血栓与止血检验

AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血栓与止血成都大学附属医院检验科王秋菊AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.教学内容第一节血管壁检测第二节血小板检测第三节凝血因子检测第四节抗凝系统检测第五节纤溶活性检测第八节检测项目的选择和应用AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.教学目的与要求（2学时）掌握内容：掌握血管、血小板、凝血因子、抗凝系统、纤溶活性检测项目的临床意义。熟悉内容：各检测项目的原理、方法及参考值。DIC检查的项目及临床意义。了解内容：止凝血与抗凝血机制。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.生理状态下血管中流动的血液为什么不凝固？破损的血管为什么能止血？机体内存在着复杂的止、凝血系统和抗凝系统2020/4/214AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.正常止凝血过程(止凝血机制)有三大因素参与二三一血管血小板凝血因子AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.生理性止凝血机制主要包括三个时相：血管血小板凝血因子血管收缩血小板血栓形成纤维蛋白凝块形成与维持AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.止血、纤溶处于相互制约、动态平衡状态，保持血管内血流畅通。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.第一节血管壁检测AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血管壁的止血作用ECECECECEC神经反射体液中的活性物质管腔收缩血流变慢出血/停止1、收缩反应：神经、体液调节AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血管壁的止血作用2、激活血小板（vWF）：ECECECECEC胶原vWF胶原-vWF-血小板血小板粘附AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血管壁的止血作用3、促进血液凝固过程：ECECECECEC组织因子ECECECECEC3、促进血液凝固过程：组织因子外源性凝血途径胶原激活FⅫ内源性凝血途径AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血管壁的止血作用4、抑制纤维蛋白溶解ECECECECEC分泌PAI抑制纤维蛋白溶解AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血管壁检测——筛检试验1.出血时间测定（BT）2.束臂试验(CRT，毛细血管脆性试验)AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.1.出血时间测定（Bleedingtime,BT）【原理】测定皮肤受特定条件的外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。是反映毛细血管壁和血小板止血功能常用的筛选试验。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【方法】出血时间测定器法【参考值】出血时间测定器法6.9±2.1min，超过9min为异常AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】受血小板数量和血管壁影响。出血时间延长：ﻯ血小板数量、功能异常：血小板无力症ﻯ血管壁异常：遗传性毛细血管扩张症ﻯ综合因素：VWD、DIC出血时间缩短：ﻯ见于某些严重的高凝状态或血栓性疾病：脑血栓、心肌梗死、糖尿病、高血脂、下肢静脉栓塞、DIC高凝期AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【操作】【参考值】阴性：5cm直径圆圈中的出血点数：男性少于5个；女性及儿童少于10个AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】新出血点超过正常为阳性，见于：血管壁的结构和（或）功能缺陷：遗传性毛细血管扩张症、血管性血友病血小板的量、功能异常血小板减少症、血小板功能缺陷症AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.诊断试验血管性血友病因子抗原测定（vWF：Ag）血管性血友病因子活性测定（vWF：A）vWvWDD的分型诊断vWF:Ag、vWF:A和FVIII:C正常排除vWD血友病AvWF:A/vWF:Ag0.7和FVIII:C/vWF:Ag0.7vWDI型vWF:A/vWF:Ag0.7和FVIII:C/vWF:Ag0.7vWD2A、2B、2M型vWF:A/vWF:Ag0.7和FVIII:C/vWF:Ag0.7vWD2N亚型和血友病AAFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.诊断试验血浆凝血酶调节蛋白抗原测定（TM：Ag）血浆6-酮-前列腺素F1测定（PGI2的降解产物）AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.第二节血小板检测AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血小板的止血作用（一）维持血管壁的完整性，毛细血管的通透性生理情况下，血小板依层流作用沿着毛细血管内壁排列，维持其完整性。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血小板的止血作用（二）参于止血1、血小板的初期止血功能聚集、粘附、释放反应、血块收缩由血管和血小板参与的止血过程。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.2.血小板的二期止血功能主要是PF3参与，提供凝血的催化表面。由凝血因子参与的止血过程。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血小板检测筛选试验：血小板计数血块收缩试验诊断试验：血小板相关免疫球蛋白的测定血小板粘附功能测定血小板聚集功能测定AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血小板计数显微镜手工计数法血细胞分析仪计数流式细胞仪分析正常值：（100～300）×109/LPC＜20×109/L自发性出血危险AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】血小板减少：ﻯ血小板生成障碍：见于造血功能障碍（再障、急白、急性放射病）ﻯ血小板破坏或消耗增多：ITP、DIC、TTPﻯ血小板分布异常：脾肿大、血液被稀释血小板增多：ﻯ原发性增多：骨髓增殖性疾病（真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化早期、慢粒急性失血、溶血后）ﻯ反应性增多：急性感染、溶血、某些癌症患者AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.2、血块收缩试验（clotretractiontest,CRT）【原理】血液凝固后，由于血小板释放的PF4（血栓收缩蛋白），使血块收缩，血清析出。测定析出血清量占全血量的百分数来表示血块收缩的程度，可间接了解血小板功能情况，此即血块收缩试验（CRT）。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【正常参考值】∮定量法（凝块法）：37℃1小时其血块收率为65.8%±11.0%∮定性试验：37℃2小时开始收缩，18-24小时完全收缩（血清占全血1/3-1/2）。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.血块收缩试验影响因素血小板功能•纤维蛋白原数量血浆异常蛋白AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【结果判断】定性试验完全收缩部分收缩收缩不良不收缩AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】血块收缩主要取决于血小板、纤维蛋白原、红细胞量等因素。血块收缩不良或不收缩：ﻯ血小板数量、异常：血小板无力症、ITP、血小板增多症ﻯ纤维蛋白原异常：低（无）纤维蛋白原血症ﻯ红细胞增加：红细胞增多症血块收缩过度：ﻯ先天性/获得性ⅩⅢ缺乏症AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.诊断试验（一）血小板相关免疫球蛋白测定(plateletassociatedimmunoglobulin,PAIg）包括PAIgG、PAIgM和PAIgA【方法】ELISA法测定AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【参考值】PAIgG：（0～78.8）ng/107血小板PAIgM：（0～7.0）ng/107血小板PAIgA：（0～2.0）ng/107血小板AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】本试验是免疫性血小板减少性紫癜诊断、疗效及预后估计的重要指标，也有助于其他血小板疾病的免疫机制研究。PAIg增高：见于ITP、同种免疫性血小板减少性紫癜、药物免疫性血小板减少性紫癜等。以ITP阳性率最高。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.诊断试验（二）血小板粘附试验（plateletadhesiontest,PAdT）【玻璃珠柱法原理】血小板具有体内粘附于内膜下组织或体外粘附于带负电荷物质的性质。当血液通过玻珠柱时，血小板可粘附在充满玻珠的塑料管内，血中血小板数会因此而降低。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【正常参考值】玻璃珠柱法：62.5%±8.6%通过柱前血小板数/通过柱前血小板数为粘附率AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】PAdT增高ﻯ血栓前状态和血栓性疾病：心梗、糖尿病、深静脉血栓形成、妊高症、动脉粥样硬化PAdT减低ﻯ血小板因素：血小板无力症、抗血小板药ﻯ止血综合因素：vWDﻯ其他：尿毒症、肝硬化、异常蛋白增多、MDS、ALAFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.（三）血小板聚集试验（plateletaggregationtest,PAgT）【方法】仪器法，常用比浊法PRP血浆血小板诱导剂如ADP、肾上腺素、胶原、瑞斯托霉素血小板聚集血浆浊度减低透光度增加根据血小板聚集曲线的变化了解血小板聚集的程度和速度。AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.【临床意义】PAgT增高ﻯ血栓前状态和血栓性疾病PAgT减低ﻯ先天性：血小板无力症、血管性血友病（VWD）ﻯ后天性：骨髓增殖性疾病、服用抗血小板药物AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.诊断试验（四）血小板P-选择素测定（酶标法）GMP-140（五）血小板促凝活性测定（流式细胞术）PS（六）血浆血栓烷B2（TXB2）测定AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.第三节凝血因子检测AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.凝血因子参与凝血的因子：因子常用名称因子常用名称因子常用名称I纤维蛋白原Ⅱ凝血酶原Ⅲ组织因子（TF）ⅣCa2+Ⅴ易变因子Ⅶ稳定因子Ⅷ抗血友病甲因子ⅨChristmas因子ⅩStuart-Prower因子Ⅺ血浆凝血激酶先质ⅫHageman因子ⅩⅢ纤维蛋白稳定因子PK激肽释放酶原HMWK高相对分子质量激肽原主要合成场所：肝脏生理状态下以未激活状态存在AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.凝血机理内源凝血途径外源凝血途径第一阶段：凝血活酶形成第三阶段：纤维蛋白形成第二阶段：凝血酶形成共同凝血途径内源凝血系统外源凝血系统AFFILIATEDHOSPITALOFCHENGDUUNIVERSITY.凝血机理第一阶段：凝血活酶，又称凝血酶原酶（Ⅹa-Va-Ca2+-PF3复合物）形成因子Ⅹ的激活有两条途径：内源性凝血途径（次要）外源性凝血途径（主要,当形成凝血酶后使内凝途径进一步放大）AFFILIATEDH