中药制剂分析第五章各类成分分析

第五章中药制剂中各类化学成分分析药物分析学科掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、定量原理与方法。了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。【目的要求】药物分析学科第五章中药制剂中各类化学成分分析学习方法结构性质分析方法结构：母核、官能团、分子量等物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、旋光性、光谱特性等分析方法：总类成分：化学分析法、分光光度法单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等）药物分析学科一、概述1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。2、含生物碱成分的常用中药：第一节生物碱类成分分析中药名称主要生物碱成分中药名称主要生物碱成分山豆根制川乌马钱子延胡索苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、金雀花碱乌头碱、次乌头碱、新乌头碱马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）、伪马钱子碱、伪番木鳖碱延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片碱、黄连碱苦参麻黄黄连黄柏防己苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、甲基麻黄碱小檗碱、巴马丁、药根碱、黄连碱小檗碱、药根碱、木兰花碱粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质1、溶解性大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂；与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异；季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂；含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质2、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质3、显色反应生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色；这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质4、紫外光谱特性结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。药物分析学科第一节生物碱类成分分析三、定性鉴别1、一般理化鉴别沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在酸性水溶液中进行制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果药物分析学科第一节生物碱类成分分析三、定性鉴别2、薄层色谱法①吸附剂：硅胶、氧化铝；②展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展开剂的极性；③由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。④显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色⑤亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。讨论：如何改进？药物分析学科第一节生物碱类成分分析三、定性鉴别3、纸色谱法可用于生物碱盐或游离碱的鉴别4、HPLC：保留时间定性5、GC：可用于小分子生物碱的鉴别药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定1、化学分析法①主要使用酸碱滴定法。②强碱滴定生物碱盐时，在70%~90%的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行④要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定2、分光光度法（1）直接测定法①不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。②一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（2）酸性染料比色法（例题P124）原理：BH++In-→BH+·In-（水相）→BH+·In-（有机相）关键：酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等；pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷水分的干扰及消除药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（3）雷氏盐比色法（注意事项p126）原理：BH++[Cr(NH3)2(SCN)4]-→BH[Cr(NH3)2(SCN)4]测定方法：（复盐沉淀）复盐沉淀→溶于丙酮（或甲醇）→直接比色测定样品＋定量过量的雷氏盐→过滤→滤液→比色测定λmax=520nm（4）异羟肟酸铁比色法用于含有酯键结构的生物碱的测定药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定1、TLCS①生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定；②选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似；③使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定2、HPLC(例题P128)①以反相高效液相色谱应用较多；②在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；③可在流动相中加入硅醇基抑制剂、离子对试剂等措施以克服游离硅醇基的影响，满足定量分析的要求；④中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的是紫外检测器。药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（二）单体生物碱成分含量测定3、GC①只适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类生物碱等②制备供试品溶液时一般应采用冷提取，净化过程也要避免加热以防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试液。药物分析学科第一节生物碱类成分分析五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法小檗碱（黄连素）Berberine(Umbellatine)（C20H18NO4；336.37）异喹啉类原小檗碱型生物碱、季铵型生物碱、有共轭体系。黄色结晶、碱性较强，易溶于热水或热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿、丙酮，其盐酸盐水中溶解度小。mp：1450℃UV：225，270，331。重量法、滴定法分光光度法薄层扫描法薄层荧光扫描法高效液相色谱法脉冲极谱法流动色谱分析法酶法N+OCH3OCH3OO第一节生物碱类成分分析五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法士的宁（番木鳖碱）Strychnine（C21H20N2O2;334.40）单萜吲哚类生物碱、环叔胺显碱性、酰胺不显碱性。难溶于水，可溶于乙醇，甲醇。易溶于氯仿，微溶于乙醚。mp：268～290℃。UV：282。重量法滴定法分光光度法一阶导数分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法NNOO第一节生物碱类成分分析五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法乌头碱Aconitine（C34H47NO11;645.76）二萜类酯型生物碱。易溶于氯仿、苯、无水乙醇和乙醚，难溶于水、微溶石油醚mp：204℃UV:281,273,230,202．滴定法酸性染料比色法一阶导数紫外分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法H5C2H3COOHNOCH3HOOOCH3OHOOCH3OOC6H5H3C药物分析学科第二节黄酮类成分分析一、概述1、定义：黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮（2-phenylchromone）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。2、含黄酮类成分的常见中药药物分析学科中药名称主要黄酮类成分中药名称主要黄酮类成分黄芩黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素山柰山柰酚、山柰素槐米芦丁、槲皮素广藿香商陆素、芹菜素葛根葛根素、大豆苷、大豆苷元、7-木糖苷葛根素白果山奈酚、槲皮素、芦丁枳实橙皮苷、川陈皮素、新橙皮苷、5-邻-去甲基川陈皮素高良姜高良姜素、山奈素、槲皮素茵陈茵陈黄酮、芫花素、槲皮素补骨脂补骨脂查耳酮、异补骨脂查耳酮山楂槲皮素、金丝桃苷金线草槲皮素、山奈酚第二节黄酮类成分分析二、结构特征及理化性质1、结构特征苯甲酰基桂皮酰基240~280nm300~400nm药物分析学科第二节黄酮类成分分析二、理化性质2、溶解度①黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。②游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中；③黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等。药物分析学科第二节黄酮类成分分析二、理化性质3、酸碱性酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：7,4‘-二羟基7-或4‘-羟基一般酚5-羟基碱性氧原子的性质药物分析学科第二节黄酮类成分分析二、理化性质4、显色反应盐酸-镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应可用于鉴别，但要避免假阳性结果5、紫外光谱特征药物分析学科第二节黄酮类成分分析三、定性鉴别1、理化鉴别盐酸-镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应2、色谱鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺硅胶色谱分离弱极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳；纤维素薄层则适用于分离多糖苷混合物。显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。药物分析学科第二节黄酮类成分分析四、含量测定1、总成分的含量测定直接测定：常用芦丁作对照测定显色测定：常用铝盐做显色剂2、单体黄酮成分的含量测定TLCSHPLC（05版药典全部使用此法）五、常见黄酮类成分（略）药物分析学科第三节三萜皂苷类成分分析一、概述1、概念2、含三萜皂苷类成分的常用中药甘草酸、新甘草苷等甘草酸枣仁皂苷A、B酸枣仁柴胡皂苷a、b、c、d、e、f等柴胡远志皂苷A、B、C、D、E、F、G等远志黄芪甲苷、黄芪皂苷乙等黄芪两头尖皂苷R0、R1、R2、…、R9两头尖人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1和三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等三七人参皂苷Re、竹节参皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ竹节参人参皂苷Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、拟人参皂苷F11等西洋参桔梗苷D、D2等桔梗人参皂苷Ro、Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rh1、Rh2、Rh3、Rs1等人参主要三萜皂苷类成分中药名称主要三萜皂苷类成分中药名称甘草酸、新甘草苷等甘草酸枣仁皂苷A、B酸枣仁柴胡皂苷a、b、c、d、e、f等柴胡远志皂苷A、B、C、D、E、F、G等远志黄芪甲苷、黄芪皂苷乙等黄芪两头尖皂苷R0、R1、R2、…、R9两头尖人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1和三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等三七人参皂苷Re、竹节参皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ竹节参人参皂苷Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、拟人参皂苷F11等西洋参桔梗苷D、D2等桔梗人参皂苷Ro、Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rh1、Rh2、Rh3、Rs1等人参主要三萜皂苷类成分中药名称主要三萜皂苷类成分中药名称第三节三萜皂苷类成分分析二、结构及理化性质ROHHHCOOHO3R2OHOHR1O3206甘草酸人参皂甙(A型)1、溶解度：①可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几不溶于或