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预算说明书参考模版说明：1.本模版仅供校内参考，并非规定模板，请根据国自然申报指南要求及项目实际另行制定。2.本经费预算无合作单位，如有合作单位的项目，项目负责人（或申请人）和合作研究单位参与者应当根据各自承担的研究任务分别编报资金预算，经所在单位科研、财务部门审核并签署意见后，由项目负责人（或申请人）汇总编制。其中，间接费用按项目统一测算，并明确各承担单位的金额。并请说明合作研究单位的名称、单位类型、任务分工、研究任务负责人，承担资金额、占总资助金额的比例以及是否已签订合作协议。本项目经费合计***万元，其中直接费用：***万元，间接费用***万元。具体预算说明如下：（一）直接费用1．设备费：3.8万元。（1）恒温摇床：1.8万元***蛋白表达、纯化系统的优化和获得大量的***蛋白是进行***药效学，临床药代动力学和临床前安全性评价的重要前提，也是本项目实施过程中的重要环节。而在蛋白表达和纯化过程中，首先需要利用恒温摇床进行摇菌，进而在***中获得重组蛋白。因目前本课题组内较小，同时使用较频繁，为了保证本项目的顺利实施，计划添置水浴恒温摇床一台供***纯化表达专用，品牌为***，单价约18000元。(2)-40℃低温冰柜：1.6万元。本项目计划获得大量的***蛋白用于***药效学，临床药代动力学和临床前安全性的评价。为了保证本项目实施过程中纯化获得的***蛋白的存储，本项目计划添置***LW-50L262-40℃低温冰柜一台，存储不同批次的***蛋白，单价约1.6万（2）冰箱：0.4万元。在进行***药效学、临床前药代动力学和临床前安全性评价过程中涉及大量的动物实验，需要储存大量的动物组织样本，本项目计划添置***BED-578WEPF冰箱一台，专门储存动物实验的组织样本，单价约0.4万元。2.材料费：68.6万元。(1)蛋白纯化填料：合计24万元.利用带有***标签蛋白纯化填料和样品纯化填料***对带***标签的重组表达蛋白进行纯化，同时利用内毒素检测试剂盒去除内毒素，获得不含内毒素的纯化蛋白。序号货品名称单价/万元数量/年年数小计/万元1***标签蛋白纯化填料0.35838.42样品纯化填料***-500.58312.03内毒素检测试剂盒0.15833.6（2）凝血酶：4.50万元。用于将已纯化的带***标签的***进行酶解，以除去***标签，获得纯化蛋白。序号货品名称单价/万元数量/年年数小计/万元1凝血酶0.151034.50（3）内切酶和连接酶：2.16万元。用于***纯化工艺的优化，对***的关键基因进行修饰，基因克隆及表达。包括***Ⅰ、***Ⅰ、***Ⅲ、***Ⅰ、***Ⅰ等5种常用内切酶及***连接酶，用于构建重组表达质粒进行双酶切，***公司产品，500U/支，各约需6000U。序号货品名称单价/万元数量/年年数小计/万元1***Ⅰ0.03430.362***Ⅰ0.03430.363H***Ⅲ0.03430.364***hoⅠ0.03430.365***eⅠ0.03430.366***连接酶0.03430.36（4）实验动物费：合计15.85万元A．清洁级BALB/c小鼠或C57BL/6小鼠：共5.56万元。清洁级C57BL/6小鼠90只(9大组，每组10只)，用于构建***模型（EAE）实验，观察***蛋白及******对自身免疫***模型（EAE）的治疗效果，小鼠单价25元/只，饲养费1.2元/天，需要饲养30天，共25元/只×90只+1.2元/天×30天×90只=0.55万元。清洁级BALB/c小鼠1080只(9大组，每小组分12小组，每小组10只)，观察***及******给药后在小鼠体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，小鼠单价25元/只，饲养费1.2元/天，需要饲养3天，共25元/只×1080只+1.2元/天×2天×1080只=2.96万元。清洁级******小鼠40只(4大组，每组10只)，观察***及******给药后在小鼠体内的急性毒性实验，小鼠单价25元/只，饲养费1.2元/天，需要饲养7天，共25元/只×40只+1.2元/天×7天×40只=0.14万元。清洁级BALB/c小鼠40只(4大组，每组10只)，观察***纯化蛋白及******蛋白刺激对BALB/c小鼠的长期毒性反应，小鼠单价25元/只，饲养费1.2元/天，需要饲养180天（6个月），共25元/只×40只+1.2元/天×180天×40只=0.86万元。清洁级BALB/c小鼠290只，观察***纯化蛋白及******蛋白刺激对BALB/c小鼠神经系统的影响，小鼠单价25元/只，饲养费1.2元/天，需要饲养3天，共25元/只×290只+1.2元/天×3天×290只=0.82万元。清洁级BALB/c小鼠80只，观察***纯化蛋白及******蛋白刺激对BALB/c小鼠免疫原性和免疫毒性实验，小鼠单价25元/只，饲养费1.2元/天，需要饲养3天，共25元/只×80只+1.2元/天×3天×80只=0.23万元。B.清洁级SD大鼠，用于构建******大鼠模型：共0.58万元清洁级SD大鼠90只（9大组，每组10只），观察***蛋白及******对自身免疫性关节炎模型大鼠的治疗作用，大鼠单价28元/只，饲养费1.5元/天，需要饲养30天，共28元/只×90只+1.2元/天×30天×90只=0.58万元。C.Beagle犬24只，用于安全性药理实验，beagle犬单价3000元/条，饲养费30元/天，需要饲养30天，共3000元/条×24只+30元/天×30天×24条=9.36万元。D.中国仓鼠80只（8大组，每组10只），评价重组Sj16及******蛋白在哺乳类体外培养细胞中引起的染色体损伤。中国仓鼠单价25元/只，饲养费2.0元/天，需要饲养30天，共25元/只×80只+2.0元/天×30天×25只=0.35万元（5）细胞因子检测试剂盒：合计3.3万元。主要用于***和S******药效学研究中关于治疗自身免疫性肠炎模型和自身免疫性脑脊髓炎模型实验中血清中相关细胞因子的检测，主要包括IL-1β、TGF-β、IL-6、IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-12和TGF-β检测试剂盒。序号货品名称单价/元数量小计/元1小鼠IL-4ELISA检测试剂盒3500135002小鼠IL-5ELISA检测试剂盒3500135003小鼠IFN-γELISA检测试剂盒3500135004小鼠IL-12ELISA检测试剂盒3500135005小鼠TGF-βELISA检测试剂盒3500135006大鼠IL-1ELISA检测试剂盒3500135007大鼠TGF-βELISA检测试剂盒3500135008大鼠IL-6ELISA检测试剂盒3500135009大鼠IL-4ELISA检测试剂盒35001350010CCK8检测试剂盒150011500合计33000（6）常用生化试剂：合计7.09万元.主要用于配置培养基、琼脂糖凝胶电泳缓冲液、SDS-PAGE蛋白电泳液以及其他常规生化试剂等。序号货品名称单价/元数量/年年数小计/元1胰蛋白胨350103105002酵母提取物15010345003蛋白Marker30010390004琼脂糖350103105005Tris15010345006无水乙醇1550322507PBS10010330008工业酒精65039009DNAmarker250103750010蛋白marker4001031200011其他50001315000合计70965（7）常规耗材：合计11.71万元.主要用于常规分子克隆、表达纯化以及动物实验中使用的耗材。序号货品名称单价/元数量/年年数小计/元10.2ml进口PCR反应管/箱26001378002国产吸头10ul/箱300023180003国产吸头200ul/箱400023240004国产吸头1000ul/箱300023180005国产50ml/15ml/10ml/1.5ml/1ml离心管/箱12001*53180006一次性PE手套/箱6002336007乳胶手套/箱8002348008口罩/箱6002336009帽子/箱6001318001075cm细胞培养瓶/箱8002348001125cm细胞培养瓶/箱4002324001210ml移液管/箱1002360013巴氏吸管/箱40023240014酶标板45013135014其它20001360001171503、测试化验加工费：19.5万元（1）HPLC检测费用：4.0万元用于***及******药代动力学研究过程中利用HPLC观察***及******给药后在小鼠体内的吸收和分布状况。在******学院进行，200元/h，大约需要使用200h，合计4.0万元。（2）免疫病理切片制作：3.0万元。主要用于观察***及******对于治疗******肠炎模型和自身******模型实验中，通过免疫病理切片观察实验动物心、脑、肝、肾等主要脏器的病理变化。其中自身免疫性肠炎模型共9组，每组取5只小鼠，脊髓颈、胸、腰骶段HE染色和******髓鞘染色，每只小鼠每个部分切5张片子，共675片；自身免疫性肠炎大鼠模型共9组，每组取5只小鼠，HE染色镜下观察结肠粘膜损害程度，每只小鼠切5张片子，共225片；急性毒性实验和长期毒性实验中HE染色观察***及******处理后对小鼠主要脏器的影响，每个实验共4组，每组取5只小鼠，每只小鼠每个部分（心、脑、肝、肾、脾等）切5张片子，共200片；免疫毒性实验及免疫原性实验中，HE染色观察***及******处理后对小鼠胸腺和脾脏的影响。共8组，每组取5只小鼠，每只小鼠切5张片子，共200片。共1200片。委托中山大学******教研室完成，25元/片，合计25元/片×1200片=3.0万元。（3）测序及引物设计费：2.05万元。用于在***蛋白纯化技术优化过程中对***关键氨基酸进行优化设计引物，进行PCR测序，主要委托英潍捷基（上海）贸易有限公司完成.普通引物约50对，主要委托******贸易有限公司完成，1.2元/碱基，每对引物平均38-45碱基，约50元每对/OD，大约每对引物需要5OD，大约需要合成50对，总共50元/对/OD×50对×5OD=1.25万元。平均40元/样本(含PCR产物测序前纯化)，大约需检测200个样本，40元/样本×200样本=0.8万元。（4）多肽合成费用：4.0万元用于合成标准化的******，委托上海******公司合成，400元/碱基/g，为了满足本实验的需要，本项目在******的药效学，药代学和临床前安全性评价中，大约需要合成5g多肽，400元/碱基/g×20碱基×5g=4.0万元。（5）电镜超微结构处理和观察费：0.8万元此部分内容计划在***的工艺优化时将原始制作菌种进行电镜超微结构观察，计划观察10例样本。计算依据为；超薄切片￥80/例，染色￥30/例，电镜观察￥350/小时，每例样本设计观察2小时，350元/小时×2小时+30元/例+80元/例=810元/例，10例样本共计0.8万元。执行部门为中山医学院电镜室。（6）多道生理记录仪使用费用：2.0万元主要用于***及******一般药理学实验中，记录家犬心血管系统和呼吸系统给药前及给药后的血压、心电图以及呼吸等各项参数。在中山大学药理学实验室完成，200元/h，约需要使用100h，共2.0万元。（7）MALDI-TOF-MS检测：2.0万元主要用于鉴定纯化的***的纯度。委托******大学******学院完成，1000元/样本，约20样本，共2.0万元。（8）实验相关其他测试费用：1.65万元。主要用于与课题相关的紫外可见分光光度计检测，基因测序，ELISA检测，蛋白纯度检测等，在中山大学******学院公共实验平台完成。4.燃料动力费：无5.差旅费：合计6.7万元主要用于本项目完成过程中在广州市内和外埠进行实验，去国家食品药品监督管理局递送审批材料以及参加每年国内******学年会或***