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书书书中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责：辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则，阅藻糟援圆园员圆，灾燥造援员怨，晕燥援远阅韵陨：员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员圆援园远援园员怨·综摇述·栽陨蕴肿瘤过继细胞治疗研究进展孕则燥早则藻泽泽燥枣栽陨蕴蚤灶贼怎皂燥则葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠陈晚华员综述；刘辉员，汪毕圆，钱其军员，圆审阅（员援第二军医大学东方肝胆外科医院基因原病毒治疗实验室，上海圆园园源猿愿；圆援苏州大学医学部基础医学与生物科学学院，江苏苏州圆员缘员圆猿）［摘摇要］摇肿瘤浸润性淋巴细胞（贼怎皂燥则蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥糟赠贼藻，栽陨蕴）是从肿瘤组织中分离出的悦阅源垣、悦阅愿垣栽细胞，在体外经白介素圆（蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄圆，陨蕴鄄圆）的刺激、活化、扩增后可应用于临床肿瘤过继细胞治疗（葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠，粤悦栽）。为避免陨蕴鄄圆在扩增中的大量使用使得栽陨蕴中悦阅源垣悦阅圆缘垣栽则藻早数量增加所产生的免疫耐受现象，现在研究集中于改进栽陨蕴的体外扩增方法；研究显示，“年轻”型栽陨蕴（赠燥怎灶早栽陨蕴）靶向肿瘤的特异性更高，故其是潜在的扩增对象。临床使用栽陨蕴过继治疗前需对肿瘤患者进行全身放疗处理；栽陨蕴过继治疗联合化疗药物（如环磷酰胺，氟达拉滨等）对自体淋巴清除（造赠皂责澡燥凿藻责造藻贼蚤燥灶）的肿瘤患者疗效显著，将成为以后肿瘤免疫治疗的主要方向；除化疗药物外，还可开发肿瘤疫苗、单克隆抗体等联合栽陨蕴过继治疗。本文主要介绍栽陨蕴培养体系、功能改进的研究以及栽陨蕴过继治疗联合化疗药物在临床恶性肿瘤治疗中的应用，讨论其可能存在的问题并展望未来的发展方向。［关键词］摇栽陨蕴；体外扩增；过继治疗；化学免疫治疗［中图分类号］摇砸苑猿园援缘员；砸猿怨员援员摇摇摇摇［文献标志码］摇粤摇摇摇摇［文章编号］摇员园园苑鄄猿愿缘载（圆园员圆）园远鄄园远远愿鄄园缘［基金项目］摇国家杰出青年科学基金资助项目（晕燥援猿园怨圆缘园猿苑）。孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻晕葬贼蚤燥灶葬造晕葬贼怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣悦澡蚤灶葬枣燥则阅蚤泽贼蚤灶早怎蚤泽澡藻凿再燥怎灶早杂糟澡燥造葬则泽（晕燥援猿园怨圆缘园猿苑）［作者简介］摇陈晚华（员怨愿苑原），女，山东省枣庄市人，硕士，主要从事肝癌的细胞鄄基因治疗方面的研究。耘鄄皂葬蚤造：葬憎葬灶缘圆员岳员远猿援糟燥皂［通信作者］摇钱其军（匝陨粤晕匝蚤鄄躁怎灶，糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则），耘鄄皂葬蚤造：择蚤葬灶择躁岳员远猿援糟燥皂摇摇肿瘤浸润性淋巴细胞（贼怎皂燥则蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥鄄糟赠贼藻，栽陨蕴）最初是从肿瘤组织中发现的肿瘤抗原特异性悦阅源垣、悦阅愿垣栽细胞群，其中，悦阅愿垣栽细胞具有肿瘤杀伤作用。栽陨蕴在体内的抑瘤作用受悦阅源垣悦阅圆缘垣栽则藻早的限制，在体外经陨蕴鄄圆的刺激作用后可恢复肿瘤杀伤活性，扩增后可应用于临床肿瘤过继细胞治疗。过继细胞治疗（葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠，粤悦栽）指自体免疫细胞进行体外激活和扩增至一定数量后回输至肿瘤患者体内，在体内发挥杀伤肿瘤细胞作用的治疗方法。过继治疗需要回输的栽陨蕴的数量高达员伊员园员员数量级。栽陨蕴的体外扩增需要高剂量的陨蕴鄄圆，但陨蕴鄄圆用量过高可导致培养的栽陨蕴中栽则藻早数量的增加，从而产生免疫抑制。栽陨蕴体外扩增的培养体系在减少陨蕴鄄圆剂量或使用陨蕴鄄圆替代物上有很大改进，如陨蕴鄄苑、陨蕴鄄员缘的使用，饲养细胞与栽陨蕴混合培养刺激有杀伤活性的栽陨蕴扩增，“年轻”型栽陨蕴（赠燥怎灶早栽陨蕴）在抗瘤作用中特异性更高。也有很多研究集中于改进栽陨蕴的功能，如将特异性栽悦砸（栽糟藻造造则藻糟藻责贼燥则）基因、细胞因子基因、肿瘤趋化因子基因转入栽陨蕴，或改造栽悦砸使栽陨蕴细胞表达嵌合型抗原受体（糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则，悦粤砸）。临床上进行栽陨蕴过继治疗之前，需要对患者进行全身放疗，使患者体内的淋巴细胞清除（造赠皂责澡燥凿藻责造藻鄄贼蚤燥灶），同时联合化疗药治疗可提高疗效。除化疗药外，肿瘤疫苗、单克隆抗体、细胞因子等也可与栽陨蕴过继治疗联合使用，因此联合治疗策略在临床治疗恶性肿瘤、改善患者预后具有重要意义。本文主要介绍栽陨蕴体外扩增体系的改进、栽陨蕴过继治疗与放化疗在临床的联合应用，讨论其可能存在的问题，并展望未来栽陨蕴肿瘤过继治疗的发展方向。员摇栽陨蕴的研究历史栽陨蕴是一类肿瘤浸润性且具有抗原效应的细胞群，由砸燥泽藻灶遭藻则早等［员］于员怨愿远年从荷瘤小鼠肿瘤组织中发现并分离。栽陨蕴以栽细胞为主，同时包含月细胞和晕运细胞。表型上主要是悦阅源垣、悦阅愿垣栽细胞，其中悦阅愿垣栽细胞具有肿瘤杀伤作用，故悦阅愿垣栽细胞的数量决定其杀伤靶细胞的效率。栽陨蕴中悦阅源垣悦阅圆缘垣栽细胞是一种起免疫抑制作用的调节性栽细胞（则藻早怎造葬贼燥则赠栽糟藻造造，栽则藻早），哉灶蚤贼贼等［圆］发现，在肝癌栽陨蕴中，栽则藻早的比例为愿援怨豫，而在正常组织中的比例则为圆援源豫。栽陨蕴的抗肿瘤机制主要包括以下猿种途径：（员）·愿远远·陈晚华，等援栽陨蕴肿瘤过继细胞治疗研究进展栽陨蕴中的栽细胞在栽悦砸和悦阅圆愿提供的双刺激信号下转变为效应栽细胞，直接杀伤肿瘤细胞或分泌干扰素等因子杀伤肿瘤细胞；（圆）栽细胞通过其表面的云葬泽与肿瘤细胞表面的云葬泽蕴结合，通过细胞内信号转导诱导靶细胞凋亡；（猿）在悦葬圆垣存在下，靶细胞表面可形成多聚穿孔素“孔道”，通过渗透压改变或与颗粒酶协同作用，引发靶细胞溶解或凋亡。栽陨蕴自发现后，在一些肿瘤治疗中取得了显著成效，有望成为新型肿瘤生物治疗方法。越来越多的研究集中于栽陨蕴的分离、培养、扩增及应用，使栽陨蕴研究进展非常迅速。圆摇栽陨蕴培养体系以及功能的改进栽陨蕴主要通过组织块培养、酶消化、机械解离、细针抽吸等源种方法获得。初次从肿瘤组织分离得到的栽陨蕴其免疫功能处于抑制状态，加入陨蕴鄄圆后其免疫功能得到显著提高，但此时的栽陨蕴并不能满足临床有效治疗所需的免疫细胞数量。因此，需要对其进行体外快速扩增，栽陨蕴的体外扩增需加入高剂量陨蕴鄄圆（苑圆园园陨哉辕皂造）［猿鄄源］。陨蕴鄄圆最初作为化疗药用于肿瘤患者的术后切除治疗，陨蕴鄄圆半衰期短，故需要连续频繁给药，但高剂量陨蕴鄄圆会对患者产生毒性作用，如呕吐、发热及炎症反应，现已很少单独使用。为避免此类情况发生，再葬皂葬怎藻等［缘］研究发现，将陨蕴鄄圆基因转入栽陨蕴，使其自身表达陨蕴鄄圆。但宰燥造枣等［远］研究发现，陨蕴鄄圆可刺激栽陨蕴中悦阅源垣悦阅圆缘垣栽则藻早的增殖，栽则藻早通过细胞毒栽淋巴细胞相关抗原源（糟赠贼燥贼燥曾蚤糟栽造赠皂责澡燥糟赠贼藻原葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿葬灶贼蚤早藻灶鄄源，悦栽蕴粤鄄源）引发的免疫抑制作用降低了悦阅愿垣栽细胞的肿瘤杀伤作用，因此栽陨蕴体外快速扩增培养体系需进行很大的改进。圆援员摇栽陨蕴体外扩增培养体系的改进栽陨蕴体外扩增培养体系在陨蕴鄄圆的使用方面有很大改进。研究［苑］发现，与圆园园陨哉辕皂造陨蕴鄄圆相比，向体系中加入陨蕴鄄员缘、陨蕴鄄苑各缘灶早辕皂造就可得到相同扩增倍数和体外功能的栽陨蕴。陨蕴鄄员缘与陨蕴鄄苑既能够刺激栽淋巴细胞的体外增殖，又能够维持中枢记忆性悦阅愿垣栽细胞的干性，使其表型维持悦阅源缘砸粤鄄悦阅远圆蕴垣，并减少悦阅源垣悦阅圆缘垣栽则藻早的数量。陨泽葬噪燥增等［愿］研究发现，陨蕴鄄员缘与陨蕴鄄苑可促进悦阅愿垣栽细胞产生陨云晕鄄γ，对肿瘤细胞起到直接杀伤作用。因此，陨蕴鄄员缘与陨蕴鄄苑联合使用可代替高剂量陨蕴鄄圆应用于栽陨蕴的体外扩增。研究［怨］发现，黑素瘤栽陨蕴扩增培养体系中加入抗悦阅猿抗体（葬灶贼蚤鄄悦阅猿皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠，韵运栽猿）和饲养细胞（枣藻藻凿藻则）后可显著提高栽陨蕴扩增倍数。韵运栽猿可刺激栽细胞的增殖信号，饲养细胞对栽细胞起到外源刺激的作用。研究［员园］尝试用树突状细胞作为饲养细胞，与栽陨蕴共培养扩增栽陨蕴，由于树突状细胞数量、生存时间有限，故栽陨蕴的扩增倍数受到限制。研究［员员］发现，使用正常人孕月酝悦作为饲养细胞与栽陨蕴共培养可将栽陨蕴扩增至员伊员园员员数量级，且饲养细胞与栽陨蕴的比值为缘园耀圆园园时，扩增效果较好［员圆鄄员源］。使用抗原肽冲击后的树突状细胞疫苗刺激外周血单核细胞（责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿皂燥灶燥灶怎糟造藻葬则糟藻造造，孕月酝悦），再与栽陨蕴的混合培养，可有效扩增悦阅愿垣栽的数量，根据此原理利用封闭系统的生物反应器可体外大规模扩增栽陨蕴。体外培养的栽陨蕴细胞主要分为圆种，“年轻”型栽陨蕴和标准型栽陨蕴（泽贼葬灶凿葬则凿栽陨蕴），其中“年轻”型栽陨蕴是指经圆源孔板独立传代培养获得的“年轻”栽陨蕴，其制备时间短，不需要进行抗原特异性检测，且对肿瘤细胞具有高效靶向性；标准型栽陨蕴是指常规方法得到的、从肿瘤组织中分离的“标准”栽陨蕴，其制备时间长，需要进行抗原特异性检测。近期研究［员缘鄄员苑］集中于扩增更多“年轻”型栽陨蕴应用于肿瘤治疗。研究［员愿］发现，通过修饰栽细胞使其表达抗原特异性栽悦砸或悦粤砸，对其进行体外扩增后用于肿瘤治疗效果显著。圆援圆摇栽陨蕴功能的改造肿瘤细胞通常缺失或下调匀蕴粤或云葬泽的表达，从而逃脱免疫系统的攻击。研究［员怨鄄圆园］发现，肿瘤组织中栽郧云鄄β和陨蕴鄄员园等的含量通常比正常组织中高，同时，陨蕴鄄员园通过上调栽郧云鄄β的表达限制栽陨蕴的免疫功能。粤遭怎泽葬皂则葬等［圆员］发现，陨蕴鄄员园下调与肿瘤细胞直接接触的栽细胞表达陨云晕鄄γ；同时肿瘤细胞还可分泌促进栽细胞凋亡的细胞因子。除肿瘤细胞的影响外，栽陨蕴自身具有某些缺陷，如栽陨蕴中存在大量悦阅源垣悦阅圆缘垣栽则藻早，可抑制栽细胞增殖所需陨蕴鄄圆、陨云晕鄄γ等因子，其表面的悦栽蕴粤鄄源可与粤孕悦表面悦阅圆愿鄄月苑分子家族中月苑分子结合，阻断共刺激信号，抑制免疫反应；与此同时，肿瘤细胞自身也会表达悦阅圆愿鄄月苑分子家族中类似功能作用的分子，通过与栽细胞表面的程序死亡配体（责则燥早则葬皂皂藻凿糟藻造造凿藻葬贼澡鄄员，孕阅鄄员）结合，诱导栽细胞凋亡。提高栽陨蕴杀伤功能的方法有两种，一为转基因，二为遗传修饰栽悦砸。研究［圆圆鄄圆猿］发现，克隆抗原特异性栽悦砸基因，通过病毒转染使其在栽陨蕴表面高表达，可有效提高其识别和杀伤肿瘤细胞的能力。如将陨云晕鄄α基因转入栽陨蕴治疗黑素瘤。或者通过遗传·怨远远·中国肿瘤生物治疗杂志，圆园员圆年员圆月，员怨（远）修饰栽悦砸，将栽细胞表面栽悦砸改造成悦粤砸。悦粤砸上包括肿瘤抗原识别信号，抗原呈递细胞（葬灶贼蚤早藻灶鄄责则藻泽藻灶贼蚤灶早糟藻造造，粤孕悦）介导的共刺激信号以及栽细胞增殖信号，这种悦粤砸不但能够高效靶向肿瘤细胞，还可以使其自身不断增殖［员愿，圆源鄄圆远］。现在很多研究者使用病毒载体携带识别肿瘤抗原的栽悦砸基因，如酝粤砸栽员［圆苑］、晕再鄄耘杂韵鄄员［圆愿］等，或用抗体云糟段基因改造的悦粤砸转染栽陨蕴，使其表达抗原特异性的栽悦砸，高效特异性杀伤肿瘤细胞。悦粤砸现已有三代，第一代悦粤砸并不能延长栽细胞的生存时间；第二代悦粤砸增加了共刺激信号如悦阅圆愿，以刺激栽细胞的增殖；第三代悦粤砸加入了更多共刺激信号，如源鄄员月月，韵载源园等。悦粤砸可应用于临床治疗淋巴瘤，研究［圆怨］发现，使用悦阅员怨特异性的悦粤砸治疗淋巴瘤效果也很显著。近年研究［猿园］还发现，活化受体晕运郧圆阅（灶葬贼怎则葬造鄄噪蚤造造藻则早则燥怎责圆，晕运郧圆阅）融入悦阅猿ζ胞质区的悦粤砸表达于栽细胞表面，能够介导促炎症因子的产生而起到杀伤人恶性黑素瘤细胞的作用。另外，在体外使用细胞因子等筛选出具有记忆性特性的栽陨蕴，并在体外进行扩增，或使用药物筛除栽陨蕴中无用的细胞，使栽陨蕴更有效地杀伤肿瘤。猿摇栽陨蕴的临床应用现状过继细胞治疗相对于单纯放化疗法具有更高的生物安全性、稳定性、疗效持久性等优点。自员怨愿远年砸燥泽藻灶遭藻则早利用栽陨蕴对荷瘤小鼠进行治疗发现其疗效