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考源教学资源网专题二理教材巧思维夯基固本回顾•教材基础考源教学资源网专题二读透教材一、微生物的实验室培养1．培养基：(1)培养基即人们按照□1____________________________，配制出供其生长繁殖的基质。(2)按物理状态，可将培养基划分为□2______培养基和□3______培养基(如琼脂培养基)。微生物对营养物质的不同需求液体固体考源教学资源网专题二(3)培养基一般都含有的成分是：□4_______________________，在此基础上还需满足微生物生长对□5___________________________的需求。水、碳源、氮源和无机盐pH、特殊营养物质及氧气考源教学资源网．消毒和灭菌考源教学资源网大肠杆菌纯化及菌种保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：□15______→称量→溶化→□16________→□17________计算灭菌倒平板考源教学资源网专题二(2)微生物纯化的原理及方法：①原理：在□18_______培养基上将细菌稀释或分散成□19_______________，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。②方法：□20__________________________________，要求无菌操作。固体单个细胞平板划线法、稀释涂布平板法考源教学资源网专题二(3)菌种保藏：①短期保存：□21__________________上4℃保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异。②长期保存：采用□22_____________－20℃冷冻箱中保藏。固体斜面培养基甘油管藏法考源教学资源网专题二二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．分离原理(1)土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成□23_______，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起□24______作用。(2)使用以□25_______为唯一氮源的培养基能促进□26___________的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而分离出目的菌。脲酶催化尿素分解尿素考源教学资源网．统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用□27_______________。3．实验流程：土壤取样→□28_____________→微生物的培养与观察→细菌的计数。稀释涂布平板法制备培养基考源教学资源网专题二三、分解纤维素的微生物的分离1．纤维素酶的组成及作用(1)组成：一种□29________酶，它至少包括三种组分，即□30________________________________。(2)作用：纤维素――→C1酶Cx酶□31___________――→葡萄糖苷酶□32__________复合C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶纤维二糖葡萄糖考源教学资源网．筛选方法(1)方法：□33____________法，即通过是否产生□34________来筛选纤维素分解菌。(2)培养基：是以□35__________为唯一碳源的选择培养基。3．筛选流程土壤取样—□36________→□37________→将样品涂布到□38_________________的培养基上→挑选□39____________的菌落。刚果红染色透明圈纤维素粉选择培养梯度稀释鉴别纤维素分解菌产生透明圈考源教学资源网．判断下列说法是否正确：(1)根据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型。(×)(2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分。(√)(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求。(√)(4)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。(√)考源教学资源网专题二(5)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。(√)(6)统计样品中的活菌一般用平板划线法。(×)(7)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌。(×)(8)刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。(√)(9)纤维素酶只包括三种组分：C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。(×)(10)筛选分解纤维素的微生物的培养基中是以纤维素为唯一碳源的选择培养基。(√)考源教学资源网．连一连答案①—b—Ⅰ②—b③、④—a⑤—a—Ⅲ、Ⅳ⑥—b—Ⅱ考源教学资源网专题二知考点破疑难系统知识整合•核心考点考源教学资源网微生物的实验室培养(1)培养基①概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。考源教学资源网专题二②分类和应用。考源教学资源网专题二③培养基配方及营养要素。基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。营养要素定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3；考源教学资源网专题二【特别提醒】1微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用利用的氮源是铵盐、硝酸盐。2对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。3有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。4制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。考源教学资源网专题二(2)无菌技术：①消毒和灭菌的区别。考源教学资源网专题二【特别提醒】用酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好，原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。考源教学资源网专题二②三种常用灭菌方法的比较：考源教学资源网微生物的纯化培养及菌种的保藏(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。(2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。考源教学资源网可以作为硝化细菌碳源、氮源和能源的是()A．CO2、NH3、光能B．(CH2O)、N2、NH3C．CO2、NH3、NH3D．(CH2O)、NH3、N2[解析]本题考查如下几个知识点：①硝化细菌的新陈代谢类型是化能自养型微生物；②硝化细菌合成有机物所需能量来源是来自氧化外界环境中的NH3；③合成有机物所需的碳源是二氧化碳；④NH3氧化的产物是NO－3，也就是硝化细菌的氮源。[答案]C考源教学资源网有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。考源教学资源网专题二(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。考源教学资源网专题二[解析](1)要获得分解原油的细菌，只有在以原油为唯一碳源的培养基中，这种细菌才可以大量繁殖，而其他细菌不能生存。此种培养基属于选择培养基。(2)纯化菌种常用平板划线法和稀释涂布平板法。(3)在以原油为唯一碳源的培养基上，在菌落周围的原油被分解而形成分解圈，分解圈越大，说明该菌株降解能力越强。(4)实验室灭菌有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，实验操作要在酒精灯火焰附近的无菌区进行。考源教学资源网专题二[答案](1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰考源教学资源网选择合适的培养基分离分解尿素的细菌的培养基即为选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。考源教学资源网．统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。考源教学资源网专题二(2)间接计数法(活菌计数法)：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作：a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。考源教学资源网专题二③计算公式：每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。3．细菌分离与计数的实验流程土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数。考源教学资源网专题二【特别提醒】判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养；判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目，进行比较得出结论。考源教学资源网专题二上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容至1000mL。(1)如果要对土壤中分解尿素的细菌进行分离，则需要选择上述哪种培养基？________，该培养基中的碳源是________，能分离尿素分解菌的原因是______________________________________________________________________________________。考源教学资源网专题二(