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A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。融合形成的杂交细胞具有两个（或多个）细胞的遗传信息，通过动物细胞培养，杂交细胞表现出两个（或多个）亲本的特点。诱导方法物理法：化学法：生物法：灭活的病毒（特有的方法）原理：（与植物细胞融合的基本原理相同）离心、电激、振动聚乙二醇(PEG)细胞膜的流动性动物细胞融合的实质或结果：细胞核融合灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）课本P52思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。1.3动物细胞融合技术的意义和应用突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段意义：应用：制备单克隆抗体（最主要的应用）总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、生物方法获得完整植株主要用于制备单克隆抗体从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：抗体的传统生产方法抗原反复注射动物产量低纯度低特异性差灵敏度低•运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？•能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？B淋巴细胞在体外不能无限增殖。二：动物细胞融合的成功应用——单克隆抗体的制备思考单克隆抗体的制备—极富创造性的方案将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只有某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）第一次筛选用特定的选择性培养基目的：筛选出杂交瘤细胞第二次筛选目的：筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养目的：获得产生相应抗体的B细胞1.分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）小鼠除了受到注射的抗原的刺激外，小鼠在生活过程中还可能受到其他抗原的刺激，因此从小鼠体内取出的多个B淋巴细胞可能产生多种不同的抗体。2.细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）1、单抗的制备过程要点：1.第一次筛选：2.在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG，B，G在此培养基上不能存活。）2.第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。1、单抗的制备过程要点：2）、为何要进行两次筛选？3）、如何进行第2次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。问题强化：1）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体2.2单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强灵敏度高并能大量制备“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（)A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁BA【例3】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞A【例4】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体B×①15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是______________________________________________。（2）图中②为过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了_____________________，因此不仅能分泌___________，还有本领。不能没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的B淋巴细胞细胞融合灭活病毒双亲细胞的遗传物质特异性抗体大量增殖制备单克隆抗体（3）该方案的目的是_________________________。比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交动物细胞融合课后作业：比较动、植物细胞杂交技术单克隆抗体:单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体。