白血病经典融合基因检测

白血病经典融合基因检测（一）bcr/abl融合基因abl为一原癌基因，位于9号染色体q34，基因产物是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶；bcr基因位于22号染色体q11，正常的bcr基因产物为160kD的胞质磷酸蛋白，由于t（9；22）（q34；q11）的易位，形成bcr/abl融合基因，该易位产生bcr/abl嵌合基因，基因产物为210kD的融合蛋白，它的表达激活了酪氨酸蛋白激酶，改变了细胞的蛋白酪氨酸水平和肌动蛋白结合能力，扰乱了正常的信号传导途径，抑制了凋亡的发生。bcr基因断裂点集中在三个区域:主要(majorbcr，M-bcr)、次要(minorbcr，m-bcr)和μ(μ-bcr)。abl基因断裂位于第1或第2内含子。因断裂点不一，bcr-abl融合基因及其mRNA和蛋白产物呈多样性。根据bcr基因断裂点的不同，主要有下述几种类型的bcr/abl融合形式:①在典型的CML中，大部分融合基因是在主要断裂点簇集区(M-bcr)内断裂融合而成，由此形成的bcr/abl融合mRNA是由b3a2或b2a2转录而成，其最终产物是相对分子质量210×103的胞浆蛋白P210，这种癌蛋白是绝大多数慢性期CML表型异常的根源所在。②当bcr基因断裂点发生在上游的一段长约54.4kb的内含子，也称m-bcr区，产生一个e1a2接头的杂合mRNA，编码P190融合蛋白。③bcr断裂点也可在M-bcr区的下游，即μ-bcr，产生e19a2融合，编码P230融合蛋白。【我个人认为P230CML其特征主要是成熟中性粒细胞增生为主，表现为隐匿，良性的临床过程，患者生存期长的特点。】bcr/abl融合基因存在于95%以上的慢性粒细胞白血病患者，是CML最重要的分标志，是疾病状态的决定性因素。在一部分成人急性淋巴细胞性白血病（20%－30%）、儿童急性淋巴细胞白血病（2%－10%）和急性粒细胞性白血病的患者中也可表达bcr/abl融合基因。在bcr/abl阳性B-ALL细胞具有较特殊的表型，更多地表达CD34及CD10等细胞表面抗原，CD38阳性率较低，且IgH检出率也相对较低，而CD10/CD34/CD38-是其独特的免疫表型特点。（二）AML1/ETO融合基因t(8；21)(q22；q22)主要见于急性粒细胞白血病部分分化型(AML-M2)，亦可发生于急性粒细胞白血病未分化型(AML-M1)、急性粒-单核细胞白血病(AML-M4)及骨髓增生异常综合征(MDS)-RAEB-T中。这种染色体易位导致21号体上AML1基因(acutemyeloblasticleukemiaonegene)与8号染色体的ETO基因(eighttwentyonegene，也称为MTG8基因)的融合形成AML1/ETO融合基因。AML1/ETO融合蛋白是一种转录抑制因子，可抑制正常AML1蛋白介导的功能，改变造血祖细胞自我更新及成熟过程，同时也产生启动异常造血细胞增殖的信号，引起白血病细胞生长。t(8；21)(q22；q22)阳性是预后好的标志，其完全缓解(CR)率可达90%，5年长期无病生存率(event-freesurvival，EFS)可达50%-70%，AML1/ETO融合基因的存在是白血病预后良好的标志。经化疗或BMT后大部分病人可在短期内转为阴性，但仍有转阳性的可能，及时治疗可再次转阴性。RT-PCR结果由阴性转阳性或持续阳性可能预示复发。（三）CBFβ/MYH11融合基因M4Eo是M4型白血病中的一种特殊类型，约占急性粒细胞白血病的10%。患者骨髓中粒系和单核系原始细胞同时恶性增生，嗜酸粒细胞占5%～30%。含有CBFβ-MYH11融合基因的M4Eo患者预后较好。Inv(16)/t(16；16)(p13；q22)为急性髓系白血病(AML)-M4Eo的非随机染色体异常，16q22断裂区受累基因CBFβ编码CBF的β亚单位，inv（16）/t(16；16)导致形成CBFβ/MYH11融合基因。inv(16)/t(16；16)(p13；q22)的结果是16号染色体长臂的CBFβ基因与短臂的平滑肌肌球蛋白重链1(MYH11)基因发生重排，形成CBFβ-MYH11和MYH11-CBFβ两种融合基因，其中CBFβ-MYH11融合基因易促使白血病发病。CBFβ链不直接结合DNA，而是通过与CBFα形成异二聚体来增加α链与DNA结合的亲和力，稳定该异二聚体的稳定性。目前已识别了一些CBF结合位点，它们存在于TCR、GM-CSF、GM-CSF受体、髓过氧化物酶及中性粒细胞弹性蛋白基因的调控区，因此可能是由这些基因的表达失控而致白血病。CBFβ基因断裂点恒定地位于3′端编码区的17个氨基酸处(nt495)，而MYH11基因的断裂点存在5种不同方式，因此根据MYH11断裂点的不同，CBFβ-MYH11转录本有5种不同的剪接方式，迄今共发现10余种CBFβ/MYH11融合基因转录本，但最常见的为A型(即MYH11基因的断裂点在于nt1921)，占80%，其余均少见。（四）PML/RARα融合基因急性早幼粒细胞白血病(APL)具有两个显著特点，其一为95%APL患者具有t(15；17)染色体异常，其形成的PML-RARα融合基因是其分子标志；其二为对全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷疗效良好。APL具有特异性的染色体易位t(15；17)，易位使17号染色体上的RARα基因与15号染色体上的PML基因融合，产生融合基因PML-RARα。由于PML基因的断裂点不同，而RARα断裂点恒定，导致可以产生相应的3种不同PML-RARα融合基因的异构体，即PML第3外显子与RARα第3外显子结合形成的p3r3(S型，短型)，PML第6外显子与RARα第3外显子结合形成的p6r3(L型，长型)，极少数患者为L变异型（5%），其中以长型（55%）和短型（40%）异构体为主。3种不同的PML/RARα融合基因异构体，经转录三者分别编码出87×103、98×103和103×103的蛋白质。PML-RARα融合基因是APL患者特异的分子生物学标志，PML-RARα融合基因表达的融合蛋白干扰了正常RARα在核内的分布和对细胞分化的调控，使大量细胞阻滞在早幼细胞阶段，在APL发病机制中起重要作用。其不同的基因异构体分型的预后有明显不同，S型患者缓解前的死亡率及缓解后的复发率均高于L型骨髓残留病的消灭需要一个较长时间，在3年之后这种残留白血病才逐渐消失。有报道，在复发前的3～6个月PML/RARα融合基因的转录信号要增强；缓解1年，查PML/RARα融合基因仍可阳性。由此可见，RT-PCR查PML/RARα融合基因的灵敏度高，并能预报复发，即使经治者只含少量残留细胞同样可检测到。其差异的原因可能在于，骨髓细胞形态学检测的诊断率只能达到85%左右，特别是经过治疗后的患者，形态学则完全不能确诊；而用巢式RT-PCR可从APL患者骨髓标本中检出50pg的微量融合基因mRNA。