血液一般检验-红细胞检验

第二章血液一般检验第二章血液一般检验血常规检验报告单第二章血液一般检验第三节红细胞检验一、红细胞计数二、血红蛋白测定三、血细胞比容测定四、红细胞平均指数五、网织红细胞计数本节内容六、红细胞沉降率测定七、红细胞形态检查第二章血液一般检验一、红细胞计数（RBC）红细胞计数（RBC）是测定单位容积血液中红细胞数量。RBC与血红蛋白和血细胞比容结合，常作为诊断贫血、真性红细胞增多症及红细胞增多的主要指标之一。第二章血液一般检验（一）检测原理显微镜法的检测原理：采用等渗稀释液将血液标本稀释一定倍数（200倍）后，充入改良牛鲍血细胞计数板中，在显微镜下计数一定区域（体积）内的红细胞数量，经换算求出每升血液中红细胞数量。第二章血液一般检验（二）操作步骤显微镜法准备稀释液：取一试管，加入红细胞稀释液2ml。采血和加血：准确采集末梢血或吸取新鲜静脉抗凝血10μl，加至上述稀释液中，立即混匀。充池：准备计数板、充分混匀稀释液、充池，室温静置2～3min，待细胞下沉。计数：高倍镜下计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。计算：第二章血液一般检验（三）方法评价第二章血液一般检验常用红细胞计数稀释液组成与作用第二章血液一般检验（四）质量保证血细胞计数质量保证的关键是控制计数误差。血细胞计数误差可来源于技术误差、仪器误差和技术域误差，可通过减小误差进行红细胞计数的质量控制。第二章血液一般检验血细胞计数误差种类与原因第二章血液一般检验（五）参考区间成年：男性（4.0～5.5）×1012/L，女性（3.5～5.0）×1012/L。新生儿（6.0～7.0）×1012/L。第二章血液一般检验（六）临床意义1．生理性变化红细胞数量受到许多生理因素影响，但与相同年龄、性别人群的参考区间相比，一般在±20%以内。第二章血液一般检验红细胞生理性变化与临床意义第二章血液一般检验2．病理性变化（1）病理性增多第二章血液一般检验（2）病理性减少：见于各种原因导致的贫血贫血是指外周血中单位体积内血红蛋白（Hb）、红细胞计数（RBC）和（或）血细胞比容（HCT）低于参考区间下限。第二章血液一般检验病因不同可将贫血分为3大类。此外，药物也可引起贫血。1）红细胞生成减少：①骨髓功能衰竭的再生障碍性贫血、急性造血功能停滞等。②造血物质缺乏或利用障碍，如肾性贫血、缺铁性贫血（铁缺乏）、铁粒幼细胞贫血（铁利用障碍）、巨幼细胞贫血（叶酸、维生素B12缺乏性DNA合成障碍）等。2）红细胞破坏过多3）红细胞丢失（失血）：如急性、慢性失血性贫血。第二章血液一般检验红细胞破坏过多的原因与临床意义第二章血液一般检验引起贫血的药物与机制第二章血液一般检验二、血红蛋白测定（Hb或HGB）血红蛋白是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质，是红细胞内的运输蛋白。每个Hb分子含有4条珠蛋白肽链，每条肽链结合1个亚铁血红素，形成具有四级空间结构的四聚体，以利于结合O2和CO2。第二章血液一般检验（一）检测原理HiCN法检测原理：血红蛋白（SHb除外）中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰化钾氧化为高铁离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白（Hi）。Hi与氰化钾（KCN）中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm，波谷为504nm。在特定条件下，HiCN毫摩尔消光系数为44L/（mmol•cm）。HiCN在540nm处的吸光度与浓度成正比，根据测得吸光度可求得血红蛋白浓度。第二章血液一般检验十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）检测原理：SDS作为一种阴离子表面活性剂，具有轻度氧化作用。血液中除SHb以外的所有血红蛋白均可与低浓度的SDS作用，亚铁血红素被氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDS-Hb），最大吸收峰在538nm。第二章血液一般检验（二）操作步骤1、氰化高铁血红蛋白测定法（直接定量测定法）准备转化液：取一试管，加入5mlHiCN转化液。采血与转化：采集全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，与转化液充分混匀，静置5min。测定吸光度：用符合WHO标准的分光光度计，在波长540nm处、光径为1.000cm、以HiCN试剂调零，测定标本的吸光度（A）。计算：7.3672514400064458)/(AALgHb第二章血液一般检验2．十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法制备标准曲线：取4份不同浓度抗凝血分别用HiCN法及本法测定每份血液的血红蛋白浓度和吸光度，以HiCN法测得的血红蛋白浓度为横坐标，本法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。测定：取应用液5ml于试管中，加入全血20μl充分混匀。5min后置538nm下以应用液调零，测定其吸光度，查标准曲线即可得出血红蛋白浓度。第二章血液一般检验（三）方法学评价HiCN测定法是WHO和国际血液学标准化委员会ICSH推荐的参考方法，由于HiCN试剂含有剧毒的氰化钾，各国均相继研发出不含氰化钾的血红蛋白测定方法，有的测定法已用于血液分析仪，但其标准应溯源到HiCN量值。第二章血液一般检验血红蛋白测定的方法学评价第二章血液一般检验HiCN转化液的作用与评价第二章血液一般检验（四）质量保证第二章血液一般检验（五）参考区间成年：男性120～160g/L，女性110～150g/L。新生儿：170～200g/L。第二章血液一般检验（六）临床意义与红细胞计数相似，但判断贫血程度优于红细胞计数。根据Hb浓度可将贫血分为4度：轻度贫血：Hb＜120g/L（女性Hb＜110g/L）；中度贫血：Hb＜90g/L；重度贫血：Hb＜60g/L；极重度贫血：Hb＜30g/L。当RBC＜1.5×1012/L，Hb＜45g/L时，应考虑输血。第二章血液一般检验三、血细胞比容测定(Hct)血细胞比容（Hct，HCT，PCV）是指一定体积的全血中红细胞所占体积的相对比例。HCT高低与红细胞数量、平均体积及血浆量有关，主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断，血液稀释和血液浓缩变化的测定，红细胞平均值的计算等。第二章血液一般检验（一）检测原理HCT直接测定采用离心法，间接测定采用血液分析仪法。1．离心法常用微量法和温氏法，其检测原理基本相同，但离心力不同。血液离心后分5层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。读取结果以还原红细胞层为准，见右图。血细胞比容结果判断还原红细胞层第二章血液一般检验2．血液分析仪法由红细胞计数和红细胞平均体积导出HCT，HCT＝红细胞计数×红细胞平均体积。第二章血液一般检验（二）操作步骤1．微量法吸血：用虹吸法将血液充入专用毛细管中，至2/3(50mm)处封口：把毛细管未吸血的一端垂直插入密封胶，封口。离心：把毛细管放入专用高速离心机，以RCF12500g离心5min。读数：毛细管置于专用读数板的凹槽中，移动滑尺刻度至还原红细胞层表层，读出相对应的数值；或用刻度尺分别测量红细胞层和全血层长度，计算其比值，即为HCT。第二章血液一般检验2．温氏法加标本：用毛细滴管吸取混匀的抗凝血，插入温氏管底部，将血液缓慢注入至刻度“10”处，用小橡皮塞塞紧管口。离心：将温氏管置于离心机，以相对离心力RCF为2264g离心30min。读数：以还原红细胞层表面为准，读取红细胞层柱高的毫米数，乘以0.01，即为HCT值。第二章血液一般检验（三）方法评价HCT测定的方法学评价第二章血液一般检验（四）质量保证第二章血液一般检验（五）参考区间成年：男性：0.40～0.50；女性：0.37～0.48。新生儿：0.47～0.67。儿童：0.33～0.42。第二章血液一般检验（六）临床意义与红细胞计数相似。HCT减低是诊断贫血的指标，若红细胞数量正常，血浆量增加，为假性贫血；HCT增加可因红细胞数量绝对增加或血浆量减少所致。HCT的主要应用价值为：1．临床补液量的参考2．真性红细胞增多症诊断指标3．计算红细胞平均指数的基础第二章血液一般检验HCT增高和减低的原因第二章血液一般检验四、红细胞平均指数红细胞平均体积（MCV）红细胞平均血红蛋白量（MCH）红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）红细胞平均指数有助于深入认识红细胞特征，为贫血的鉴别诊断提供线索。第二章血液一般检验（一）检测原理1．手工法根据RBC、Hb、HCT测定结果计算红细胞平均指数。第二章血液一般检验2．血液分析仪法MCV：由血液分析仪直接测定导出；MCH：由仪器测定HGB、RBC，MCH＝HGB/RBC；MCHC：HGB/（RBC×MCV）。第二章血液一般检验（二）操作步骤检测RBC、Hb、HCT计算：根据RBC、Hb、HCT测定结果计算红细胞平均指数。第二章血液一般检验（三）方法评价手工法红细胞平均指数由RBC、HGB、HCT测定后计算而来，因此，必须采用同一抗凝血标本，且所检测的结果必须准确。仪器法红细胞平均指数的测定同样依赖于RBC、HGB和MCV测定的准确性。第二章血液一般检验（四）参考区间第二章血液一般检验（五）临床意义贫血形态学分类及临床意义补：红细胞体积分布宽度（RDW）测定RDW：是反映外周血红细胞体积异质性的参数，红细胞体积大小的变异系数表示。【参考区间】11.5%～14.5%【临床意义】（一）结合MCV用于贫血的形态学分类贫血形态学分类形态学分类MCVRDW增高正常大细胞均一性贫血部分再生障碍性贫血增高大细胞非均一性贫血巨幼细胞贫血、MDS病因正常正常正常细胞均一性贫血急性失血性贫血增高正常细胞非均一性贫血再生障碍性贫血、酶缺乏等减低正常小细胞均一性贫血珠蛋白生成障碍性贫血增高小细胞非均一性贫血缺铁性贫血（二）缺铁性贫血的诊断和鉴别诊断第二章血液一般检验网织红细胞五、网织红细胞计数网织红细胞（Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，略大于成熟红细胞，其胞质中残存的嗜碱性物质RNA经碱性染料活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。ICSH将网织红细胞分为4型。第二章血液一般检验网织红细胞分形及特征第二章血液一般检验第二章血液一般检验（一）检测原理1．普通显微镜法活体染料的碱性着色基团可与网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构。2．血液分析仪法特殊染料与网织红细胞中RNA结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。第二章血液一般检验（二）操作步骤1．试管法加染液：取一试管，加入染液2滴。加血染色：注入新鲜全血2滴，立即混匀，室温下放置15～20min。制备涂片：取混匀染色血1小滴制成薄血涂片，自然干燥。观察：低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好的部位。计数：常规法是在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞；Miller窥盘计数法是将Miller窥盘放置于目镜内，于Miller窥盘的小格A内计所有成熟RBC，在大格B内（含小格）计数网织红细胞数。第二章血液一般检验Miller窥盘结构示意图第二章血液一般检验计算第二章血液一般检验2．玻片法加染液：于载玻片的一端滴加10g/L煌焦油蓝乙醇溶液1滴，自然干燥后备用。加血液：取血l滴在干燥的染料上，用推片角将血滴与染料混匀，用另一载玻片盖在此载玻片上，使两玻片粘合。制备涂片：5～10min后，移开上层玻片，取l小滴推制成血涂片。观察、计数和计算：同试管法。第二章血液一般检验（三）方法评价网织红细胞计数的方法学评价第二章血液一般检验（四）质量保证以手工计数法为重点。1．选择合适的染料用于网织红细胞检测的活体染料很多，有煌焦油蓝（brilliantcresylblue）、新亚甲蓝（newmethyleneblue）、中性红、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。第二章血液一般检验网织红细胞活体染料的评价第二章血液一般检验2.正确辨认网织红细胞外周血液网织红细胞主要为Ⅳ型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均应