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专题二细胞工程植物细胞工程动物细胞工程细胞工程动物细胞培养体细胞核移植技术与克隆动物动物细胞融合单克隆抗体过程条件应用概念过程应用前景概念过程应用植物组织培养植物体细胞杂交技术原理、过程过程、概念优势目标引领•一、植物的组织培养II•二、动物的细胞培养与体细胞克隆I•三、细胞融合与单克隆抗体II独立自学：•一、请说出植物组织培养的概念和原理•二、请说出植物组织培养的过程1、概念：在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。2、原理：植物细胞的全能性3、过程：外植体愈伤组织根、芽植物体再分化脱分化也叫：外植体如：茎尖、根尖适宜的温度、PH值、养料、激素、充足氧气条件避光需光无细胞分裂、分化能力特点：具分裂、分化能力，既具全能性（主要）无定形状态、高度液泡化、排列疏松、无规则、无叶绿体,不进行光合作用植物组织培养技术(重点理解)植物细胞工程的实际应用•植物繁殖的新途径–微型繁殖–作物脱毒–人工种子•作物新品种的培育–单倍体育种–诱导突变体•细胞产物的工厂化生产人参皂甘的生产原生质体番茄细胞原生质体融合再生出细胞壁杂种细胞脱分化愈伤组织杂种植株再分化植物体细胞杂交技术（重点理解）：1、过程：马铃薯细胞标志：成功融合人工诱导去壁植物组织培养植物细胞的融合酶解法（纤维素酶、果胶酶等）物理法：离心、振动、电刺激等化学法：聚乙二醇（PEG）将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。4、优势：（与有性杂交方法比较）克服植物远缘杂交不亲和性3、原理：细胞膜的流动性和细胞全能性主要：原生质体融合结果2、概念：植物体细胞杂交技术（重点理解）：动物细胞培养从动物机体中取出相关的，将它分散成，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞1概念：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官如：肾、肺等细胞生命力旺盛，分裂能力强原理：细胞增殖使细胞和培养液充分接触组织单个细胞生长和增殖2、过程：取什么样的组织？如何将组织分散成单个细胞？什么叫原代培养？什么叫传代细胞培养？如何进行传代培养？什么是细胞贴壁现象？什么是细胞接触抑制取幼龄组织或器官如：肾脏肌肉用胰蛋白酶处理加入细胞培养液细胞贴壁：培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒细胞接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。原代培养：从机体取出后立即培养的细胞。10代以内用胰蛋白酶分散成单个细胞传代培养：分瓶后的培养，从10代培养到40－50代细胞2、过程取的组织、器官细胞悬浮液酶贴满瓶壁的细胞单个细胞加入液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养接触抑制原代培养1-10代细胞40—50代细胞(细胞株)传代培养无限传代（细胞系）用处理胰蛋白酶遗传物质不变遗传物质改变，能无限增殖（癌变）3、条件：1、无菌、无毒的环境2、营养3、温度和PH4、气体环境：（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）补充合成培养基中缺乏的物质36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。O2作用：进行呼吸，提供能量CO2作用：维持培养液的PH值（95%空气和5%CO2）（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）有氧比较：培养结果培养目的培养基特有成分培养基性质原理比较项目细胞的全能性植物体或组织快速繁殖、培育无病毒植株等蔗糖、植物激素固体培养基植物组织培养细胞株、细胞系获得细胞或细胞分泌蛋白葡萄糖、动物血清液体培养基细胞增殖动物细胞培养1、概念：动物细胞核移植和克隆动物将一个动物的细胞核，移入另一个去核的卵母细胞中，使其重组发育成一个胚胎，最终发育成动物个体。结果：原理：分类：克隆动物(用核移植方法得到的动物)动物细胞核的全能性胚胎细胞核移植、体细胞核移植2、动物体细胞核移植的过程供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵母细胞（减Ⅱ中期：供质）去核无核卵母细胞核移植杂种细胞早期胚胎胚胎移植代孕母体新个体分娩激活卵裂1、概念：动物细胞融合两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。原理：结果：细胞膜的流动性得到杂交细胞诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒(与植物细胞杂交不同点)离心、振动、电刺激；聚乙二醇；2、诱导融合的方法：1、概念：单克隆：一个细胞经过无性繁殖（多次有丝分裂），形成一个细胞群，叫做一个克隆，即单克隆。单克隆抗体：由一个效应B细胞经过无性繁殖形成一个细胞群产生的化学性质单一，特异性强的抗体，叫单克隆抗体。单克隆抗体18B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合（只考虑两两融合）培养液中融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高3.应用：①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速②用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗（四）单克隆抗体当堂诊学：1.单克隆抗体的优点是________________________________特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是_________________________________每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是_______________产生单克隆抗体的细胞是__________效应B细胞（浆细胞）杂交瘤细胞