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人的价值是由自己决定的。——卢梭1编号：whgzswxx3—0082.2.2动物细胞融合与单克隆抗体班级：________小组名称：_______学生姓名：_______评价：编写：周民审核：李厚亮审核时间：2014∕04∕17学习目标：1、理解并掌握动物细胞融合技术的原理、过程和意义。2、理解掌握单克隆抗体制备的过程和应用。学习重点：动物细胞融合过程和单克隆抗体制备的过程和应用。学习难点：单克隆抗体的制备过程及应用。学习过程：导入：20世纪90年代初，英国科学家成功地利用“生物导弹”单克隆抗体瞄准并杀死了癌细胞，使患血癌的一名67岁退休教授与一名女患者的癌细胞奇迹般消失了。被称为“生物导弹”的单克隆抗体，能够跟踪和杀死细菌、病毒或癌细胞。神奇的单克隆抗体是如何制备出来呢？又有哪些神奇的应用功能呢？一、动物细胞融合：阅读教材P52相关内容，思考并讨论：1、动物细胞融合也称___________，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成________细胞。其特点是。3、原理：_______________。实质：。4、过程：不同_________的两个细胞杂交细胞。5、意义：突破了有性杂交方法的局限性，克服了__________的不亲合性，成为研究细胞遗传、_________、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。思考与探究1：6、○1诱导动物细胞融合的方法有哪几种？特有的方法是什么？。○2灭活病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有的和一些酶能够与细胞膜上的发生作用，使细胞互相凝集，依赖细胞膜的（结构特性），细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。○3“灭活”与“灭菌”相同吗？为什么要对病毒进行“灭活”？○4动物细胞融合的方式有_________种，融合完成的标志是：细胞核融合成一个核。杂交细胞中含有个灭活的仙台病毒PEG、电激等人的价值是由自己决定的。——卢梭2染色体组。7、动物体细胞融合与植物体细胞杂交的比较。（结合教材并查阅相关资料进行归纳比较）动物细胞融合植物体细胞杂交原理（理论基础）目的融合前的细胞处理促融方法具体过程意义和用途二、单克隆抗体制备：阅读教材P52—54相关内容，思考并讨论：（一）、传统抗体的获得：1、方法：①向动物体内反复注射某种________，使动物产生抗体；②从动物________中分离所需抗体。2、特点：_________、纯度低、_________差。3、回顾“免疫”相关知识，回答：能分泌抗体的B淋巴细胞是，动物在免疫反应的过程中体内可产生多达百万种以上的，但每一个浆细胞只分泌一种。B淋巴细胞是高度分化的细胞，在体外培养条件下是不可能。（二）单克隆抗体的制备1、概念：单克隆抗体是由单一_________细胞增殖后分泌的高度专一的抗体。2、制备过程：（认真观察和领悟教材P53的示意图）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原________，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。获得杂交瘤细胞：①将小鼠的_______细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能________又能产生抗体。克隆化培养和抗体检测筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠________内增殖提取单克隆抗体：从细胞________或小鼠的腹水内提取思考与探究2：结合教材P53的示意图思考并回答：（1）许多个B淋巴细胞与许多个骨髓瘤细胞两两融合后的融合细胞类型分别是；此时培养基中共有中类型的细胞。（2）单克隆抗体的制备过程中有两次重要的筛选过程：第一次筛选是用特定的筛选出融合后的；第二次筛选是从上述杂交细胞中进一步筛选出能够产生某种特定抗体的。人的价值是由自己决定的。——卢梭3（3）制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？例：关于应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤如下，其中对单克隆抗体制备的相关叙述中不正确的是()①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞③利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合④将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞⑥从腹水中提取抗体A、实验顺序应当是①②③⑤④⑥B、④过程中产生多个杂交瘤细胞的过程也为克隆C、③过程获得的细胞均可无限增殖D、③到⑤的过程中通常要经过两次筛选3、特点：___________、___________、产量大。4、应用：①最广泛的用途是作为，具有准确、________、简易、快速的优点。利用标记的单克隆抗体，在特定的组织中成像的技术，可以定位诊断、等疾病。②用于_____________和______________。从目前临床试验来看，单克隆抗体主要用于治疗；可以把抗癌细胞的单克隆抗体跟、化学药物或相结合制成，注入体内借助单克隆抗体的作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。“生物导弹”药物的优点是既不，有减少了，因疗效高、将有广阔的应用前景。5、鼠的单克隆抗体能否用于人体疾病的治疗？为什么？易错警示：解答单克隆抗体的有关题目时要特别注意以下几点：1、所用B淋巴细胞是否是经过免疫的B淋巴细胞。2、细胞融合之后需要经过两次筛选，方可获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞。3、利用单克隆抗体制成的“生物导弹”，其选择性是由抗体决定的，与药物无关。课堂训练：1、动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的比较中，正确的是()A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段基本相同C．培养基成分相同D．都能形成杂种细胞2、动物细胞融合的目的中，最重要的是()A．克服远缘杂交不亲和的障碍B．制备单克隆抗体C．培育新物种D．生产杂交细胞3、关于现代生物技术应用的叙述，错误的是()A．蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质B．体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体C．植物细胞培养技术可用于植物茎尖脱毒D．动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育4、右图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称分别为()A．抗体、T淋巴细胞B．抗原、T淋巴细胞C．抗体、B淋巴细胞D．抗原、B淋巴细胞人的价值是由自己决定的。——卢梭45、单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是()A．特异性强、灵敏度高B．体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体C．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”D．由浆细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌6、用a表示骨髓瘤细胞，b表示浆细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别为()A．a、aa、ab、bb、b→a、aa、ab→ab培养B．a、aa、ab、bb、b→ab→产生特定抗体的ab培养C．a、aa、ab、bb、b→ab、bb、b→ab培养D．a、aa、ab、bb、b→aa→能无限增殖的aa培养7、下列不是细胞融合常用的方法是（）A.细胞培养B.灭火的仙台病毒诱导C.电刺激D.聚乙二醇作为诱导剂8、关于动物细胞融合的说法不正确的是（）A.动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程B.动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C.常用的诱导动物细胞融合的手段有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射D.细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能9、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是()○1B淋巴细胞○2小鼠骨髓瘤细胞○3B淋巴细胞自身融合细胞○4小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞○5杂交瘤细胞A.○1○2○3○4B.○1○3○5C.○2○4D.○2○310、关于单克隆抗体，下列叙述中不正确的是（）A.可以制成诊断盒，用于疾病的诊断B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C.可以利用基因工程技术生产D.可以在生物体内生产，不能在体外生产11、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？________。原因是___________________________________________________________。（2）图中②为____________过程，常用______________作为诱导剂。该细胞继承了_____________________，因此不仅能分泌_________________，还有_______________________本领。（3）该方案的目的是___________________。学习小结：学习反思：人的价值是由自己决定的。——卢梭5参考答案一、1、细胞杂交2、杂交具有原来两个或多个细胞的遗传物质（或遗传信息）3、细胞膜的流动性核融合（形成单核细胞）4、DNA5、远缘杂交细胞免疫6、○1物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇或PEG）生物法（灭火的病毒）○2灭活的病毒糖蛋白糖蛋白流动性○3不相同，“灭活”是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构（即“灭活”并未杀死病原体，只是降低其生物活性使其失去感染能力）；“灭菌”则是采用物理或化学手段彻底杀死病原体未灭活的病毒具有较强的感染能力，易导致动物细胞病变死亡○4347、动物细胞融合植物体细胞杂交原理（理论基础）细胞膜的流动性细胞膜的流动性和细胞的全能性目的主要是为获得细胞产品获得杂种植株融合前的细胞处理用胰蛋白酶处理动物组织获得单个细胞用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁获得相应的原生质体促融方法物理法、化学法、生物法（灭火的病毒）物理法（离心、振动、电激）、化学法（聚乙二醇或PEG）具体过程（略）（略）意义和用途制备单克隆抗体克服植物远缘杂交不亲和性障碍，获得杂种植物新品种二、（一）1、抗原2、产量低特异性3、浆细胞特异性抗体特异性抗体无限增殖（二）1、杂交瘤2、蛋白骨髓瘤无限增殖腹腔培养液思考与探究2（1）B淋巴细胞—B淋巴细胞融合型骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞融合型B淋巴细胞—骨髓瘤细胞融合型（杂交瘤细胞）5（2）选择性培养基杂交细胞（杂交瘤细胞）杂交瘤细胞（3）哺乳动物经相关抗原感染后，其体内会形成相应的浆细胞，浆细胞能分泌相应的抗体杀死这些抗原。而每一种浆细胞只能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该特异性抗体的浆细胞大量增殖，但浆细胞具有产生单一抗体的能力却不能在体外增殖。骨髓瘤细胞能在体外培养条件下无限增殖却不能产生抗体。可以把一种浆细胞与骨髓瘤细胞进行融合形成杂交瘤细胞，它兼具两个亲本细胞的特性，在体外培养条件下既能无限增殖，又能产生出某种特异性的抗体。例题：C3、特异性强灵敏度高4、①诊断试剂高效同位素肿瘤心血管畸形②治疗疾病运载药物癌症放射性同位素细胞毒素生物导弹定向损伤正常细胞药物用量毒副作用小5、不能。因为鼠的B淋巴细胞所产生的抗体与人体B淋巴细胞产生的抗体是不同的。课堂训练1、D2、B3、B4、D5、B6、B7、A8、C9、A10、D11、不能没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞细胞融合灭活病毒（或PEG）双亲细胞的遗传物质特异性抗体在体外培养条件下大量增殖制备单克隆抗体