提取缓冲液管直立放置。1.3.2检测方法实验操作和结果判读均按试剂盒说明书进行，HPV基因分型检测步骤主要包括：(1)DNA提取充分洗脱宫颈刷后，取1ml液体转移到1.5ml离心管中，13000rpm离心10分钟，弃去上清液，保留管底的细胞沉淀；(2)PCR扩增取出反应管，低速离心数秒，在管盖上做好标记，然后分别加入已经提取的待检样本DNA5μL，加样量均为5μL，总反应体系为25μL，低速离心数秒，放入扩增仪开始扩增。（每次实验应设置一个阴性质控和一个阳性质控，作为产品使用的质量控制）；(3)杂交取15ml塑料离心管，放入标有样本编号的膜条（应在膜条编号处用中性笔标记），加入A液6ml及所有对应的PCR产物，将离心盖拧紧在稍微拧松，以免加热时管盖爆开，将离心管放入沸水浴中加热10分钟（确保杂交液面完全位于沸水液面之下）取出拧紧离心管盖，放入杂交仪51℃杂交2小时；(4)洗膜取出膜条，放入B液，于51℃轻摇5分钟；(5)显色及结果判读将膜条浸泡于显色液中避光显色30分钟然后将膜条转移去离子水中浸泡即可观察结果。根据膜条上蓝色斑点显现的位置，读取相应位置上标注的基因型信息。1.3.3HPV检测深圳亚能生物技术有限公司提供的试剂盒，其工作原理：采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的HPV基因分型检测技术，利用HPV的基因特点设计特异引物，扩增出23种HPV基因型的目的片段，再将扩增产物与固定在膜条上的包括18种高危亚型（包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、82）和5种低危亚型（包括6、11、42、43、44）在内的分型探针进行杂交，依据杂交信号的有无来判断是否有这些HPV基因型的感染。61.4统计与分析根据数据处理的方法及统计学处理的要求,应用SPSS软件对结果进行统计学分析，计数资料采用2检验，P0．05为有统计学意义。2结果2.1重庆市成年女性HPV感染率及HPV基因亚型分布对重庆市5695例成年女性进行HPV检测，共检测到22种基因亚型，检出HPV阳性者1665例，阳性率29.24%。1665例HPV感染者中有1057例为单一感染，高危亚型中以HPV16（13.72%）、HPV52（16.37%）、HPV58（8.80%）型为主，低危亚型以HPV6（10.88）、HPV43（9.18%）型为主。本次检测未检测出高危型HPV81型。详见表1。表1单一HPV亚型感染者基因型分布型别n百分率（%）型别n百分率（%）115701452.2多亚型分布重庆地区HPV感染亚型以单一型为主（1057例，63.48%），也存在大量多亚型联合感染。其中双重感染占22.16%。详见表2HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV59HPV66HPV68HPV73HPV81HPV82HPV831157014522161313232797744173441893244263301410.886.6213.722.081.511.231.232.182.559.180.664.1616.374.161.708.802.273.975.960.280.000.090.387表2重庆市多亚型分布感染类型例数百分比%单一105763.48两重36922.16三重1408.41四重603.6五重及以上392.34合计16651002.3重庆市不同地区检测结果比较将重庆市分为三个大区：渝东南地区、渝东北地区和渝西地区。其中，渝西地区阳性率为29.26%，渝东北地区阳性率为30.60%，渝东南地区阳性率为22.79%。三地区之间差异无统计学意义（2=5.16，P0.05）。渝西地区与渝东北地区之间差异无统计学意义（2=0.67，P0.0167）；渝西地区与渝东南地区之间差异无统计学意义（2=4.18，P0.0167）；渝东南地区与渝东北地区之间差异无统计学意义（2=5.16，P0.0167）。见表3表35965例检测HPV感染地区分布地区检测总感染单一感染多重感染例数构成比%例数构成比%例数构成比%例数构成比%渝西454279.75132929.2681217.8851711.38渝东北93816.4728730.6020321.64848.96渝东