高效液相色谱法在制药行业中的应用

高效液相色谱法在制药行业中的应用--陈诗语制药10811081604118高效液相色谱法（HPLC）是20世纪70年代发展起来的一项高效、快速的分离分析技术已被广泛用于各个领域，它是以经典的液相色谱为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。以其灵敏度高、选择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域应用最广、发展最快的现代分析技术之一。有的已被列入药典，成为环境污染物检测技术及化工产品质量检验中的标准方法。1．高效液相色谱的结构、原理和特点高效液相色谱仪主要由色谱泵及控制器、进样器、色谱柱、检测器和数据处理及控制五大部分组成，分离原理是一个物理过程，流动相携带着待分析化合物和其他一些共存物质流过色谱柱，利用不同物质在固定相上的保留时间不同，从而出峰时间不同而达到分离，利用保留时间定性，峰高或者峰面积定量，在将分离后的各个成分依次通过一紫外检测器时就可检测出各化合物的浓度来。高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点：（1）高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。（2）高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。（3）高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。（4）应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。（5）分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成，一般小于1h。此外HPLC还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点。2．高效液相色谱的研究应用进展药物与人类的健康，生活质量的提高关系极大，许多药品由于受到纯度的影响，药效不能充分发挥，甚至产生毒副作用；有时服用前需作各种试验，带来很多麻烦。外消旋体药物是最典型的例子之一。它由左旋与右旋两种光学异构体组成，不同的异构体药理与疗效完全不同。以往由于分离与纯化能力的限制，市场上常以混合物即外消旋体出售。即使有少量的分离后的药物出售，价格也极为昂贵，目前美国FDA（食品和药品管理局）和西方许多国家的有关部门都已作出了禁止外消旋体药物在市场上销售的决定，必须把它分离成单一的左旋或右旋体才能作为产品上市。所以药物产品对分离与纯化技术提出了更高的要求。色谱是目前分离与纯化领域中处理多组分复杂体系的最有效的方法，在各种色谱技术中，HPLC又是分离与纯化药物的最佳选择。2.1高效液相色谱在检测药物含量上的应用在药物分析中，高效液相色谱由于其专一性，灵敏度高，快速简便的特点，广泛的应用于药物分析中的定量分析，尤其在干扰因素较多的时候表现出更大的优越性。关日晴采用高效液相色谱法测定盐酸洛美沙星滴眼液中的洛美沙星含量；用C柱为分离柱，0.02tool/nm酸溶液(用三乙胺调节pH值至2.6)-乙腈(体积比85:15)为流动相，检测波长287nm；洛美沙星进样量在0.48～0.72g范围内与峰面积线性关系良好(r-0.9998)，平均回收率100.4,重复进样的RSD0.33(n-6)。张敏等在用高效液相色谱法测定清热丸中黄芩苷的含量中此外国内还对喹诺酮类抗菌药n、复方阿莫西林粉中阿莫西林和克拉维酸口、复方感冒液、芩连口服液中黄芩苷口、氢溴酸右美沙芬片、饲料中氯羟吡啶、注射用硫酸奈替米星、小诺霉素中C2b、保健食品中的西地那非和西力士、植物愈伤组织中的喜树碱及其衍生物、饲料中十三种磺胺类药物等药物的测定进行了研究。在利用高效液相色谱法进行测定与其他技术联用，检测器一般有紫外分光光度计，质谱等。这些精密的检测器决定了分析的灵敏度，对于分析起着重要的重要，是高效液相色谱分析法中重要的组成部分。2.2高效液相色谱在药效检测上的应用高效液相色谱法能同时进行分离和定量测定的优点在治疗药物检测和药物代谢动力学中体现地尤为突出。药物的治疗效果与其及其代谢物在血液中的浓度有关。治疗药物通过一段时间的使用后，在体内还有一定的残留，同样会影响人的某些生理功能，因此进行体内药物残量分析也成为近年来新药效能研究的主要内容。从高效液相色谱法的发展趋势来看，高效液相色谱在仪器、检测器、固定相等方面有了很大的发展，这为高效液相色谱法的广泛应用打下了坚实的基础。每一种分析技术均有其使用范围和方法的局限性，将单一色谱技术联用能获得更大的发展。尤其是色谱一色谱联用、色谱一光谱联用、柱切换技术、高效液相色谱一质谱连用、高效液相色谱，傅立叶变换红外吸收光谱联用等。高效液相色谱与其它先进技术联用，将是高效液相色谱今后的主要发展方向。这里就拿高效液相色谱一质谱连用来说，代谢物鉴定是药物代谢领域的日常工作，而质谱仪是完成该任务的主要工具。将动物试验中的代谢物进行毒性研究，是制药工业中毒理学试验的基础。采用人肝组织，可在药物发现阶段测定人体临床试验产生的代谢物。另外随着现代药物选择性的提高，剂量越来越低，有时血药浓度很低即可产生药效。对碱性药物具有非常高的检测灵敏度，使过去难以实现的痕量分析变得容易。新型离子化方式可能对一些中性化合物进行高灵敏度测定。的高选择性和测试速度，使其在大多数药物的生物样品分析中，取代了其他类型的检测方式。液相色谱串联质谱法具有高度的专属性，对多数药物的检测灵敏度超过其他分析方法，使定量测试速度显著加快，可以对混合物中的微量组分进行结构分析，适应了现代药物研究中高通量的要求。无疑已经成为药物动力学和代谢研究的核心分析技术，其潜力尚待进一步开发。2.3高效液相色谱在药物残留上的应用由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定量分析，被广泛使用于药物残留的测定上。周东海等以高效液相色谱法建立了猪、羊、鸡肝组织中西维因残留量的检测方法。采用ODS色谱柱，二极管阵列检测器，甲醇/水(65/35)为流动相，222nm检测波长下进行检测。西维因对照品溶液的最低检测限为0.1mg/I，线性范围为0.1~20mg/I，标准曲线回归方程为：Y--22459，83+454684，31X，线性关系良好(r-0.9999)。样品以乙腈提取，并加入无水硫酸钠和正已烷，过滤后去除杂质，乙腈层在45～50℃下水浴氮气吹干，残渣用甲醇溶解后，进样分析。平均回收率均大于80％，日间和日内变异系数均小于10％。符合药物残留痕量分析要求。林海丹等研究了动物源性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的提取、净化和高效液相色谱分析条件，建立了高效液相色谱法测定动物性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的方法，该法检测限0.025mg/kg，回收率为84~98。此外，在人血中药物含量的测定中也有很多的应用。3.结束语高效液相色谱法由于分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单等优点在确定药方案和治疗剂量，以及药物动力学分析和药效学评价提供了方法的基础，有着广泛的应用前景。参考文献、吕璟慧温哲高效液相色谱在中药研究中的应用进展科技与生活-2010年13期董影杰，于泓，张小东芳香族羧酸的高效液相色谱法测定及其在药品分析中的应用分析测试学报-2010年6期关日晴．HPIC法测定盐酸洛美沙星滴眼液中的洛美沙星含量[J]，分析测试学报，2004．23(1)：l2～113．孙雨安，王国庆，崔泉中．司帕沙星含量的HPIC测定[J]，分析测试学报，2000．19(1)：62～64．林海丹，林峰，吴映璇．高效液相色谱法测定动物源性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留[J]，检验检疫科学，2003．13(5)：5～6．邓思珊，郑金春．高效液相色谱法测定复方感冒液多组分含量[J]，色谱，1997．15(1)：51—53．董玉中，陈萍．高效液相色谱法测定芩连口服液中黄芩苷的含量[J]，安徽医药，2005．9(1)：38～39．刘涟，李亮．高效液相色谱法测定氢溴酸右美沙芬片的含量[J]，化学世界，1995(9)：482～484．李俊玲，强莉，宫玲玲．等，高效液相色谱法测定饲料中氯羟吡啶[J]，山东畜牧兽医，2004：33~34．陈波，朱小兰，姚守拙．等，高效液相色谱质谱联用测定保健食品中的西地那非和西力士[J]，中国食品卫生杂志，2004．16(2)：121～124．张虹，顾青，潘远江．高效液相色谱一质谱联用方法分析植物愈伤组织中的喜树碱及其衍生物[J]，分析化学，2004．32(12)：1695温利民，牛万刚，邓良平高效液相色谱法测定果糖氯化钠注射液与5一羟甲基糠醛的含量中国药业-2010年16期林冬杰，卢万飘，蔡月莲高效液相色谱法测定活血调经丸中丹皮酚含量中国药业-2010年16期张敏，高秀丽，王鹏娇高效液相色谱法测定清热丸中黄芩苷的含量贵阳医学院学报-2010年4期黄星，李德勋，肖顺经，张远强高效液相色谱法测定三黄痔疮膏中盐酸小檗碱含量中国药业-2010年16期周珩，高国峰高效液相色谱法测定双黄连栓中连翘苷含量中国药业-2010年16期李伟星焦玉英药物研究中HPLC的应用黑龙江科技信息-2010年18期武开业雷林吕庆华高效液相色谱仪检测器分类及应用科技信息-2010年13期周劲康，吴跃丽高效液相色谱法同时测定复方参芷痤疮酊中甲硝唑和氯霉素含量中国药业-2010年16期张良晓高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展内蒙古石油化工-2005年7期