佐剂诱导的大鼠关节炎模型报告

DSI522Ra01RatModelforArthritisOrganismSpecies:Rattusnorvegicus(Rat)InstructionmanualFORINVITROANDRESEARCHUSEONLYNOTFORUSEINCLINICALDIAGNOSTICPROCEDURES1thEdition(RevisedinJan,2016)佐剂诱导的大鼠关节炎模型报告类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一个累及周围关节为主的多系统性、炎症性的自身免疫疾病，其特征性症状为对称性、周围性多个关节慢性炎症病变，其发病机制十分复杂，迄今尚未完全阐明。佐剂性关节炎模型是Freund于20世纪50年代创立的，又称弗氏佐剂关节炎，弗氏佐剂分为完全佐剂(CFA)和不完全佐剂(IFA)。其机制是结核杆菌致关节炎抗原为65kD热休克蛋白(HSP)，RA病人软骨内具有与65kDHSP相似的蛋白多糖桥联蛋白抗原成分，CFA注入激活T细胞，激活T细胞参与RA发病机制。此模型存在明显的细胞免疫异常，为一种典型的免疫性炎症模型，并且制作方法简单，可广泛应用于多种动物，便于研究者选择应用。研究表明，在RA发病过程中，促炎细胞因子(IL-1，TNF-α，IFN-γ，IL-2等)和抗炎细胞因子(IL-4，IL-10，TGF-β等)的不平衡占有重要地位，其中IL-1和TNF-α参与多种病理学过程，在发病机制中尤为重要。1.实验动物SPF级Wistar大鼠，雄性，体重为180g-220g。随机分为对照组10只和模型组20只。2.主要试剂完全弗氏佐剂(CFA)（Sigma公司）3.建模方法抓取大鼠，于右后足皮内注射0.1mLCFA致炎，从而建立大鼠佐剂性关节炎模型；对照组右后足趾皮下注射0.01moI/L冰醋酸0.1mL，以排除CFA中溶剂的致敏效应。模型的评价4.1体质重测定：分别于0d、7d、14d、21d、28d记录大鼠的体重，比较模型组大鼠体重和对照组大鼠的体重变化；4.2免疫评价：称量大鼠体重，处死大鼠，取出脾和胸腺，生理盐水漂洗后用纱布吸干表面水分，分别于电子天平上称质量(湿质量)，并计算脏器指数。脏器指数=器官湿质量(mg)/大鼠体重(g)4.3足跖肿胀值（mm）测定：足趾肿胀度是佐剂性关节炎测量的一个重要指标。0d时在大鼠足跖同一地方做标记，用电子游标卡尺以标记为准，测定大鼠足跖厚度，以后每隔7d(7、14、21d和28d时)再分别测量，进行自身左右侧足跖对照和组别间对照。4.4关节炎指数(arthritisindexindex，AI)评价：采用关节炎指数积分评价其关节炎症程度。除了诱导部位右后足以外，根据其余3只未注射的肢体病变程度和趾间是否发炎对每一足爪分别进行打分，以0～4分记录，累积得分即为每只大鼠的关节炎指数。0分：无红斑和肿胀的证据；1分：红斑和轻度肿胀局限于足中段或踝关节；2分：红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至足中段；3分：红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至关节；4分：红斑和重度肿胀包括了踝、足和趾；4.5病理组织学观察：处死大鼠，留取剔除软组织的后肢踝关节，固定、脱钙、包埋、石蜡切片后行HE染色作组织学观察。正常大鼠踝关节结构正常，无炎性细胞浸润，滑膜细胞排列整齐，软骨表面光滑，关节腔内未见渗出液；模型组大鼠关节破坏明显，周围大量中性粒细胞浸润，滑膜增生肥厚，纤维组织增生，软骨及骨骼损伤。4.6大鼠血清中炎症因子含量测定：大鼠3%戊巴比妥钠麻醉后，于下腔静脉取血1ml，静止30min，4℃离心机4000r/min离心30min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。使用ELISA试剂盒检测TNFα、IL-1β等细胞因子的含量。4.7统计学处理应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P0.05表示有显著性差异，P0.01表示有极显著性差异。ControlgroupModelinggroup图1.足部图，模型组的足部明显有肿胀图2足趾肿胀值统计图（模型组足趾和对照组相比明显增大，有统计学差异）图3脾/体质量统计图（模型组和对照组相比明显增大，有统计学差异）图4胸腺/体质量统计图（模型组和对照组相比明显增大，有统计学差异）