洁净区环境监测操作规程

洁净区环境监测操作规程1目的用于规范洁净区温湿度、压差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌监测的操作。2适用范围适用于洁净区温湿度、压差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌观察的测定。3职责3.1质量保证部QA负责噪音、照度的检测。3.2生产车间人员负责温湿度、压差的观察。3.3生产部空调操作人员负责温湿度、压差的调控，并及时反馈信息。3.4设备工程部计量人员负责监控仪器、仪表的定期校验。3.5质量控制部人员负责洁净区的沉降菌的配制、计数、报告的完成。3.6质量保证部现场监控QA负责洁净区的沉降菌的监测。3.7生产车间配合洁净区沉降菌监测的完成。3.8QC人员负责浮游菌的监测。4内容4.1洁净区洁净等级划分4.1.1A级：指高风险操作区，如：灌装、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。4.1.2B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域。4.1.3C级和D级：指生产无菌药品过程中重要程度较次的洁净操作区。4.2温湿度4.2.1标准规定：洁净区的温度和相对湿度应与药品生产工艺要求相适应。无特殊要求时，洁净区温度为18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%。有特殊要求车间根据工艺控制。4.2.2温度观察：检查温湿度计是否完整，视线正对温湿度计水平读取显示的数据，需要记录的应立即填入表格中。4.2.3湿度观察：视线正对湿度表，准确读数。需记录的应立即填入表格中。4.2.4需要加水的湿度计，在观察前应检查在蓄水腔内是否有水，无水则需加入适量水，再观察湿度。4.2.5洁净区的温湿度每天至少记录两次，上午一次，下午一次。4.2.6设备计量人员每年至少组织校验一次监控系统的仪器设备。4.3静压差4.3.1湿度观察：标准规定：洁净区与非洁净区之间、不同等级洁净区之间的压差应不低于10帕斯卡，相同洁净度等级不同功能的操作间之间应保持2-3帕的压差梯度，以防止污染和交叉污染。4.3.2产尘房间与相邻房间呈相对负压。4.3.3洁净区的静压差以微压差计显示，每日至少记录两次，上午一次，下午一次。（包括洁净区与室外，不同洁净级别间及所有有压差指示的房间）。4.3.4测试时所有的空调系统和层流系统应处于连续的正常运行状态。4.3.5洁净室所有的门应关闭，测试时不允许有人穿越房间。4.3.6当发现监测结果超出标准规定的范围时，应立即检查原因，必要时对空调系统进行调整。4.4噪音4.4.1标准规定：洁净区噪音不得高于70分贝。4.4.2洁净区的噪音检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测噪音。4.4.3检测方法检测点布置，当面积≤50m2时，仅测房间中心一个点；当房间面积较大时，每增加50m2增加一个点，测点距在1.2m。4.5照度4.5.1标准规定：洁净区主要操作间照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均匀度不应小于0.7。4.5.2洁净区的照度检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测照度。4.5.3检测要求：室内照度测度必须在室温已趋稳定，光源光输出趋于稳定后进行（对荧光灯必须有100h）。4.5.4检测方法测点平面离地面0.85m，按间距1-2m布点，测点距墙面1m。其要求基本与洁净度的测定位置要求相同。记录实测照度值并计算总的平均照度。照度测量一般仅测定除局部照明之外的一般照明。4.6沉降菌4.6.1方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。4.6.2使用的仪器和设备4.6.2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。4.6.2.2恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。4.6.2.3培养皿一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。4.6.2.4培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。4.6.3测试步骤4.6.3.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。4.6.3.2培养在30～35℃培养，时间为5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。4.6.3.3菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。4.6.4注意事项4.6.4.1测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。4.6.4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。4.6.4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.6.4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。4.6.4.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。4.6.5测试规则4.6.5.1测试状态沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。4.6.5.2测试人员测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。4.6.5.3测试时间对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。4.6.5.4沉降菌采样点采样点数目及其布置：最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2。采样点的布置：工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。4.6.5.5记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。表1最少采样点数目面积（㎡）洁净度级别A、B级C级D级＜102-322≥10-＜20422≥20-＜40822≥40-＜1001642≥100-＜20040103注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积表2最少培养皿数洁净度级别所需ф90mm培养皿数（以沉降0.5h计）A级14B、C级2D级24.6.6结果计算4.6.6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。4.6.6.2平均菌落数的计算见下式：式中：m为平均菌落数；m1为1号培养皿菌落数；m2为2号培养皿菌落数；mn为n号培养皿菌落数；n为培养皿总数。4.6.7结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。4.6.7.1洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。见表3。4.6.7.2若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。4.6.7.3重新测试仍不合格，按“洁净室环境监控管理规程”进行超标调查。表3级别状态A级B级C级D级标准（静态）＜1个/皿≤1个/皿≤3个/皿≤10个/皿标准（动态）＜1个/皿≤5个/皿≤50个/皿≤100个/皿4.7浮游菌4.7.1取样前准备工作：4.7.1.1依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。4.7.1.2在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。4.7.1.3将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。4.7.1.4采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。4.7.2仪器、设备和培养基：4.7.2.1所用的仪器、设备和培养基：浮游菌采样器培养皿（φ90mm×15mm）培养基（营养琼脂培养基）恒温培养箱4.7.2.2仪器、设备、培养基的要求：浮游菌采样器：浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。应严格按仪器说明书的要求进行操作。采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。4.7.3测试方法：4.7.3.1测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。用消毒剂擦净培养皿的外表面。采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。4.7.3.2采样程序：仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。4.7.4测试规则：4.7.4.1测试状态：浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。4.7.4.2测试人员：测试人员必须穿戴符和被测环境级别的工作服。静态测试时，室内人员不得多于2人。4.7.4.3测试时间：对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。4.7.4.4最少采样点数目及其布置，最小采样量，见下表:面积（m2）洁净度级别ABC验证监测验证监测验证监测＜102～31212--≥10～＜2042212--≥20～＜4083212--≥40～＜100164412--≥100～＜20040--10--3--≥200～40080--20--6--400160--40--13--工作区测点位置离地0.8m～1.5m左右，送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。每个采样点一般采样一次对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。4.7.5培养：取样结束后将平皿复倒置隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。4.7.6菌落计数：4.7.6.1用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。4.7.6.2若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上的菌落计数。计数：培养结束，将上述培养后的平皿取出，逐个点计菌落数，必要时用放大镜检查，并记录。4.7.7结果计算：4.7.7.1平均菌落数的计算见下式：平均菌落数m=Nmmmn21式中：m为该房间（或区域）的平均菌落数；m1、m2‥‥‥mn为该房间（或区域）各取样点的菌落数；N为培养皿总数