肾穿活检组织标本制作与染色

肾穿活检组织标本制作与染色余姚市人民医院一﹑取材肾活检标本经皮质穿刺取检，分皮质和髓质，在解剖显微镜下，肾皮质组织色较淡，肾小球为如针尖大小的红色小点，不规则分布。穿刺所得的组织，一般包括以下几种成分：皮质组织；皮髓交界组织；皮质-髓质-皮质组织。•固定固定液：常规:１０％中性福尔马林。电镜:3%戌二醛。固定时间：最好不低于8小时。脱水、包埋、切片随常规脱水机脱水，尽量用小包埋模块包埋，以利于连续切片。切片厚度１－２um，烤片温度60℃。1小时。•HE染色：观察组织学和细胞学形态，通过它能显示整个疾病的全貌，明确病变的性质和分布的特点•染色结果肾小球轮廓清晰，细胞核、质蓝红对比鲜明，各种细胞成分着色鲜艳。•特殊染色六氨银染色肾小球肾炎的病变主要表现在肾小球，尤其是肾小球基膜的改变。常规HE染色不能清晰地显示基膜，主要通过PAMS染色才能将基膜清晰地显示出来。•染色原理：肾小球基膜富含粘多糖，必须经过氧化才能暴露醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。•试剂配制（1）1%高碘酸水溶液（2）5%铬酸水溶液（3）2%草酸水溶液（4）3%六次甲基四胺水溶液（5）5%硝酸银水溶液（6）5%硼砂水溶液（7）0.1%氯化金水溶液（8）3%硫代硫酸钠水溶液•方法（1）1%高碘酸氧化10min，蒸馏水洗。（2）5%铬酸氧化20min，蒸馏水洗。（3）2%草酸泡洗1min，蒸馏水洗三次。（4）新鲜配制六胺银溶液（六胺银染液：3%六次甲基四胺水20ml，5%硝酸银1ml，四硼酸钠2.4ml）用50ml规格的染色玻璃缸750W微波炉的中低档预热。（5）将切片置入六胺银溶液中于60度水浴箱中孵育15～25min（6）蒸馏水漂洗3次。（7）0.1%氯化金调色1～2min，蒸馏水洗。（8）3%硫代硫酸钠处理1～2min，蒸馏水洗。（9）复染苏木素，伊红（10）常规脱水，中性树胶封固Masson三色染色•Masson三色染色主要是用来观察肾小球嗜复红蛋白沉积物（免疫复合物）及肾脏内胶原纤维增生等。我科采用改良后方法，通过组织切片的补充固定，试剂浓度的改良组合、调整染色时间。对肾穿活检切片进行了新旧两种方法的试验比较，取得了较为满意的效果•高碘酸-无色品红•在肾小球疾病中，常导致肾小球基底膜的改变，HE染色无法清晰显示基底膜，PAS对显示基底膜的诊断有一定意义