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[2015全国一卷生物——选修l：生物技术实践](15分)已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用__________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用_________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶分微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以___________为碳源的固体培养基进行培养。（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用__________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用__________法进行计数。（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_________℃设计后续实验。【答案】（1）苏丹III染液或者苏丹IV染液萃取法（2）脂肪（3）血细胞计数板稀释涂布平板（4）45℃40℃[2016全国一卷生物——选修l：生物技术实践](15分)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：①配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;②制作无菌平板；③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题:（1）该培养基中微生物所需的氮来源于_________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是_________________。（2）步骤③中，实验组的操作是_________________。（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_________________现象。若将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_______________（填“正确”或“不正确”）。【答案】（1）牛肉膏、蛋白胨琼脂（2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间（3）污染不正确[2009宁夏卷生物——选修l：生物技术实践](15分)（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑__________、__________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、__________、__________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行__________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和__________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的__________。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_____________。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是__________。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过__________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。【答案】（1）温度酸碱度易培养生活周期短（2）灭菌消毒损伤DNA的结构（3）比例合适（4）鉴定(或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌[2013全国一卷生物——选修l：生物技术实践](15分)回答下列有关泡菜制作的问题(1)制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是__________，为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的作用是__________。(2)泡菜制作过程中，乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行__________的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的__________中。(3)泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有__________、__________和__________等。(4)从开始制作到泡菜品质昂佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸。这段时闻内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是__________，原因是______________________________。【答案】（1）杀灭杂菌增加乳酸菌的数量（2）无氧呼吸细胞质（3）温度腌制时间食盐用量（4）乳酸菌数量增加，杂菌数量减少乳酸菌比杂菌更为耐酸[2013宁夏卷生物——选修l：生物技术实践](15分)临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用__________法或__________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。（2）取该单菌落适当稀释，用__________法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A__________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B__________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明__________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的__________。（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素__________。【答案】（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A[2013山东卷生物——选修l：生物技术实践](15分)胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得，流程如下：（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用____________________或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需要先灼烧接种环其目的是_________________________。（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可以分别为酵母菌R提供__________和__________。（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和__________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用__________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤。其目的是______________________________。（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需要用胡萝卜素标准品作为___________。【答案】（1）稀释涂布平板法灭菌（防止杂菌污染）（2）碳源氮源（3）时间水浴滤去不溶物（4）(实验)对照[2009广东卷生物——选修l：生物技术实践](10分)材料：饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪、禽等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排除后易造成环境有机磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为目前重要的饲料添加剂之一。（1）商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生______________________________，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间________________________________________表示。（2）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：发酵液含酶的发酵液菌体去除透析液（Ⅰ）去除Ⅰ中的主要成分为__________；Ⅱ中包含植酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。离心透析粗提物（Ⅱ）纯化纯酶（3）为建设基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：____________________。反应过程中打开模板DNA双链的方法是____________________。（4）植酸酶外，微生物还能应用在哪些酶的生产中？（至少写两种）【答案】（1）透明圈植酸钠的消耗量（减少量）或磷酸（肌醇）的生成量（2）小分子杂质凝胶色谱法：根据蛋白质之间的分子大小、吸附性质等差异进行纯化（或电泳法：根据蛋白质之间的电荷、分子大小等差异进行纯化）（3）变性、复性和延伸（长）加热（或高温处理）（4）蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶[2013全国一卷生物——选修l：生物技术实践](15分)回答下列有关泡菜制作的问题:(1)制作泡菜时,所用盐水需煮沸,其目的是__________。为了缩短制作时间,有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液,加入陈泡菜液的目的是____________________。(2)泡菜制作过程中,乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行__________的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的__________中。(3)泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有____________________、____________________和____________________等。(4)从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内,泡菜液逐渐变酸,这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是________________,原因是_______________________。【答案】（1）杀灭杂菌增加乳酸菌数量（2）无氧呼吸细胞质（3）温度腌制时间食言用量（4）乳酸菌数量增多，杂菌数量减少乳酸菌比杂菌更为耐酸[2011新课标全国卷生物——选修l：生物技术实践](15分)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以__________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于___________培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即__________和__________。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力__________。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_______________和_______________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯__________附近。【答案】(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌法高压蒸汽灭菌法火焰[2012全国新课标生物——选修l：生物技术实践](15分)为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响,其研究小组在MS培养基中加入6-BA和IAA,配制成四种培养基(见下表),灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体,在适宜条件下培养一段时间后,统计再生丛芽外植体的比率(m),以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n),结果如下表。培养基编号浓度/mg·L-1m/％n/个6-BAIAA10.5076.73.120.177.46.130.266.75.340.560.05.0回答下列问题(1)按照植物的需求量,培养基中无机盐的元素可分为__________和__________两类。上述培养基中,6-BA属于__________类生长调节剂。(2)在该实验中,自变