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课题1菊花的组织培养专题3植物的组织培养技术一、植物组织培养的概念当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株概念：植物组织培养原理：植物细胞的全能性原因：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质实现全能性的条件：离体、营养、激素、其他的外界条件二、植物组织培养的基本过程1.1、什么叫分化？其实质是什么?2、什么叫脱（去）分化、再分化？3、愈伤组织的细胞有什么特点？愈伤组织1.4、简要归纳植物组织培养的过程离体器官、组织或细胞脱分化愈伤组织再分化根、芽植物体三、影响植物组织培养的因素：1、外植体的选取不同的植物组织，培养的难易程度不同同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短也会影响实验结果2、培养基的配制(MS培养基)大量元素：N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：Fe、Zn、Cu、Mn、Mo、B、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时也能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需要提供大量无机营养。无机盐混合物包括植物生长必需的大量元素和微量元素两大类思考3、不同植物激素使用顺序有利于细胞分裂，但细胞不分化细胞既分裂也分化分化频率提高4、植物激素的用量比有利于根的分化，抑制芽的形成有利于芽的分化，抑制根的形成促进愈伤组织的形成比值高时比值低时比值适中结果在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境5、pH、温度、光照（菊花组培）每日光照12h6、无菌操作pH=5.8温度控制在18—22℃制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、实验操作移栽（一）制备MS固体培养基1、配制各种母液2、配制培养基3、灭菌MS培养基含有20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备。（二）外植体消毒菊花茎段流水冲洗加少许洗衣粉软刷轻轻刷洗流水冲洗20min无菌吸水纸吸干70%的酒精6~7s无菌水冲洗无菌吸水纸吸干无菌水冲洗3次0.1%的氯化汞1~2min(三)接种接种前的消毒、灭菌接种过程中的无菌操作（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在18~22℃，并且每日用日关灯光照12h（五）移栽在移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中(六）栽培将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？五、结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析接种3~4d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间（三）生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒质量分数为5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖12h。掀起塑料薄膜后24h才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天，等壮苗后再移植到大田或进行盆栽。统计自己移栽的成活率，看看移栽是否合格植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？思考：菊花的组织培养再分化材料性质、营养物质、调节物质、外植体的消毒接种基本原理:细胞的全能性基本过程:脱分化愈伤组织影响因素：操作流程：配制MS固体培养基培养移栽栽培环境条件课题小结--高挑俏菇凉--心凉菇凉@爱赖床的妹子姐心丶属你巜潮妞VITA萌货阿妹愤青少女Daisy（黛茜）女人无心便无殇っLanki°蓝琪梦莎〃胖嘟嘟的女汉子@女爆君@他说我幼稚@老二婶@丑姑娘萌面大婶爱笑的女生最伤感@他不懂@女王不怕黑弃他可否纯洁美青柠·η姑娘梦@ペ西服小姐醉生梦死的奇葩妹欧派女神hot@小小姑娘。怪美人@哇噻姑娘。EXO我们单身的理由@萌萌傲娇女汉子怪咖软妹@钟意他@待我如女神爱他所爱@李敏镐我男神！硬咖女士,凉薄女子波萝少女芭蕾舞女孩@感性女人丶女霸君一滴柠檬入我心白丝妖娆卖萌嘟嘴萌妹纸~他是梦数理化绝望的姑娘@柔媚~妖瞳十八岁的婚纱爱冒险的姑娘&珛美人，萌萌菇凉″臭女人,囚心小姐。☆昔日女神凤姐。爱笑女※∞帞蕥。-不会哭的女孩不念不忘少年蓝@丑女人做个爱笑的女子°骚美妞绝版い妞儿ヾ能量少女@！猫少女丑女神好姑娘都单身钓凯大队长姐、统领守护奥特妹葵唇绛雪红唇≮飘飘★伊人≯摇摇欲坠的心、浅笑盈盈。沐晴つ森系女孩丿丶渔美人灬钕子我是世勋他二嫂大扎王后@平胸的骄傲！*蓝妹纸林黛玉眼睛大的菇凉@贤情女人大女孩。女主播热欲女郎柔情女硬汉心美不如脸美@地域少女单身姑娘照样嗨@悍妹纸.爱他我累了“词稀”太后金刚芭比软妹心正牌嗲妹^^迎男而上へ@葬他入我心冰冷艳城泡面女神@