第二章--药物的鉴别试验

第二章药物的鉴别试验§2-1药物鉴别试验的定义与目的1、药物的鉴别试验：是根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学或生物学方法来判断药物的真伪。它是药品质量检查工作中的首项任务。2、药物鉴别：鉴别项下规定的试验方法，仅反映该药品某些物理、化学或生物学等性质的特征，不完全代表对该药品化学结构的确证。§2-2鉴别试验的项目一、性状药物的性状反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。（一）外观药品的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。（二）溶解度在一定程度上反映了药品的纯度、晶型或粒度。（三）物理常数测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯度。《中国药典》2010版收载的物理常数包括相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值、酸值等。1、熔点（1）固体融化成液体的温度（2）熔融同时分解的温度（3）自初熔至全熔的一段温度2、比旋度20][D在一定波长与温度下，偏振光通过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测定的旋光度。反映手性药物特性及其纯度的主要指标。3、吸收系数在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度。有两种表示方式：版收载药典》百分吸收系数：《中国摩尔吸收系数2010用以区别药品、检查纯度、测定制剂的含量。二、一般鉴别试验依据：某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。的官能团反应有机物：大都采用典型反应阴离子和阳离子的特殊无机物：根据其组成的一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不是证实是哪一种药物。（一）有机氟化物1、方法：取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，使燃烧完全后，充分振摇，取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色，同时做空白对照试验。2、现象：蓝紫色络合物（二）有机酸盐1、水杨酸盐（1）方法一：取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴。弱酸性条件：呈紫色中性条件：呈红色（2）方法二：取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。2、酒石酸盐方法：取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管的内壁成银镜。（三）芳香第一胺类方法：取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。（四）托烷生物碱类方法：取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇2-3滴湿润，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。后马托品水解产物没有莨菪酸，不能发生此反应，可以此作为区别。（五）无极金属盐1、焰色反应钠离子显鲜黄色、钾离子显紫色钙离子显砖红色、钡离子显黄绿色（自绿色玻璃中透视，蓝色）2、铵盐方法：取供试品，加过量的氢氧化钠试液后，加热，即分解，发生氨臭；遇用水湿润的红色石蕊试纸，能使之变蓝色，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。ClNHClNHHgHgNHClHgOHNHOHNH42322234)()(2黑色（六）无机酸根1、氯化物（1）方法一：取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。（2）方法二：取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸润湿，缓缓加热，即产生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。2、硫酸盐（1）方法一：取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。（2）方法二：取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。（3）方法三：取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）。3、硝酸盐（1）方法一：取供试品溶液，置试管中，加等量的硫酸，小心混合，冷却后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使成两液层，接界面显棕色。（2）方法二：取供试品溶液，加硫酸与铜丝（或铜屑），加热，即发生红棕色的蒸气。（3）方法三：取供试品溶液，滴加高锰酸钾试液，紫色不应褪去（与亚硝酸盐区别）。三、专属鉴别试验药物的专属鉴别试验是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。专属鉴别试验是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。§2-3鉴别方法一、化学鉴别法（一）呈色反应鉴别法指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观察的有色产物。1、三氯化铁显色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基。2、异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类。3、茚三酮呈色反应：用于结构中含有脂肪氨基药物。4、重氮化-偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基。5、氧化还原显色反应及其它颜色反应。（二）沉淀生成反应鉴别法1、与重金属离子的沉淀反应。2、与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应——多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。3、其他沉淀反应。（三）荧光反应鉴别法药物本身可在可见光下发射荧光，药物与适当试剂反应后发射荧光。（四）气体生成反应鉴别法大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物可经强碱处理后加热产生氨（胺）气。化学结构中含硫的药物可经强酸处理后加热产生硫化氢气体（硫喷妥）。含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸气。二、光谱鉴别法（一）紫外光谱鉴别法1、测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长。2、规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度。3、规定吸收波长和吸收系数法。4、规定吸收波长和吸收度比值法。（二）红外光谱鉴别法对比供试品红外吸收光谱与药品标准红外光谱的一致性。尤其是指纹一致性。（三）近红外光谱法近红外谱区750-2500nm（12800-4000cm-1）近红外分光光度法具有快速、准确、对样品无破坏的检测特性。（四）原子吸收法利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度可以进行定性、定量分析。（五）核磁共振法（六）质谱鉴别法将被测物质离子化后，在高真空状态下按离子的质荷比（m/z）大小分离，而实现物质成分和结构分析的方法。三、色谱鉴别法利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（Rf值或保留时间）进行的鉴别试验。（一）薄层色谱鉴别法1、供试品与同浓度对照品溶液颜色（或荧光）与位置（Rf值）应一致，斑点大小应大致相同。2、供试品与对照品等体积混合，应显示单一，斑点紧密。3、选用与供试品化学结构相似药物对照品或杂质对照品，两者的比移值应不同。4、上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。（二）高效液相色谱和气相色谱鉴别法要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。四、显微鉴别法显微鉴别主要用于中药及其制剂的鉴别，通常采用显微镜对药材的（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。五、生物学法六、指纹图谱与特征图谱鉴别法§2-4鉴别试验的条件及方法验证一、溶液的浓度二、溶液的温度三、溶液的酸碱度四、试验时间五、鉴别方法的验证1、专属性2、耐用性