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免疫组化实验前先将片子放在60°C中烘烤2小时一、脱蜡和去水化1、二甲苯I10mins2、二甲苯II10mins3、无水乙醇3mins4、95%乙醇3mins5、85%乙醇3mins6、70%乙醇3mins7、蒸馏水3mins二、封闭和抗原修复1、3%过氧化氢20mins20ml30%过氧化氢+180ml双蒸水2、PBSI、II、III、IV中各洗2mins3、抗原修复：CB/EDTA微波100*5mins30*25mins/CB液，高火5mins，中低火15minsCB/EDTA高压修复15mlEDTA+735ml双蒸水10mins/10M柠檬酸盐缓冲液（CB，pH=6.0）4minsCB95°C水浴20mins（最温和的修复方法）4、冷却：室温30mins，冷却至手感不热5、PBSI、II、III、IV中各洗3mins6、免疫组化笔画圈样品，再加50~100ul5%羊血清室温封闭1小时三、一抗4°C孵育过夜抗体浓度1：XX第二天拿出后37°C复温45mins四、PBSI、II、III、IV中各洗3mins五、加入二抗（A液，每片50ul）37°C，30mins避光六、PBSI、II、III、IV中各洗3mins七、DAB显色：B液:C液=50：150~65ul/片，根据预实验结果1~5mins内终止反应八、双蒸水I、II、III、IV中各洗2mins九、苏木素复染细胞核1min十、双蒸水I、II、III、IV中各洗2mins十一、盐酸酒精（99ml75%酒精+1ml盐酸）中分化1s，PBS1min(分化的目的是去除苏木素染液的残留杂质)十二、双蒸水I、II、III、IV中各洗2mins十三、流水冲洗10mins反蓝PBS十四、去水化（37°C烤片去水化），封片（吹干，中性树胶封片）