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第1页共4页课题1菊花的组织培养班级姓名【教学目标】1、熟悉植物组织培养的基本过程2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化一、基础知识（一）植物组织培养的基本过程1.细胞分化（1）概念：在个体发育中，相同细胞的后代在______、______、____________上发生稳定性差异的过程。（2）过程：如：受精卵增殖→生长→分化形成组织、器官、系统。（3）特点：①持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在______期达到最大限度。②稳定性：细胞分化是稳定的，一般是____________的。③全能性：已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。（4）结果：形成不同的细胞和组织。（5）原因：______________________________________________________的结果。2.细胞全能性（1）定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。（2）原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。（3）实例：已分化的植物细胞，仍具有全能性。高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为__________________。（4）全能性的比较:受精卵胚胎干细胞生殖细胞（卵细胞）体细胞。3.植物组织培养（1）必要条件：①细胞离体；②一定的营养物质、激素和其他外界条件。（2）原理:细胞的全能性（3）相关概念:①外植体：_________________________________________。②脱分化：由高度分化的植物组织或细胞____________的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。③再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。④愈伤组织:__________________,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。（二）影响组织培养的因素1.外植体的选取不同植物的组织培养难度不同；同一种植物的不同组织培养难度不同。菊花的组织培养一般选择__________________________________________。2.培养基的配制(MS培养基)3.不同植物激素浓度，使用顺序和使用量大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等。第2页共4页使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素先细胞分裂素，后生长素同时使用生长素细胞分裂素比值结果比值高时比值低时比值适中4.消毒：在培养的整个过程中，都需要是一个______环境。5.pH、温度、光照菊花：pH=_____；温度控制在____℃；每日用日光灯照射____h。二、实验操作（一）MS固体培养基制备1．配置各种母液①无机物中大量元素浓缩______倍，微量元素浓缩______倍，常温保存。②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。2．配制培养基①配制培养液；②调PH；③培养基的分装。分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。3．灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行灭菌。（二）外植体消毒1．选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。2．消毒①流水冲洗：菊花茎段用流水冲洗后可少许，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。②酒精处理：用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动______次，持续______s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。③消毒液处理：取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗______次，漂净消毒液。第3页共4页课题1菊花的组织培养的第二课时班级姓名（三）接种1．接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精擦拭工作台并用紫外线照射20分钟。2．无菌操作要求操作要在____________完成，每次使用器械后，都需要__________________，接种后立即____________。3．材料的切取和接种4．接种注意事项①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜____________块，菊的茎或叶____________块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。③插入时应注意______，不要______。茎段、茎尖基部插入培养基利于______。（四）培养1．愈伤组织的培养3．试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养。（五）移栽1．打开封口膜移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。2．清洗转移用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。3．移栽：幼苗长壮后，移栽到土壤中。（六）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。[达标测试]1．以下不能说明细胞全能性的实验是（）A．胡萝卜韧皮部细胞培育出植株B．紫色糯性玉米种子培育出植株C．转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株D．番茄与马铃薯体细胞杂交培育出植株2．植物细胞表现出全能性的条件是（）A．给予适宜的营养和外界条件B．将成熟筛管的细胞核移植到去核卵细胞中C．导入其他植物细胞的基因D．脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件第4页共4页3．下列细胞工程技术培育新品种，操作过程中不能形成愈伤组织的是（）A．植物组织培养B．植物体细胞杂交C．动物细胞培养D．转基因植物的培育4．愈伤组织分化过程，培养基中细胞分裂素/生长素的比值较低时诱导分化的是（）A．根B．芽C．叶D．胚性细胞团5．下列植物组织培养的目的中不正确的是（）A．生产人工种子B．生产新品种C．生产杀虫剂D．生产抗体6.关于愈伤组织形成过程的正确叙述是()A.愈伤组织形成是离体的植物细胞分化的结果B.愈伤组织形成是离体的植物细胞脱分化和分裂的结果C.愈伤组织形成是离体的动物细胞分化的结果D.愈伤组织形成是离体的动物细胞脱分化和分裂的结果7.把胡萝卜的单个韧皮部的细胞放入配制的培养基上培养，获得了许多完整的植株，这种繁殖方式和细胞工程技术分别属于（）A.孢子生殖和细胞杂交技术B.无性生殖和植物组织培养C.配子生殖和细胞拆合技术D.卵式生殖和细胞培养8．（10分）请回答下列有关植物组织培养的几个问题：（1）离体植物组织和细胞培养常用的一种培养基是，培养中常用的两种植物激素是和。（2）植物组织培养的一般实验操作步骤包括、外植体消毒、______、培养、移栽、栽培。（3）图示植物组织培养的部分过程：①过程是，②过程是，A是（4）组织培养过程中还需要维持一定的外界条件，一是要有适宜的________，二是______________环境。离体的器官、组织或细胞①A②植物体第5页共4页【基础知识】答案一、基础知识（一）植物组织培养的基本过程1.细胞分化（1）形态、结构、生理功能。（3）特点：①胚胎。②不可逆转。（5）原因：基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达。2.细胞全能性（3）实例：细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质。3.植物组织培养（3）相关概念:①外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官。②脱分化：产生愈伤组织。④愈伤组织:细胞排列疏松而无规则。（二）影响组织培养的因素1.外植体的选取：未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。3.不同植物激素浓度，使用顺序和使用量先细胞分裂素，后生长素，细胞既分裂也分化比值低时，促芽分化，抑根形成4.消毒：无菌。5.pH、温度、光照：pH=5.8；温度18—22℃；照射12。二、实验操作（一）MS固体培养基制备1．配置各种母液：①10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。（二）外植体消毒2．消毒：②酒精处理：2－3次，6－7s。③消毒液处理：3次。（三）接种2．无菌操作要求：酒精灯火焰旁；用火焰灼烧灭菌；盖好瓶盖。4．接种注意事项②胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块。③方向，不要倒插；吸收水分和养分。第6页共4页思考：应该做几组重复、设置几组对照实验？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。（四）培养1．愈伤组织的培养：继代培养。