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日本光电MEK-7222K血液分析仪标准操作规程（SOP）一、测定原理MEK-7222K五分类血液分析仪采用半导体激光法进行白细胞五分类的仪器，白细胞分类检测原理是：根据白细胞的大小、核的形状、颗粒的复杂程度对白细胞进行分类。白细胞总数、红细胞总数、血小板总数是根据血细胞相对非导电的性质，悬浮有电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定。1、检测原理：将等渗电解质溶液（被称为稀释液,diluents）稀释的细胞悬液置入一个不导电的容器中，将小孔管(也称传感器transducer)插到细胞悬液中。小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要的组成部分，其内侧充满了稀释液，并有一个内电极，外侧细胞悬液中有一个外电极。检测期间，当电源接通后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流；稀释液通过小孔的管壁上固有的小孔（直径一般100μm.厚度为75μm左右）向小孔内部流动。此时，小孔周围充满了具有导电性的液体，其电子脉冲是稳定的。如果供给电流I和阻抗R是稳定的，根据欧姆定律通过小孔的电压V是不变的（这时V=IR）。当有细胞通过小孔时，由于细胞的导电性质比稀释液要低，在电路中小孔感应区内的电阻的增加，于是瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。电压增加的变化的程度取决于非传导的细胞占据小孔感应区的体积，即细胞体积越大，引起的脉冲越高，产生的脉冲振幅越高，测定脉冲的大小即可测出细胞体积大小，记录脉冲的数量就可测定细胞的数量。。脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数结果。（1）信号发生器：通过小孔的各种血细胞都能产生电阻信号，信号电平的高低与细胞的大小成正比。（2）放大：由于血细胞通过微孔时产生的脉冲讯号非常微弱，不能直接触发计数电路，因此必须通过电子放大器，将微伏讯号放大为伏级脉冲讯号。（3）阈值调节：在计数不同细胞时，应调节阈值电平，以给出合适的阈值度，使计数结果尽量符合实际水平。（4）甄别：通过微孔时的各种微粒（血细胞、细胞碎片、杂质等）均可产生相应脉冲讯号，讯号电平（脉冲幅度）与微粒大小成正比。因除血细胞外，血中细胞外，血中细胞碎片、稀释液中杂质微粒均可产生假讯号，使计数结果偏高。所谓甄别就是利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假讯号去掉，以提高细胞计数的准确性。（5）整形器：经过放大和甄别后的细胞脉冲讯号波形尚不一致必须经过整形器作用，修整为形伏一致标准的平顶波后，才能触发电路。（6）计数：血细胞的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送入计数系统；仪器对大小不同的脉冲进行选择，区分出不同类型的细胞并分别进行计数。2、白细胞计数和分类计数原理：白细胞总数计数根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据这些脉冲的大小，可对白细胞进行计数。白细胞五分类计数是经过溶血剂处理后的白细胞可以保持形态不变，利用鞘流技术使细胞成单列逐个通过激光鞘流池，采用先进可靠的多角度激光散射技术对白细胞进行分类，前向小角获得细胞大小信息，前向大角获得细胞核结构和复杂程度信息，侧向角获得细胞内颗粒状况和复杂性信息，经日本光电专业软件分析出的3D成像信息和清晰的细胞分类组群进行分类并显示出散射图，具体把白细胞分为淋巴（LY%），单核（MO%）嗜中性粒细胞（NE%），嗜酸性粒细胞（EO%）嗜碱性粒细胞（BA%）。。3、红细胞数和血细胞比容测定：血液分析仪使用电阻抗法进行红细胞计数和红细胞比积测定，其原理同白细胞一样。红细胞通过小孔时，形成的相应的脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。脉冲高度叠加经换算即可得到红细胞的比容。稀释的血液进入红细胞检测通道时，其中含有白细胞，因此，红细胞检测的各项参数均含有白细胞因素，但正常血液有形成分中白细胞比例很少约为500：1-700：1，故其影响可忽略不计，但在病理情况下，如白血病，白细胞数明显增加而又伴严重贫血时，即可使所得各项参数产生明显误差。血细胞比容，通常用红细胞平均体积（MCV）与红细胞相乘得出红细胞比积HCT=MCV×RBC。4、血红蛋白测定：当稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解并释放血红蛋白，Hb与溶血剂中的某些成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（540nm）下比色；吸光度的变化与液体中Hb含量成比例，仪器便可显示HGB浓度。5、红细胞其他参数的检测：红细胞平均值，如红细胞平均体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、均是根据仪器检测导出（MCV），或由检测的红细胞数和血红蛋白含量的检测数据，经计算得到，MCH=HGB÷RBCMCHC=HGB÷HCTHCT=MCV×RBC。红细胞体积分布宽度（RDW）则是由血液分析仪测量细胞体积后获得的，是反映外周血红细胞体积异质性的参数，即反映红细胞大小不等的客观指标。当红细胞通进小孔的一瞬间，计数电路得到一个相应的大小的脉冲，脉冲的高度是由细胞体积大小决定的，不同大小的脉冲的信号分别贮存在仪器内装计算机的不同通道内，计算出相应的体积及细胞数后，统计处理而得RDW值。由于RDW来自十几秒内近万个红细胞的检测数据，不但可以克服测量红细胞直径时人为制片因素和主观因素等影响。6、电阻抗法血小板检测原理血小板（platelet,PLT）随红细胞一起在一个系统中进行检测，当各种细胞引起电阻变化，产生的脉冲经数字化后，根据不同的阈值，计算机分别给出血小板和红细胞数目。血小板分别储存于256个通道，直方图范围在2-28fl，。血小板平均体积（meanplateletvolume,MPV）就是PLT体积分布的直方图的产物。二、样本收集生化检验标本的采集规则1.目的规范生化检验标本的采集方法，减少分析前因素对检验结果的影响，保证检验质量。2.范围适用于各种临床生化标本来集。临床标本包括血液，尿液、胸腹水等各种体液等。3.职责3．1门诊和临床各科护士、门诊检验人员负责标本的采集。3．2护工或其他经过相应培训人员负责标本的转运。3．3检验科负责标本的接收和处理，负责指导临床各科和病人如何正确采集标本。1、静脉血：用注射器将血液收集在有抗凝剂K2EDTA（0.07mol/ml血）的度管；停留15分钟进行分析标本采集后应8小时内进行分析。注意：8小时内进行分析！2、毛细血管血：使用微量吸管收集手指10或20μl，并立即放入2ml的稀释液中混匀。60分钟内进行分析分析。三、操作流程（一）准备开机检查。1.试剂是否充足，废液桶是否倒空。2.管道连接良好，打印机有足够的打印纸。3.电源电压正常。（二）开机。1.打开后面板上的开关，前面板主电源灯亮；2.按前面板电源开关，电源灯亮。仪器自动完成清洗管道，充液和电路自检。如无故障，屏幕上显示下列信息：灌注——排空——检查溶血剂——检查稀释液——检查清洗液——灌注3.完成灌注操作后显示准备信息，仪器可用于计数。4.按计数键，计数空白。（不需要通过吸样管稀释液）屏幕上显示结果；确定测定数据。低于或等于以下数值：WBC：≤0.2，RBC：≤0.05，HGB≤：1.0，PLT：≤10；TOC≤100；如超过数值，重复此步骤。（三）操作：A测定静脉血样本1.在含有EDTA-2K抗凝剂的采血瓶中采集2ml全血（不能使用其它抗凝剂，采血量适采血管定），轻轻地上下颠倒管子30次以上进行混匀（不能剧烈混匀，否则将产生气泡和引起溶血）。2.检查仪器设置在静脉血模式；（即仪器前面板上毛细血管血模式灯未亮）3.证实屏幕显示的ID编号。吸样管伸入已混匀的采血瓶底部，使吸样针尖轻触到采血瓶底部；4.按仪器前面板上计数键，完成标本吸样和计数；计数过程中屏幕显示“正在计数”信息；计数后，结果被储存，屏幕上显示直方图。当设置自动打印时，右侧打印灯亮，结果将自动打印；否则，按右侧打印机，手动打印结果；B测定毛细血管样本1.在设置屏幕模式上选择毛细血管血体积（10或20μl）装机时工程师已设置；（详见说明书第三章）2.证实屏幕显示的ID编号，修改ID编号参见说明书第三章；3.按仪器前面板上“毛细血管模式”键，检查毛细血管模式灯亮，显示“毛细血管模式”屏幕；4.将样本杯倾斜，使吸样针进入样本杯内，按放液键。将2ml稀释液放入样本杯内；（当需要制多份液稀释液时，重复此步骤即可）5.用微量毛细血管吸取10或20μl末梢血置于样品管瓶盖，轻轻颠倒样品管，混匀10次以上；6.检查毛细血管血模式灯已亮，将吸样管伸入样品管底部，使吸样针尖轻触管底；7.按仪器前面板上计数健，完成样本吸样和计数。计数过程中屏幕显示“正在计数”信息，计数后，结果被储存和记忆，屏幕上显示直方图，同时测定模式毛细血管血改变为静脉血模式（即毛细血管血模式灯灭）；若长期采用毛细血管血模式，需在设置模式中设置，详见说明书第三章；否则重复第3步，打印结果同静脉血模式一样。（四）关机。关机：按仪器前面板上的电源开关，关闭电源，仪器自动完成清洗后关闭电源。按仪器后面板上的主电源开关，关闭电源，检查主电源指示灯熄灭。四、仪器的校准1、仅在必需时校准，在校准前保证校准品和仪器没有问题仪器出现下述情况时应重新校准仪器：1.新装机时2.连续三次分析两个试管中任何参数的平均值超出设定的范围时2、校准步骤首先对仪器进行大清冼。单一计数PLT10、空白WBC、RBC均为“0”，TOC≤100，无错误代码提示(1)进入校准菜单。选择全血校准模式。(2)连续测定5次校准物。打印出报告单.注意：测试前应充分混匀全血校准品，并确保加样（20微升）准确无误！(3)在5个测试结果中,选取3个最相近的数报,求取项目的平均值.(4)按[菜单]键返回到主菜单,再次进入校准菜单。(5)将各处项目的平均值输入校准菜单中的相应项目上.退出菜单,再次测定校准品；符合要求即可，即完成全血校准工作.注:预稀释血的校准同全血校准步骤相同,但应进入预稀释血校准菜单,同时确保加样（20微升）准确无误！五、仪器的保养1、每天用完仪器后。应执行关机程序,按关机键,仪器开始自动清洗仪器,时间约2分钟,清洗完成后,再关闭左后方电源开关,如果每天测试量大于50个样本,应在50个样本完成后,执行一次清冼程序.2、大保养每月一次(1)将稀释管\清洗液管移入约1000ml的10%次氯酸钠溶液清洗一次后测量2次。(2)当第2次测屏幕上显示测试结果时,马上按停止键(3)让仪器保持此状态30分钟(4)重新把稀释液管液移入稀释液中，把清洗液管移入到清洗液(5)清洗仪器3次，进行5次空白计数。低于或等于以下数值：WBC：≤0.2，RBC：≤0.05，HGB≤：1.0，PLT：≤10；TOC≤100适用日本光电MEK-7222试剂名称规格稀释液20L溶血剂610500ml溶血剂910500ml冲洗液5205.0L强力清洗液6205.0L沈阳世华东科商贸有限公司024-31235878室内质控的实际操作设定靶值：各实验室应对新批号的质控品的各个测定项目自行确定靶值。使用现行的测定方法。定值质控品的标定值只能做为确定靶值的参考。（一般应使用稳定性较长的质控品暂定靶值的设定新批号的质控品与当前使用的质控品一起进行测定。根据20或更多独立批获得的至少20次质控测定结果，计算出平均数，作为暂定靶值，作为下一个月室内质控图的靶值以上暂定靶值作为下一个月室内质控图的靶值进行室内质控；一个月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数（第一个月），以此累积的平均数做为下一个月质控图的靶值。重复上述操作过程，连续三至五个月。常用靶值的设立设定控制限控制限通常以标准差倍数表示。暂定标准差的设定：同暂定靶值的设定。常用标准差的设定：同常用靶值的设定。对于标准差，使用的数据量越大，其标准差估计值将更好。稳定性较差的质控品对于不是每天开展的项目、检测次数较少或有效期较短的项目可先作“即刻法”质控（Crubbs氏法）进行，待累积达20次数据后进行常规控制。采用Crubbs氏法，只需连续测定3次，即可对第3次检验结果进行检验和控制Crubbs氏法具