PAS染色

PAS染色高碘酸—希夫反应（PAS反应）•原理•高碘酸是一种氧化剂。•许多多糖残基含有的二醇基(CHOH—CHOH)可被高碘酸氧化为二醛(CHO—CHO)。•高碘酸的特点是不再进一步氧化巳生成的醛基。•二醛能与希夫试剂(SchiffReagent)反应生成红色不溶性复合物。这个反应对于二醇基有特异性。•糖原系由葡萄糖残基为唯一成分组成的纯多糖，富含二醇基，故观察呈阳性反应。•PAS反应还可显示中性糖蛋白，因为其糖链中的许多己糖残基也含有二醇基。•虽然糖氨多糖中一些糖醛酸残基也有二醇基．在一般情况下它们不易被高碘酸化，除非提高反应温度并大大延长作用时间。原理高碘酸—希夫反应（PAS反应）溶液配制•Carrnoy氏固定液：•100%酒精60毫升•氯仿30毫升•冰醋酸10毫升•此液穿透力非常快，固定力强，对核固定优良，并可保存糖原，也用于糖类、DNA、RNA的固定。高碘酸—希夫反应（PAS反应）•Shiff试剂•0.5克碱性复红溶于100毫升沸水使溶（震荡5分钟）•冷至50摄氏度时，加1N盐酸10毫升•冷至25摄氏度时，加偏重亚硫酸钠0.5克•---紧塞瓶口，室温避光放置12-24小时•---加入0.5克活性炭，摇动1分钟（若为草黄色，此步可省略）•---滤纸过滤，入有色西口平，冰箱保存高碘酸—希夫反应（PAS反应）溶液配制•1N盐酸•盐酸8.5毫升•蒸馏水91.5毫升••亚硫酸水•10%偏重亚硫酸钠10毫升•1N盐酸10毫升•蒸馏水200毫升高碘酸—希夫反应（PAS反应）溶液配制高碘酸—希夫反应（PAS反应）实验步骤•一、切片、粘片•二、脱蜡、水化•二甲苯I15分钟•二甲苯II20分钟•100%酒精I5分钟•100%酒精II5分钟•95%酒精I3分钟•95%酒精II3分钟高碘酸—希夫反应（PAS反应）实验步骤•80%酒精2分钟•70%酒精2分钟•三、PAS染色•蒸馏水洗，入0.5%过碘酸溶液5-10分钟•蒸馏水洗，70%酒精洗，入schiff试剂15-30分钟。•亚硫酸水I1分钟•亚硫酸水II2分钟高碘酸—希夫反应（PAS反应）实验步骤•亚硫酸水III2分钟•流水洗10分钟•四、苏木素染色（淡染）2-3分钟•氨水返蓝30秒•自来水冲洗1分钟高碘酸—希夫反应（PAS反应）实验步骤•五、脱水•70%酒精1分钟•80%酒精1分钟•95%酒精I5分钟•95%酒精II5分钟•100%酒精I5分钟•100%酒精II5分钟•六、透明•二甲苯I10分钟•二甲苯II10分钟•七、封片高碘酸—希夫反应（PAS反应）注意事项•显示肝糖原对动物取材有一定要求。•Schiff试剂要求：碱性品红质量可靠；偏重亚硫酸钠有刺鼻气味为好。•切片经过碘酸酒精溶液----糖原颗粒转粗；•切片经过碘酸水溶液------糖原颗粒较细。高碘酸—希夫反应（PAS反应）实验对照设置实验结果分析